[논문]대황목단탕의 메티실린 내성 황색 포도상구균에 대한 항균활성

한형선; 권동렬; 강옥화

doi:10.6116/kjh.2020.35.3.47.

대황목단탕의 메티실린 내성 황색 포도상구균에 대한 항균활성
The Antimicrobial Activity of Daehwangmokdan-tang against Methicillin-resistant Staphylococcus aureus 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.35 no.3, 2020년, pp.47 - 54

한형선 (원광대학교 약학대학 한약학과, 원광한약연구소) , 권동렬 (원광대학교 약학대학 한약학과, 원광한약연구소) , 강옥화 (원광대학교 약학대학 한약학과, 원광한약연구소)

Abstract ▼ AI-Helper

Objective : Infectious diseases are a growing problem worldwide by Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Daehwangmokdan-tang is one of the oriental medicine prescriptions contained in Principles and Practice of Eastern Medicine. This study investigated the antibacterial activity of EtOH 70% extracts of Daehwangmokdan-tang (DMT) which prescription is composed of oriental medicine against MRSA. Methods : The antimicrobial activity and active concentration of MRSA were verified by measuring the minimum inhibitory concentration (MIC) of DMT. In addition, the effects of the disease were checked by treating the existing antibiotics and large ethanol extract in parallel, and the extent of growth suppression was checked over time. In addition, cell membrane permeability experiment confirmed the effect of large DMT on the immunity mechanism of MRSA. Results : TThe minimum inhibitory concentration of DMT against MRSA is 500 ~ 2000 ㎍/㎖ by broth dilution method. In the checkerboard method, the combinations of DMT with antibiotics has partial synergistic effect or synergy effect and DMT markedly reduced the MICs of the antibiotics oxacillin (OX), gentamicin (GEN) against MRSA. In the inhibition of resistance mechanism of DMT against MRSA, the expression of resistance gene and protein about β-lactam antibiotic was reduced. Also, we observed the effect of DMT about cell membrane permeability against MRSA, and confirmed that DMT suppressed growth of strains by increasing cell membrane permeability and energy metabolism. Conclusion : Basis on the result, we speculate that DMT may be useful for the treatment of MRSA infections when used in combination with β-lactam antibiotic.

주제어

표/그림 (9)

표 Table 1. The Composition of Daehwangmokdan-tang.
표 Table 2. The Antimicrobial Activity of Benincasae Semen, Rhei Radix et Rhizoma, Moutan Cortex Radicis, Persicae Semen, Natrii Sulfas and DMT against MRSA.
표 Table 3. The antimicrobial activity of Oxacillin (OX), Ampicillin (AM),Gentamicin (GEN), DMT against MRSA.
그림 Figure 1. Time-kill curve of sub-inhibitory concentrations of GEN alone, DMT alone, and GEN and DMT in combination against ATCC 33591.
표 Table 4. Results of the Combination of DMT and GEN against MRSA.
그림 Figure 2. Time-kill curve of sub-inhibitory concentrations of GEN alone, DMT alone, and GEN and DMT in combination against DPS-1(left) and DPS-2 (right).
그림 Figure 3. Time-kill curve of sub-inhibitory concentrations of GEN alone, DMT alone, and GEN and DMT in combination against CCARM 3090, 3091, 3095, and 3102.
그림 Figure 4. The effect of membrane-permeabilizing agents on susceptibility of MRSA (ATCC 33591) to DMT.
그림 Figure 5. The effect of ATPase inhibitors on susceptibility of MRSA (ATCC 33591) to DMT.

