2017년 1월에서 4월까지 강원도 고성에서 사육중인 명태 친어로부터 수정란을 채집하여 신경괴사증바이러스(nervous necrosis virus, NNV)의 검출을 시도하였다. 매 회 50 mg씩 수정란을 채집하여 이를 1 set로 간주하였으며 총 37 set를 제작하였다. RNA를 추출하고 cDNA를 합성하여 NNV를 대상으로 reverse transcriptase PCR을 실시하였다. 그 결과, one-step PCR법으로는 37 set의 시료가 모두 음성이었으며, two-step PCR법으로는 5.4% (2/37)의 시료가 양성을 나타내었다. 그러나, band의 농도가 매우 낮아 시퀀싱은 불가능하였다. 본 연구의 결과 및 이전 연구의 결과로부터 현재 국내에서 양식하고 있는 명태에서 NNV 감염에 의한 폐사는 발생하지 않는 것으로 추정된다. 하지만, 지속적인 모니터링 및 양성 개체 출현 시 바이러스 분리의 시도 등은 필요할 것으로 생각된다.
2017년 1월에서 4월까지 강원도 고성에서 사육중인 명태 친어로부터 수정란을 채집하여 신경괴사증바이러스(nervous necrosis virus, NNV)의 검출을 시도하였다. 매 회 50 mg씩 수정란을 채집하여 이를 1 set로 간주하였으며 총 37 set를 제작하였다. RNA를 추출하고 cDNA를 합성하여 NNV를 대상으로 reverse transcriptase PCR을 실시하였다. 그 결과, one-step PCR법으로는 37 set의 시료가 모두 음성이었으며, two-step PCR법으로는 5.4% (2/37)의 시료가 양성을 나타내었다. 그러나, band의 농도가 매우 낮아 시퀀싱은 불가능하였다. 본 연구의 결과 및 이전 연구의 결과로부터 현재 국내에서 양식하고 있는 명태에서 NNV 감염에 의한 폐사는 발생하지 않는 것으로 추정된다. 하지만, 지속적인 모니터링 및 양성 개체 출현 시 바이러스 분리의 시도 등은 필요할 것으로 생각된다.
We previously monitored nervous necrosis virus (NNV) in brain samples of artificially produced walleye Pollock (Gadus chalcogrammus) seedlings, with a low prevalence (1.8%, 1/55) but no clinical symptoms. Given that this virus is considered one of the most serious viral threats for almost all marine...
We previously monitored nervous necrosis virus (NNV) in brain samples of artificially produced walleye Pollock (Gadus chalcogrammus) seedlings, with a low prevalence (1.8%, 1/55) but no clinical symptoms. Given that this virus is considered one of the most serious viral threats for almost all marine aquaculture fish species and characterized by both vertical and horizontal transmission, it would be interesting to monitor NNV in the fertilized eggs as well. We collected fertilized walleye pollock eggs from the farms located in Goseong during January to March, 2017. Approximately 50 mg of eggs were periodically taken from 4 each different batches, and 37 different pooled sample sets in total were made during sampling period. RNA was extracted from the eggs by using Trizol and cDNA was synthesized for RT-PCR for detecting NNV. Primers and PCR conditions are the same as previously described. As a result, NNV was not detected from any of the sample sets by one step PCR (0%, 0/37), suggesting NNV may not be a threat in walleye pollock aquaculture in Korea at present time. However, continuous monitoring for NNV should be conducted because introducing a new species into aquaculture industry involves potentials of disease outbreak and NNV is already known to cause outbreaks in gadoid fishes.
We previously monitored nervous necrosis virus (NNV) in brain samples of artificially produced walleye Pollock (Gadus chalcogrammus) seedlings, with a low prevalence (1.8%, 1/55) but no clinical symptoms. Given that this virus is considered one of the most serious viral threats for almost all marine aquaculture fish species and characterized by both vertical and horizontal transmission, it would be interesting to monitor NNV in the fertilized eggs as well. We collected fertilized walleye pollock eggs from the farms located in Goseong during January to March, 2017. Approximately 50 mg of eggs were periodically taken from 4 each different batches, and 37 different pooled sample sets in total were made during sampling period. RNA was extracted from the eggs by using Trizol and cDNA was synthesized for RT-PCR for detecting NNV. Primers and PCR conditions are the same as previously described. As a result, NNV was not detected from any of the sample sets by one step PCR (0%, 0/37), suggesting NNV may not be a threat in walleye pollock aquaculture in Korea at present time. However, continuous monitoring for NNV should be conducted because introducing a new species into aquaculture industry involves potentials of disease outbreak and NNV is already known to cause outbreaks in gadoid fishes.
NNV는 감염된 친어를 통해 수정란, 자어에도 전염되는 수직 전파가 흑점줄전갱이, 노랑가자미(Ver- asper moseri) 등에서 알려져 있으며, 따라서 VNN의 확산을 막기 위해서는 일상적인 방역 대책은 물론 수정란의 소독 및 친어의 바이러스 검사도 필요하다(김 등, 2017). 본 연구에서는 명태에서 얻어낸 수정란을 정기적으로 채집하여 NNV의 감염 여부를 PCR법으로 확인해 보았다.
제안 방법
5 mM dNTPs, 10 mM DTT, 10 unit reverse tran- scriptase (Bioneer, Korea)를 첨가하여 42℃에서 1시간 동안 반응시켜 cDNA를 합성하였다. 이후, 95℃에서 5분간 처리하여 남아있는 효소 활성을 제거하고 얻어낸 산물을 사용하여 RT-PCR (reversetranscriptase PCR)을 수행, 증폭산물의 유무를 확인하였다. 실험에 사용한 primer 설계 및 RT-PCR 조건은 Cha et al.
