본 연구는 타히보 추출물이 천연 방사선 방호제로써 수컷 쥐의 전립선 내에서 일으키는 영향을 알아보기 위한 연구이다. 타히보 추출물은 유방암, 전립선 암의 세포라인에 대해 세포성장을 억제하는 능력이 있다고 알려져 있다. 수컷 쥐의 전립선을 채택하여 타히보 추출물에 의한 방사선 방호효과를 알아보기 위해 X-선 7 Gy를 조사한 날로부터 1 일, 7 일, 21 일 후의 혈액학적 변화, 외부독성평가, 항산화 효소(SOD)활성 변화 및 조직학적 변화를 관찰하였다. 타히보 투여 후 방사선 조사군은 방사선 조사군에 비해 더 큰 림프구 수치를 나타내었으며, 이 결과는 타히보가 조혈면역계의 회복능력에 영향을 미치는 것으로 사료된다. 외부독성평가결과로 타히보 추출물의 가장 높은 독성은 18.129±5.16 %, 가장 낮은 독성은 13.6945±4.43 %로 나타났다. 이는 타히보 추출물의 독성이 미미한 것으로 판단된다. 대조군 및 타히보 투여군의 전립선 세포핵 및 세포질의 구성은 균질하였으며, 이에 반해 방사선 조사군의 전립선 내 세포 핵 응집현상과 세포질내 염증반응이 나타났다. 타히보 투여 후 방사선 조사군은 방사선 조사군에 비해 전립선 내 세포질 염증반응은 적게 나타났으나 세포핵의 응집현상이 나타났다. 이는 타히보 추출물이 전립선의 세포에 대해 방사선 방호효과가 있음으로 판단된다.
본 연구는 타히보 추출물이 천연 방사선 방호제로써 수컷 쥐의 전립선 내에서 일으키는 영향을 알아보기 위한 연구이다. 타히보 추출물은 유방암, 전립선 암의 세포라인에 대해 세포성장을 억제하는 능력이 있다고 알려져 있다. 수컷 쥐의 전립선을 채택하여 타히보 추출물에 의한 방사선 방호효과를 알아보기 위해 X-선 7 Gy를 조사한 날로부터 1 일, 7 일, 21 일 후의 혈액학적 변화, 외부독성평가, 항산화 효소(SOD)활성 변화 및 조직학적 변화를 관찰하였다. 타히보 투여 후 방사선 조사군은 방사선 조사군에 비해 더 큰 림프구 수치를 나타내었으며, 이 결과는 타히보가 조혈면역계의 회복능력에 영향을 미치는 것으로 사료된다. 외부독성평가결과로 타히보 추출물의 가장 높은 독성은 18.129±5.16 %, 가장 낮은 독성은 13.6945±4.43 %로 나타났다. 이는 타히보 추출물의 독성이 미미한 것으로 판단된다. 대조군 및 타히보 투여군의 전립선 세포핵 및 세포질의 구성은 균질하였으며, 이에 반해 방사선 조사군의 전립선 내 세포 핵 응집현상과 세포질내 염증반응이 나타났다. 타히보 투여 후 방사선 조사군은 방사선 조사군에 비해 전립선 내 세포질 염증반응은 적게 나타났으나 세포핵의 응집현상이 나타났다. 이는 타히보 추출물이 전립선의 세포에 대해 방사선 방호효과가 있음으로 판단된다.
This study is desinged to examine the effects of Taheebo(Tabebuia avellanedae) extract on the prostate of male rats as a natural radiation protection agent. Taheebo extract is well known to inhibit cell growth for the cell lines of breast and prostate cancer. In this study, the X-ray 7 Gy was irradi...
This study is desinged to examine the effects of Taheebo(Tabebuia avellanedae) extract on the prostate of male rats as a natural radiation protection agent. Taheebo extract is well known to inhibit cell growth for the cell lines of breast and prostate cancer. In this study, the X-ray 7 Gy was irradiated in the prostate of male rat to identify radiation protection effects by Taheebo Extracts, 1, 7, and 21 Days later, hematological changes, external toxicity assessments(LDH), antioxidant enzyme(SOD) activity changes and tissue change were observed. IR+TH group showed greater lymphocyte levels than the irradiation group, which is believed to affect the hematopoietic immune system's resilience. As a results of the external toxicity assessment, Taheebo extract's toxicity is maximum 18.128±5.16%, minimum 13.6945±4.43%. Taheebo is considered to be of little toxicity. The composition of prostate cell nuclei and cytoplasm in Control and TH group was honogeneous, whereas the cell nucleus cohesion in the prostate in irradiation group and inflammatory reactions in cytoplasm were shown. IR+TH group showed less inflammatory reactions of cytoplasm in the prostate than in the radiation irradiation group, but showed a cohesive phenomenon of cell nuclei. It is judged that Taheebo extract has radiation protection against prostate cells.