AI 본문요약
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문제 정의

DMT가 여러 유형의 항생제와 같이 병용하였을 때 세포막을 투과성과 에너지 대사에 영향을 주는지 알아보았다. 먼저, 박테리아의 세포막 투과성에 영향을 주는 시약인 TX-100과 DMT의 병용효과를 확인한 결과, MRSA의 생장이 억제되지 않는 농도의 TX-100과 DMT를 같이 병용시에 균의 생장이 억제되는 것을 확인하였다 (Figure 4).
따라서 본 연구에서도 전통적으로 사용하여온 처방 중 하나인 대황목단탕 에탄올 추출물 (DMT)을 이용하여 MRSA에 대하여 항균 실험을 실시하고, 임상에서 주로 사용되고 있는 antibiotics인 Oxacillin (OX), Ampicillin (AM), Gentamicin(GEN)와의 병용처리를 통해 DMT와 합성항생제의 상승효과를 찾아내 합성항생제의 사용량을 줄여 내성을 극복 할 수 있는 가능성이 있는 소재를 찾고자 하였다.
이와 같이 DMT를 구성하고 있는 대황, 목단피, 도인에서 부분적인 항균 ․ 항염작용 등의 약리작용이 보고된 적은 있으나, 여러 가지 약제를 혼합하여 처방된 DMT에 대한 항균활성과 해독작용 등에 관한 연구는 아직까지 보고된 적이 없다. 따라서, DMT가 합성항생제의 사용량을 줄여 내성을 극복 할 수 있는 소재인지를 확인해 보고자 하였다.
본 연구에서는 DMT의 MRSA에 대한 항균 활성 및 내성 극복에 대한 평가를 실시하였다. DMT에 대한 항균 활성을 측정하기 위해 MIC를 실시한 결과, MRSA 및 MSSA 균주에 대하여 200 ~ 2000 ㎍/㎖의 농도에서 항균 활성이 있다는 것을 확인하였다 (Table 3).

제안 방법

ATPase 억제제를 사용하여 MRSA균주에서 에너지 대사에 영향을 주는지 (DCCD)를 이용하여 실험하였다. 그 결과 Figure 5에서 보면, MRSA는 단독으로 DMT (1/16 MIC) 또는 125 ㎍/㎖ DCCD의 존재 하에서 생존 가능 하였다.
5 X 10⁵ CFU/㎖로 맞추었고 0, 4, 8, 16, 24 시간 별로, 약물투여 농도는 MHB에 균만 접종한 Control, DMT 1/2 MIC와 GEN 1/2 단독투여군, DMT 1/2 MIC와 GT 1/2 MIC 병용투여군으로 나누어 진행하였다. Colony counts는 37℃ incubator에서 24시간의 간격을 두고 30 ~ 300 colonies를 측정하였다.
DMT 단독투여 또는 GEN와 병용했을 때 MRSA의 증식 변화를 보기위해 타임킬 분석법을 시행하였다. MRSA는 24시간 배양 후, 최종적으로 탁도를 1.
DMT 와 항생제와의 병용효과를 확인하기 위한 fractional inhibitory concentration index (FICI)를 측정하기 위해 checkerboard dilution test를 실시하였다. DMT 와 GT는 1:1 비율로 약물처리 하였고, 실험방법은 앞서 시행한 액체배지 희석법과 동일하게 시행하였다. FICI 산출 공식은 다음과 같다.
DMT가 MRSA의 막 투과성에 미치는 영향을 확인하기 위해, 균에 막 투과성 증진제인 TX-100과 DMT를 단독 또는 병용투여 항균 활성의 영항을 실험하였다. 그 결과 DMT 단독의 OD 600 값 (1/32 MIC)과 비교하여 1/32 MIC DMT 및 0.
DMT와 그 구성 약재인 대황, 목단피, 망초, 도인, 동과자의 MRSA 균주에서 항균활성을 비교하였다. 그 결과, 대황과 DMT에서만 항균활성이 측정되었고 나머지 약재에서는 MIC가 5,000 이상으로 항균활성이 나타나지 않았다 (Table 2).
DMT의 Energy 대사 연관성 유무를 알아보기 위하여, ATPase inhibitor로써 사용되는 DCCD 단독투여와 DMT 단독투여, DCCD와 DMT의 병용투여를 비교하였다.
DMT의 membrane permeability 증진과 MRSA의 생장 억제를 알아보기 위해 S. aureus 의 membrane permeability를 증진시키는 Detergent인 TX-100 단독투여와 DMT 단독투여, TX-100과 DMT 의 병용투여를 비교하였다.
DMT 단독투여 또는 GEN와 병용했을 때 MRSA의 증식 변화를 보기위해 타임킬 분석법을 시행하였다. MRSA는 24시간 배양 후, 최종적으로 탁도를 1.5 X 10⁵ CFU/㎖로 맞추었고 0, 4, 8, 16, 24 시간 별로, 약물투여 농도는 MHB에 균만 접종한 Control, DMT 1/2 MIC와 GEN 1/2 단독투여군, DMT 1/2 MIC와 GT 1/2 MIC 병용투여군으로 나누어 진행하였다. Colony counts는 37℃ incubator에서 24시간의 간격을 두고 30 ~ 300 colonies를 측정하였다.
5 × 105 CFU/well이 되게 하였다. 다음으로 37℃ 항온기에서 24시간 배양 후, 각각의 MIC는DMT 단독투여 또는 Gentamicin (GEN) 과의 병용투여를 통해 미생물이 증식되지 않는 가장 낮은 약물의 농도로 측정되었다.
¹³⁾DMT 구성약재들 중 대황, 목단피, 도인 등에 포함되어 있는 성분에서 MRSA에 부분적인 항균 ․ 항염작용 등의 약리작용이 보고된 적은 있으나,^14-17) 구성 방제인 DMT에 대한 항균활성과 항독성효과에 관한 연구는 아직까지 보고 바가 없다. 따라서, 대황과 여러 가지 약재가 혼합하여 처방된 DMT도 MRSA에 의한 항균작용이 있을 것으로 판단하고 DMT를 이용하여 실험을 진행하였다.
이번 연구의 시작에서 DMT와 더불어 그 조성약재들의 항균 활성을 시험하였다. 그 결과 대황에서만 항균활성이 나타났다.