대상 데이터
강원도 한해성 수산자원센터에서 사육하고 있던 명태 성어로부터 수정란을 채집하였다. 2017년 1월부터 4월까지 명태 친어가 수용된 수조 4개에서 자연 산란이 이루어졌으며 수조 별로 부상란을 각각 매회 소량 채집하여 그 중 50 mg을 Eppendorf tube에 수용하였다.
성능/효과
본 연구에서는one-step PCR에서 모든 시료가 음성을 나타내어 바이러스 분리를 시도하지 않았다. 또한 이들 수정란에서 부화된 치어를 일부 채집하여 분석한 결과 역시 NNV는 전혀 검출되지 않아(data not shown), 현재 국내에서 양식하고 있는 명태에서 NNV 감염에 의한 폐사는 발생하지 않는 것으로 추정된다.
후속연구
, 2015) 지속적이고 장기적인 질병 모니터링을 통해 많은 정보를 축적할 필요가 있다. 특히, 수종의 대구과 어류에서 NNV의 감염에 의한 폐사가 이미 보고된 바 있어(Doan et al., 2017), 명태의 경우에도 지속적인 NNV의 모니터링이 필요할 것으로 생각된다.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
명태란 무엇인가?
명태(Gadus chalcogrammus)는 대구목(order Gar- diformes) 대구과(family Gadidae)에 속하는 한해성 어류이며, 북태평양 해역에 광범위하게 서식하고 있다. 한반도 해역은 북서태평양에서 명태 분포의 남방 한계선으로 알려져 있으며 명태는 동해의 수심 200~350 m에 주로 분포하는 것으로 추정된다(Kang and Kim, 2015; 강 등, 2013).
명태가 분포하는 곳은?
명태(Gadus chalcogrammus)는 대구목(order Gar- diformes) 대구과(family Gadidae)에 속하는 한해성 어류이며, 북태평양 해역에 광범위하게 서식하고 있다. 한반도 해역은 북서태평양에서 명태 분포의 남방 한계선으로 알려져 있으며 명태는 동해의 수심 200~350 m에 주로 분포하는 것으로 추정된다(Kang and Kim, 2015; 강 등, 2013). 명태는 우리나라에서 경제적, 문화적으로 매우 중요한 어종이며 19세기 초부터 이미 중요한 먹거리로 간주되어 어획량이 1930년대에는 연평균 30만 톤 정도였으나 이후 급속히 감소하여 70년대에는 7만 톤, 2000년대에 들어서는 거의 자취를 감추었다 (Kang and Kim, 2015).
VHSV 및 NNV에 감염된 명태의 검출 방법과 바이러스 취약 정도는?
남 등 (2017)은 부화 후 양성 중인 명태에서 어병 바이러스를 모니터링 하였으며, viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV) 및 nervous necrosis virus (NNV)를 일부 개체에서 PCR법으로 검출하였다. 그러나, NNV에 감염된 1개체를 제외하고는 모두 two-step PCR법으로 검출이 되었으며, 바이러스의 감염이 의심되는 대량 폐사는 발생하지 않아 바이러스의 역가는 매우 낮을 것으로 추정하였다.
참고문헌 (14)
Cha, S.J., Do, J.W., Lee, N.S., An, E.J., Kim, Y.C., Kim, J.W. and Park, J.W.: Phylogenetic analysis of betanodaviruses isolated from cultured fish in Korea. Dis. Aquat. Org. 77:181-189, 2007.
Doan, Q.K., Vandeputte, M., Chatain, B., Morin, T. and Allal, F.: Viral encephalopathy and retinopathy in aquaculture: a review. J. Fish Dis. 40: 717-742, 2017.
Gagne, N., Johnson, S.C., Cook-Versloot, M., MacKinnon, A.M. and Olivier G.: Molecular detection and characterization of nodavirus in several marine fish species from the northeastern Atlantic. Dis. Aquat. Org. 62: 181-189, 2004.
Johnson, S.C., Sperker, S.A. and Leggiadro, C.T.: Identification and characterization of a piscine neuropathy and nodavirus from juvenile Atlantic cod from the Atlantic Coast of North America. J. Aquat. Ani. Health 14: 124-133, 2002.
Kang, S.K. and Kim, S.A.: What caused the collapse of walleye pollock population in Korean waters ? KMI Int. J. Maritime Affairs and Fisheries 7: 43-58, 2015.
Lafferty, K.D., Harvell, C.D., Conrad, J.M., Friedman, C.S., Kent, M.L., Kuris, A.M., Powell, E.N., Rondeau, D. and Saksida, S.M.: Infectious diseases affect marine fisheries and aquaculture economics. Ann. Rev. Mar. Sci. 7: 471-6, 2015.
Mori. K., Nakai. T., Muroga, K.. Arimoto. M., Mushiake, K. and Furusawa, I.: Properties of a new virus belonging to Nodaviridae found In larval striped jack (Pseudocaranx dentex) with nervous necrosis. Virology 187: 368-371, 1992.
Mori K., Mangyoku, T., Iwamoto, T., Arimoto, M., Tanaka, S. and Nakai T.: Serological relationships among genotypic variants of betanodavirus. Dis. Aquat. Org. 57: 19-26. 2003.
Oh, M.J., Jung, S.J. and Kitamura, S.I.: Comparison of the coat protein gene of nervous necrosis virus (NNV) detected from marine fishes in Korea. J. World. Aquaculture Soc. 36: 223-227, 2005.
Seo, J.Y. and Kwon, O.N.: Naturally collection and development until yolk absorption of domestic walleye pollock Theragra chalcogramma fertilized eggs and larvae. J. Kor. Academia-Industrial Coop. Soc. 18: 49-54, 2017.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.