This study is desinged to examine the effects of Taheebo(Tabebuia avellanedae) extract on the prostate of male rats as a natural radiation protection agent. Taheebo extract is well known to inhibit cell growth for the cell lines of breast and prostate cancer. In this study, the X-ray 7 Gy was irradiated in the prostate of male rat to identify radiation protection effects by Taheebo Extracts, 1, 7, and 21 Days later, hematological changes, external toxicity assessments(LDH), antioxidant enzyme(SOD) activity changes and tissue change were observed. IR+TH group showed greater lymphocyte levels than the irradiation group, which is believed to affect the hematopoietic immune system's resilience. As a results of the external toxicity assessment, Taheebo extract's toxicity is maximum 18.128±5.16%, minimum 13.6945±4.43%. Taheebo is considered to be of little toxicity. The composition of prostate cell nuclei and cytoplasm in Control and TH group was honogeneous, whereas the cell nucleus cohesion in the prostate in irradiation group and inflammatory reactions in cytoplasm were shown. IR+TH group showed less inflammatory reactions of cytoplasm in the prostate than in the radiation irradiation group, but showed a cohesive phenomenon of cell nuclei. It is judged that Taheebo extract has radiation protection against prostate cells.
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문제 정의
본 연구는 보고 되어 있는 타히보 추출물의 전립선 암에 대한 항암효과를 기본 바탕으로 하여 SD Rat(Sprague-Dawley Rat)에 방사선을 조사한 후 일어나는 신체적 부작용 저감 및 회복능력을 연구하여 타히보 추출물의 천연 방사선 방호제로써 방사선 방호효과을 확인하고자 한다.
본 연구는 타히보의 전립선에 대한 항산화효과와 천연 방사선 방호제로서의 능력을 확인하고자 실험하였다.
제안 방법
[1-3] 이러한 건축물의 결함평가 중 방사선비파괴검사는 필수과정이지만 방사선비파괴검사를 진행하는 작업종사자는 방사선을 이용함으로써 피해를 받고 있다.[4] 약 10년 전인 2011년과 2012년에 울산의 비파괴업체에서 감마선이 방출되는 이리듐(Ir)을 사용하여 방사선비파괴검사를 진행했다. 이에 종사한 방사선비파괴검사원은 과도한 피폭으로 인해 백혈병과 골수이형증후군으로 사망하였다.
타히보 분말 10 g과 증류수 700 mL를 혼합하여 끓기 시작한 시점으로부터 6 시간 동안 추출하였다. 이후 Vertical Autoclave(Gongju-si, Korea)을 이용하여 2 시간 고온멸균 하였다.
환경은 온도 21±2 ℃, 습도 55±5 %, 조명 12 hour/day 로 조성하였다. 1 주간의 순응기간을 거쳤 으며, 실험군 편성은 대조군(Control), 방사선조사군 (IR), 타히보 투여군(TH), 타히보 투여 후 방사선 조사군(IR+TH)으로 나누어 실험하였다. 타히보군과 타히보 투여 후 방사선 조사군은 2 cc/kg/day의 용량을 존대를 이용하여 14 일간 경구투여 하였다.
1 주간의 순응기간을 거쳤 으며, 실험군 편성은 대조군(Control), 방사선조사군 (IR), 타히보 투여군(TH), 타히보 투여 후 방사선 조사군(IR+TH)으로 나누어 실험하였다. 타히보군과 타히보 투여 후 방사선 조사군은 2 cc/kg/day의 용량을 존대를 이용하여 14 일간 경구투여 하였다.(Table.
그러나 베르고니-트리본도 법칙에 의하면 하등동물에게는 그 효과가 반감되어 나타난다. 따라서 선형가 속기(Elekta Linac, Sweden)로 Field Size 35 X 35 cm2으로 고정하고, 실험동물을 특수 제작된 30 X 30 cm2아크릴용기에 넣은 다음 심부선량 10 mm 지점에서 100% 선량이 되도록 7 Gy X-선을 조사하였다.
제작한 Paraffin block 을 슬라이드로 분할하여 H&E staining하여 광학 현미경으로 관찰하였다.
채취혈액은 방사선 조사 후 1 일, 7 일, 21 일 차 SD Rat을 통해 얻었다. 채취 후 동물용 EDTA 0.
5 cc Tube에 보관 후 즉시 Coulter mixter를 이용하여 응고를 방지하였다. 방사선 작업 종사자의 건강진단기준에 포함되는 백혈구, 적혈구 등을 분석하였다. 신뢰도를 위해 각 군의 개체 당 3 회의 혈액검사를 시행하여 총 횟수의 평균값을 구했다.