대상 데이터

Mueller-Hinton agar (MHA)와 Mueller-Hinton broth(MHB)는 DifcoTM (Baltimore, MD, USA)에서, Dimethyl sulfoxide (DMSO), Triton X-100 (TX-100), Oxacillin 및 Gentamicin, MTT[3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide, 5 ㎎/㎖]는 Sigma-Aldrich(St. Louis, USA)에서 구입하여 실험에 사용하였다.
균주는 –80℃ 냉동고에서 30% glycerol에 보관 되었고, Mueller-Hinton agar (MHA) 또는 Trypsin-Soy agar (TSA)에 접종한 후 37℃ 항온기에서 24시간 배양하여 실험에 사용하였다.
본 실험에 사용된 약재는 백제허브 (한국)에서 구입하여 권동렬 교수가 감정하여 사용하였다. 동과자 20 g, 대황 8 g, 목단피 6 g, 도인 6 g, 망초 4 g을 70% ethanol 500 ㎖로 추출하여 감압농축, 동결건조의 과정을 거쳐 12.
본 실험에서는 8가지 MRSA 균주가 사용되었다. 사용된 균주인 ATCC 25923, 33591은 American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA)에서 구입하였고, CCARM3090, 3091, 3095, 3102는 서울여대 항생제 내성 균주은행(Culture Collection of Antimicrobial Resistant Microbes,CCARM, Korea)으로부터, 임상균주 DPS-1, DPS-2는 원광대학교 병원 성형외과 (Department of plastic surgery, DPS)로부터 분양받아 실험에 사용하였다.
본 실험에서는 8가지 MRSA 균주가 사용되었다. 사용된 균주인 ATCC 25923, 33591은 American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA)에서 구입하였고, CCARM3090, 3091, 3095, 3102는 서울여대 항생제 내성 균주은행(Culture Collection of Antimicrobial Resistant Microbes,CCARM, Korea)으로부터, 임상균주 DPS-1, DPS-2는 원광대학교 병원 성형외과 (Department of plastic surgery, DPS)로부터 분양받아 실험에 사용하였다. 균주는 –80℃ 냉동고에서 30% glycerol에 보관 되었고, Mueller-Hinton agar (MHA) 또는 Trypsin-Soy agar (TSA)에 접종한 후 37℃ 항온기에서 24시간 배양하여 실험에 사용하였다.

데이터처리

모든 실험은 3회 이상 반복으로 이루어졌으며, 실험결과는 각 항목에 따라 평균치±표준편차 (SD)를 구하여 그 유의성은 GraphPad Prism 분석법을 이용하여 신뢰수준 95% (p < 0.05)에서 통계적 유의차를 평가하였다.

이론/모형

DMT 와 항생제와의 병용효과를 확인하기 위한 fractional inhibitory concentration index (FICI)를 측정하기 위해 checkerboard dilution test를 실시하였다. DMT 와 GT는 1:1 비율로 약물처리 하였고, 실험방법은 앞서 시행한 액체배지 희석법과 동일하게 시행하였다.
MRSA 균주에서 DMT와 GEN의 상승효과를 알아보기 위해 time-kill curve assay를 수행하였다. 표준균주 ATCC 33591 균주의 생장 곡선은 DMT 1/2 MIC와 GEN 1/2 MIC를 단일 및 병용하여 ATCC 33591에 24시간동안 처리한 결과, 배양 4 시간 후 부터 MRSA의 생장이 감소하기 시작하였다(Figure 1).
The combination test was investigated using the checkerboard method. The fractional inhibitory concentration indices (FICI) were interpreted as follows: synergy [ 0.
임상균주 CCARM 3090, 3091, 3095, 3102 균주에서 DMT와 GEN의 상승효과를 알아보기 위해 time-kill curve assay를 수행하였다. CCARM 3095, 3102균주는 DMT 1/2MIC와 GEN 1/2 MIC를 단일 및 병용하여 배양하였을 때 균 생장이 지연되는 것을 볼 수 있었다.
임상균주 DPS-1과 DPS-2 균주에서 DMT와 GEN의 상승효과를 알아보기 위해 time-kill curve assay를 수행하였다. DPS-1균주는 DMT 1/2 MIC와 GEN 1/2 MIC를 단일 및 병용하여 배양 8시간 후부터 균 생장에 변화를 보이기 시작하면서 항균활성을 보였다.
최소억제농도 (MIC)는 Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI 2000)의 방법인 액체배지 희석법에 따라 측정하였다. DMT를 액체배지에 농도별로 희석한 후, 탁도 0.