방사선 작업 종사자의 건강진단기준에 포함되는 백혈구, 적혈구 등을 분석하였다. 신뢰도를 위해 각 군의 개체 당 3 회의 혈액검사를 시행하여 총 횟수의 평균값을 구했다.
H.SAITO 등의 기법[16]을 응용하여 타히보 추출물의 인체 외부적 독성평가를 위해 LDH(Lactate dheydrogenase) assay를 수행하였다. LDH assay는 세포가 스트레스, 부상, 화학물질 또는 세포 간 신호에 의해 손상되면, 세포막에서 LDH가 빠르게 방출된다.
[17-21] 본 연구에서는 HEK 293 T 세포를 사용하였으며, 96 well plate의 각 well당 15,000 cell을 배양하였다. 각 well을 분리하여 타히보 추출물 투여군, Lysis Buffer를 첨가한 High Control군과 Control군으로 편성하였다. 편성 후 CO2 incubator에서 배양하였고, 배양 후 30 분간 실온에서 반응시켰다.
7 mL를 혼합하여 농도 1의 시료를 제조하였다. 농도 1 시료를 희석하여 1/5, 1/52, 1/53, 1/54, 1/55, 1/56 SOD Sample시료를 제조하였다. 다음 96 well plate에 각 농도별 시료를 20 uL씩 넣고, Dilution butter 20 uL, WST 200 uL를 넣었다.
선형가속기를 이용해 X-선 7 Gy를 조사한 날로부터 21 일 후의 혈액 속 SOD 활성도를 측정하였다. 각 군별 혈액 내 SOD활성도는 방사선을 조사한 개체들의 수치가 대조군에 비해 현저히 낮게 나타났다.
대상 데이터
연구에 사용된 타히보는 ㈜신영허브(Seoul, Korea)에서 구입하였다. 분말 가루 형태이며, 직사광선 및 습기조절을 위해 5 ℃에서 냉장보관 하였다.
실험동물은 수컷 SD Rat 5 주령을 사용하였다. 환경은 온도 21±2 ℃, 습도 55±5 %, 조명 12 hour/day 로 조성하였다.
그러므로 방출된 LDH의 양을 측정하는 것은 세포사멸을 평가하는 중요한 방법이다.[17-21] 본 연구에서는 HEK 293 T 세포를 사용하였으며, 96 well plate의 각 well당 15,000 cell을 배양하였다. 각 well을 분리하여 타히보 추출물 투여군, Lysis Buffer를 첨가한 High Control군과 Control군으로 편성하였다.
기법을 응용하여 SOD(superoxide dismutase)의 활성화를 관찰하였다. 혈액 채취는 10주령 실험동물 SD Rat의 정맥을 통해 채취하였다. 채취한 혈액은 헤파린 1000 U 0.
관찰 대상인 전립선은 방사선 조사 후 1 일, 21일 차 SD rat을 통해 얻었다. 채취한 조직은 10 % Formalin을 제조하여 보관하였다.
관찰 대상인 전립선은 방사선 조사 후 1 일, 21일 차 SD rat을 통해 얻었다. 채취한 조직은 10 % Formalin을 제조하여 보관하였다. 다음 70 % Ethanol로 조직을 탈수한 후 Xylene으로 치환하여 Paraffin block을 제작하였다.
데이터처리
실험결과는 IBM SPSS statistics version 26 통계 프로그램을 이용하여 T-test 분석하였다.
이론/모형
인체 외부적 세포독성평가는 LDH assay를 수행하였다. LDH(Lactate dehydrogenase)로 세포막 내에 존재하는 세포형태의 효소이다.
평가는 CRCERT(The Cooperative Research Centre For Eye Research and Technology)의 세포 독성 염색 법을 사용한 독성 평가 보고서를 기준으로 하여 평가하였다.[23] 타히보 추출물 독성은 가장 높은 수치는 18.
성능/효과
LDH assay를 수행하였으며, 타히보 추출물 독성은 가장 높은 수치는 18.129±5.16 %로 나타났다.
IR군과 IR+TH군을 비교·분석 결과 IR+TH군의 SOD 활성도가 약간 더 높은 활성을 나타냈다.
방사선 조사 후 1 일, 7 일, 21 일차 림프구의 수치가 회복되는 것을 확인할 수 있다. 데이터를 토대로 IR Group의 회복 능력보다 IR+TH Group의 회복 능력이 더 큰 상승폭을 나타냈다.
방사선 조사 후 1 일, 7 일, 21 일차 림프구의 수치가 회복되는 것을 확인할 수 있다. 데이터를 토대로 IR Group의 회복 능력보다 IR+TH Group의 회복 능력이 더 큰 상승폭을 나타냈다.(p<0.
적혈구 수치는 방사선조사 후 21 일 차 IR Group에 대해서 IR+TH Group이 더 적은 감소폭을 보였다.(p<0.