성능/효과

1) Methicillin에 내성을 보이는 메티실린 내성 황색포도상구균 (MRSA: methicillin resistant staphylococcus aureus)이 보고된 이후, 1980년대부터 변종 S. aureus 인 MRSA에 대하여 glycopeptide계 약물인 vancomycin, teicoplanin, daptomycin 등 기존의 PC계열과 다른 기작을 가지고 있는 abiotics를 1차로 사용하거나 새롭게 개발된 여러 항생제를 사용했으나 계속해서 내성을 가진 세균의 출현비율이 나날이 증가하면서 임상 의학적으로 심각한 문제로 제기되고 있다.²⁾ 최근에는 병원 감염관리 활동을 MRSA에 의한 병원감염은 줄고 있는 추세이지만, 지역사회에서의 MRSA 감염은 지속적으로 증가되고 있는 실정이다.
1. DMT와 그 구성 약재인 대황, 목단피, 망초, 도인, 동과 자의 MRSA 균주에서 항균활성을 비교한 결과, 대황과 DMT에서만 항균활성이 측정되었고 나머지 약재에서는 MIC가 5,000 이상으로 항균활성이 나타나지 않았다.
2. MRSA에 대한 DMT의 최소억제농도는 (MIC)는 500 ~ 2,000 ㎍/㎖ 이었다.
3. DMT와 항생제 oxacillin 및 gentamicin의 병용결과, synergy 및 partial synergy를 나타냈다.
4. DMT와 TX-100의 병용투여를 통해 DMT가 막 투과성을 영향을 주어 균 생장을 억제시키는 것을 확인하였다.
5. DMT와 DCCD의 병용투여를 통해 DMT가 에너지대사에 영향을 주어 균의 생장을 억제시키는 것을 확인하였다.
The effect of membrane-permeabilizing agents on susceptibility of MRSA (ATCC 33591) to DMT. Bacterial viability was determined by absorbance at 600 ㎚ after incubation for 24 h with DMT concentrations of 62.5 ㎍/㎖ (1/32 MIC DMT), and0.00001% Triton X-100, or their combinations (DMT + TX-100). The data are presented as the mean ± S.
임상균주 CCARM 3090, 3091, 3095, 3102 균주에서 DMT와 GEN의 상승효과를 알아보기 위해 time-kill curve assay를 수행하였다. CCARM 3095, 3102균주는 DMT 1/2MIC와 GEN 1/2 MIC를 단일 및 병용하여 배양하였을 때 균 생장이 지연되는 것을 볼 수 있었다. 또한 CCARM 3090, 3091 균주에서는 배양하기 시작하면서부터 균 생장을 억제하여 24시간에는 control과 가장 큰 차이를 나타냈다 (Figure 3).
DMT 항균활성을 최소억제농도 (MIC)를 통해 확인한 결과, 실험에 사용한 MRSA 모든 균주에 대하여 500 ~ 2,000 ㎍/㎖에서 균의 생장이 억제되는 것을 확인하였다 (Table 3).
본 연구에서는 DMT의 MRSA에 대한 항균 활성 및 내성 극복에 대한 평가를 실시하였다. DMT에 대한 항균 활성을 측정하기 위해 MIC를 실시한 결과, MRSA 및 MSSA 균주에 대하여 200 ~ 2000 ㎍/㎖의 농도에서 항균 활성이 있다는 것을 확인하였다 (Table 3). 또한, DMT를 구성하는 약재들의 MIC를측정하여 어떤 약재에 의해 항균 활성이 나타나는지를 확인한 결과, 대황에서 MRSA에 대한 항균 활성이 있음을 확인하였다.
또한, DMT와 기존항생제와의 상승효과를 통해 항생제의 내성 극복에 유효한지를 확인하였다. DMT와 GEN의 상승효과를 확인한 결과, 8개의 균주에 대해서 partial synergy 및 synergy 효과가 있음을 확인하였다 (Table 4). 또한, 상승효과를 보이는 두 약물조합을 이용해 Time-kill assay를 실시한 결과, 8개 균주에 대해서 DMT와 GEN을 단독으로 사용하였을 때와 비교하여 두 약물을 같이 병용 시에 시간이 지남에 따라 균의 생장이 억제되는 것을 확인하였다 (Figure 1-3).
DMT와 아미노글리코사이드계 (aminoglycoside) 항생제인 GEN을 병용한 결과, DPS-2에서 synergy 효과 (FICI ≤ 0.5)가 나타났으며, 나머지 균주에서도 partial synergy 효과(0.5 ≤ FICI ≤ 0.75)를 나타냈다 (Table 4).
임상균주 DPS-1과 DPS-2 균주에서 DMT와 GEN의 상승효과를 알아보기 위해 time-kill curve assay를 수행하였다. DPS-1균주는 DMT 1/2 MIC와 GEN 1/2 MIC를 단일 및 병용하여 배양 8시간 후부터 균 생장에 변화를 보이기 시작하면서 항균활성을 보였다. 또한 DPS-2균주는 배양하기 시작하면서부터 균 생장을 억제하여 24시간에는 control과 가장 큰 차이를 나타냈다 (Figure 2).
DMT가 MRSA의 막 투과성에 미치는 영향을 확인하기 위해, 균에 막 투과성 증진제인 TX-100과 DMT를 단독 또는 병용투여 항균 활성의 영항을 실험하였다. 그 결과 DMT 단독의 OD 600 값 (1/32 MIC)과 비교하여 1/32 MIC DMT 및 0.00001% TX-100의 존재 하에서 현탁액의 OD 600 값은 51.4 % 감소했다 (Figure 4).
DMT와 그 구성 약재인 대황, 목단피, 망초, 도인, 동과자의 MRSA 균주에서 항균활성을 비교하였다. 그 결과, 대황과 DMT에서만 항균활성이 측정되었고 나머지 약재에서는 MIC가 5,000 이상으로 항균활성이 나타나지 않았다 (Table 2).
또한, DMT를 구성하는 약재들의 MIC를측정하여 어떤 약재에 의해 항균 활성이 나타나는지를 확인한 결과, 대황에서 MRSA에 대한 항균 활성이 있음을 확인하였다. 대황 추출물 및 함유성분 emodin이 MRSA에 대한 항균활성과 항생제와 시너지 효과가 있음이 밝혀졌다.¹⁸⁾ 이는 DMT가 MRSA에 대한 항균 활성을 나타내는데 대황이 큰 역할을 한다는 것을 확인할 수 있었다 (Table 2).
본 실험에 사용된 약재는 백제허브 (한국)에서 구입하여 권동렬 교수가 감정하여 사용하였다. 동과자 20 g, 대황 8 g, 목단피 6 g, 도인 6 g, 망초 4 g을 70% ethanol 500 ㎖로 추출하여 감압농축, 동결건조의 과정을 거쳐 12.0%의 수득율을 얻었다 (Table 1).
CCARM 3095, 3102균주는 DMT 1/2MIC와 GEN 1/2 MIC를 단일 및 병용하여 배양하였을 때 균 생장이 지연되는 것을 볼 수 있었다. 또한 CCARM 3090, 3091 균주에서는 배양하기 시작하면서부터 균 생장을 억제하여 24시간에는 control과 가장 큰 차이를 나타냈다 (Figure 3).
DMT에 대한 항균 활성을 측정하기 위해 MIC를 실시한 결과, MRSA 및 MSSA 균주에 대하여 200 ~ 2000 ㎍/㎖의 농도에서 항균 활성이 있다는 것을 확인하였다 (Table 3). 또한, DMT를 구성하는 약재들의 MIC를측정하여 어떤 약재에 의해 항균 활성이 나타나는지를 확인한 결과, 대황에서 MRSA에 대한 항균 활성이 있음을 확인하였다. 대황 추출물 및 함유성분 emodin이 MRSA에 대한 항균활성과 항생제와 시너지 효과가 있음이 밝혀졌다.
¹⁸⁾ 이는 DMT가 MRSA에 대한 항균 활성을 나타내는데 대황이 큰 역할을 한다는 것을 확인할 수 있었다 (Table 2). 또한, DMT와 기존항생제와의 상승효과를 통해 항생제의 내성 극복에 유효한지를 확인하였다. DMT와 GEN의 상승효과를 확인한 결과, 8개의 균주에 대해서 partial synergy 및 synergy 효과가 있음을 확인하였다 (Table 4).
이에 DMT와 세포막투과에 영향을 주는 약물과 병용 시 상승효과를 보일 수 있다는 것을 알 수 있었다. 또한, 박테리아에 ATPase inhibitor로 작용하는 DCCD와 DMT의 병용효과를 확인한 결과, 두 약물을 병용시 균의 생장이 억제되는 것을 확인하였다 (Figure 5). 이는 DMT가 ATPase inhibitor 역할을 하는 약물과도 좋은 시너지를 보일 수 있다는 것을 의미한다.
DMT와 GEN의 상승효과를 확인한 결과, 8개의 균주에 대해서 partial synergy 및 synergy 효과가 있음을 확인하였다 (Table 4). 또한, 상승효과를 보이는 두 약물조합을 이용해 Time-kill assay를 실시한 결과, 8개 균주에 대해서 DMT와 GEN을 단독으로 사용하였을 때와 비교하여 두 약물을 같이 병용 시에 시간이 지남에 따라 균의 생장이 억제되는 것을 확인하였다 (Figure 1-3). 이는 DMT 자체의 항균 활성뿐만 아니라, 항생제의 사용량을 줄임으로써 내성을 극복 하는데 도움을 줄 수 있다고 볼 수 있다.
DMT가 여러 유형의 항생제와 같이 병용하였을 때 세포막을 투과성과 에너지 대사에 영향을 주는지 알아보았다. 먼저, 박테리아의 세포막 투과성에 영향을 주는 시약인 TX-100과 DMT의 병용효과를 확인한 결과, MRSA의 생장이 억제되지 않는 농도의 TX-100과 DMT를 같이 병용시에 균의 생장이 억제되는 것을 확인하였다 (Figure 4). 이에 DMT와 세포막투과에 영향을 주는 약물과 병용 시 상승효과를 보일 수 있다는 것을 알 수 있었다.
이상 실험 결과를 통해, DMT가 MRSA에 항균효과가 있다는 것을 확인하였고, 항생제와의 병용실험을 통해 두 약물 사이에 상승효과가 있음을 확인하였으며, 세포막 투과도 측정을 통해 DMT의 MRSA 내성기전을 억제하여 항균활성을 나타낸다는 것을 확인할 수 있었다.
먼저, 박테리아의 세포막 투과성에 영향을 주는 시약인 TX-100과 DMT의 병용효과를 확인한 결과, MRSA의 생장이 억제되지 않는 농도의 TX-100과 DMT를 같이 병용시에 균의 생장이 억제되는 것을 확인하였다 (Figure 4). 이에 DMT와 세포막투과에 영향을 주는 약물과 병용 시 상승효과를 보일 수 있다는 것을 알 수 있었다. 또한, 박테리아에 ATPase inhibitor로 작용하는 DCCD와 DMT의 병용효과를 확인한 결과, 두 약물을 병용시 균의 생장이 억제되는 것을 확인하였다 (Figure 5).
MRSA 균주에서 DMT와 GEN의 상승효과를 알아보기 위해 time-kill curve assay를 수행하였다. 표준균주 ATCC 33591 균주의 생장 곡선은 DMT 1/2 MIC와 GEN 1/2 MIC를 단일 및 병용하여 ATCC 33591에 24시간동안 처리한 결과, 배양 4 시간 후 부터 MRSA의 생장이 감소하기 시작하였다(Figure 1).