선형가속기를 이용해 X-선 7 Gy를 조사한 날로부터 21 일 후의 혈액 속 SOD 활성도를 측정하였다. 각 군별 혈액 내 SOD활성도는 방사선을 조사한 개체들의 수치가 대조군에 비해 현저히 낮게 나타났다. IR Group과 IR+TH Group의 SOD 활성도는 대조군에 비해 각각 0.
선형가속기를 이용해 X-선 7 Gy를 조사한 날로부터 21 일 후의 혈액 속 SOD 활성도를 측정하였다. 각 군별 혈액 내 SOD활성도는 방사선을 조사한 개체들의 수치가 대조군에 비해 현저히 낮게 나타났다. IR Group과 IR+TH Group의 SOD 활성도는 대조군에 비해 각각 0.
각 군별 혈액 내 SOD활성도는 방사선을 조사한 개체들의 수치가 대조군에 비해 현저히 낮게 나타났다. IR Group과 IR+TH Group의 SOD 활성도는 대조군에 비해 각각 0.06 %, 14.5 %로 나타났다. IR군과 IR+TH군을 비교·분석 결과 IR+TH군의 SOD 활성도가 약간 더 높은 활성을 나타냈다.
IR Group과 IR+TH Group 을 비교·분석 결과 IR+TH Group의 SOD 활성도가 약간 더 높은 활성을 나타냈다.
혈액학적 실험으로 보아 IR Group, IR+TH Group 의 방사선 조사 1일 차 림프구의 수는 Control Group의 림프구 수에 비해 현저히 낮게 나타났다. 혈액 속 유일하게 핵을 가진 성분인 림프구는 방사선 조사에 의해 손상 되어 가장 낮은 수치를 나타낸 것으로 사료된다.
혈액 속 유일하게 핵을 가진 성분인 림프구는 방사선 조사에 의해 손상 되어 가장 낮은 수치를 나타낸 것으로 사료된다. 그러나 방사선 조사 후 7 일, 21 일 차의 IR Group과 IR+TH Group의 림프구의수가 점차 증가되는 것이 관찰되었다. 이것은 ICRP60에 명시된 결정적 영향인 방사선 피폭에 일어나는 혈구성분과 같은 변화이다.
타히보가 방사선 피폭 시 림프구의 감소에 대한 방호효과는 미미한 것으로 보인다. 하지만 IR Group과 IR+TH Group을 비교하였을 때 IR+TH Group의 림프구 수치가 IR Group보다 높은 것으로 보아 타히보 추출물이 조혈면역계의 회복능력에 효과가 있는 것으로 사료된다.
각 군별 혈액내 SOD활성도는 방사선을 조사한 개체들의 수치가 대조군에 비해 현저히 낮게 나타났다. 방사선 조사군(IR)과 타히보 투여 후 방사선 조사군 (IR+TH)의 SOD 활성도는 대조군에 비해 각각 0.06%, 14.5 %로 나타났다. IR Group과 IR+TH Group 을 비교·분석 결과 IR+TH Group의 SOD 활성도가 약간 더 높은 활성을 나타냈다.
IR Group 처럼 세포사멸과 같은 반응이이 나타난다면 전립선염이나 전립선비대증으로 성장·확대될 수 있다고 판단된다. IR Group에 비해 IR+TH Group의 세포핵 및 세포질이 균질한 것으로 보아 타히보 추출물은 방사선 조사에 의한 방사선방호효과가 있는 것으로 사료된다.
SOD활성도는 IR군은 대조군에 비해 0.06 %를 나타내었고, IR+TH군은 대조군에 비해 14.5 %를 나타냈다. IR+TH군이 IR군에 비해 SOD활성도가 더 높게 나타나는 경향을 보였다.
따라서 타히보는 방사선 방호 효과가 있다는 것을 확인하였다. 이는 천연 방사선 방호제 개발에 기초 자료로 활용될 수 있을 것이다.
후속연구
ICRP60 권고사항에 따르면 지속적인 방사선 피폭은 유전적 결함, 백혈병, 암을 유발할 수 있다고 명시되어 있다.[6] 따라서 방사선 피폭에 의한 부작용을 예방할 수 있는 천연 방사선 방호제의 연구가 필요하다.
따라서 타히보는 방사선 방호 효과가 있다는 것을 확인하였다. 이는 천연 방사선 방호제 개발에 기초 자료로 활용될 수 있을 것이다. 또 비파괴검사원 뿐이 아니라 방사선작업종사자들이 타히보를 섭취한다면 부작용을 예방할 수 있을 것으로 기대된다.
이는 천연 방사선 방호제 개발에 기초 자료로 활용될 수 있을 것이다. 또 비파괴검사원 뿐이 아니라 방사선작업종사자들이 타히보를 섭취한다면 부작용을 예방할 수 있을 것으로 기대된다.
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