후속연구

그러나 대황의 경우 그 성미가 苦寒하고 峻㤠하여 정기를 손상시킬 수 있어 사용 시에는 주의가 필요하다. 또한 동과자, 대황, 목단피, 도인, 망초의 구성인 DMT를 이용한 연구는 방제연구에 있어 시사하는 바가 크다 하겠다.
위 실험들로 보아 DMT에는 MRSA의 생장을 억제할 수 있는 항균효과가 있음을 확인하였고, 또한 기존 항생제와 병용하였을 때 약물 상승효과와 시간에 따른 균의 생장억제 실험을 통한 항균효과를 확인함으로써 항생제 후보물질 중 하나로 충분한 가치가 있음을 확인할 수 있었으며, 더 나아가 세균감염질환에 기존 항생제와 병용 사용 할 수 있는 후보물질이 될 수 있을 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	Methicillin-resistant Staphylococcus aureus이란 무엇인가?	Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA)는 유럽을 포함하여 전 세계적으로도 가장 문제가 되는 hospitalacquired infection 병원체이다. 1) Methicillin에 내성을 보이는 메티실린 내성 황색포도상구균 (MRSA: methicillin resistant staphylococcus aureus)이 보고된 이후, 1980년대부터 변종 S.
	MRSA가 내성을 보이는 항생제는?	MRSA는 methicillin에만 내성을 보이는 것이 아니고, 대부분의 항생제에 강한 내성을 가지고 있다. 항생제의 사용이 많아지면서 병원균들도 내성을 갖는 다양한 변종균이 생겨나기 시작했기 때문이다.
	대황목단탕 에탄올 추출물의 MRSA에 대한 항균활성을 측정한 결과는?	1. DMT와 그 구성 약재인 대황, 목단피, 망초, 도인, 동과자의 MRSA 균주에서 항균활성을 비교한 결과, 대황과 DMT에서만 항균활성이 측정되었고 나머지 약재에서는 MIC가 5,000 이상으로 항균활성이 나타나지 않았다. 2. MRSA에 대한 DMT의 최소억제농도는 (MIC)는 500 ~ 2,000 ㎍/㎖ 이었다. 3. DMT와 항생제 oxacillin 및 gentamicin의 병용결과, synergy 및 partial synergy를 나타냈다. 4. DMT와 TX-100의 병용투여를 통해 DMT가 막 투과성을 영향을 주어 균 생장을 억제시키는 것을 확인하였다. 5. DMT와 DCCD의 병용투여를 통해 DMT가 에너지대사에 영향을 주어 균의 생장을 억제시키는 것을 확인하였다.

참고문헌 (18)

Livornese LL Jr, Dias S, Samel C, Romanowski B, Taylor S, May P, Pitsakis P, Woods G, Kaye D, Levison ME, Johnson CC. Hospital-acquired Infection with Vancomycin-resistant Enterococcus faecium Transmitted by Electronic Thermometers. Ann Intern Med. 1992; 15;117(2):112-6.

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Holmes NE, Turnidge JD, Munckhof WJ, Robinson JO, Korman TM, O'Sullivan MV, Anderson TL, Roberts SA, Warren SJ, Johnson PD. Antimicrob Agents Chemother. Vancomycin AUC/MIC ratio and 30-day mortality in patients with Staphylococcus aureus bacteremia. Epub Jan 18. 2013; 57(4): 1654-63.

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Kock R, Becker K, Cookson B, van Gemert-Pijnen JE, Harbarth S, Kluytmans J, Mielke M, Peters G, Skov RL, Struelens MJ, Tacconelli E, Navarro Torne A, Witte W, Friedrich AW. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA): burden of disease and control challenges in Europe. Euro Surveill. 2010; 14;15(41):1968.
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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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