[논문]정상 태아의 임신 분기별 좌심실 도플러 신호 자동 분석

김수민; 예수영

doi:10.7742/jksr.2020.14.6.791

정상 태아의 임신 분기별 좌심실 도플러 신호 자동 분석
Automated Analysis of fetal Myocardial Performance Index of Doppler Waveform in Normal Pregnancy 원문보기

한국방사선학회 논문지 = Journal of the Korean Society of Radiology, v.14 no.6, 2020년, pp.791 - 800

김수민 (웰하이여성아동병원 영상의학과) , 예수영 (부산가톨릭대학교 보건과학대학 방사선학과)

초록
AI-Helper

태아 심장의 기능을 평가하기 위해 초음파 검사가 널리 이용되고 있으나 주관적이라는 검사의 특성으로 인해 검사자마다 측정 방식에 차이가 있으며 특히 심근 성능 지수는 현재까지 기준치가 없는 실정이다. 이에 본 연구에서는 정상 태아의 펄스 도플러 파형을 분석하여 자동 측정 프로그램을 개발하여 객관적인 측정을 하고자 하였다. 2019년 4월부터 2020년 2월까지 부산에 위치한 W병원에 내원한 산모 133명을 대상으로 태아 심장 초음파검사를 시행하였으며 좌심실의 펄스 도플러 영상을 획득 후 각 심근 성능 지수를 측정하였다. 본 연구에서 구현한 자동 측정 프로그램을 이용한 임신 초기, 중기, 말기의 심장 성능 지수와 기존의 측정 방식을 이용한 심장 성능 지수를 비교한 결과, 두 수치에는 차이가 있었으나 같은 경향성을 보였다.

Abstract ▼ AI-Helper

Ultrasonography is widely used to evaluate the function of fetal heart, but due to the subjective nature of the test, there are differences in measurement methods for each examiner, and especially the myocardial performance index has no reference index to date. Therefore, in this study, we wanted to analyze pulse Doppler waveforms of normal fetuses and develop an automatic measurement program to make objective measurements. One hundred and thirty-three pregnant women who visited the hospital for prenatal examinations were studied, myocardial performance index was measured after acquiring a pulse doppler image of the left ventricle. As a result, the early, mid and late pregnancy myocardial performance index, measured by the automatic measurement program conducted in this study, was found to increase as pregnancy continued.

주제어

표/그림 (8)

그림 Fig. 1. Two-dimensional (2D) images and Doppler waveforms of the measurements.
그림 Fig. 2. The image with binary and low – pass filters.
그림 Fig. 3. The result of performing the peak dectection algorithm (a) and local peak detection in the Doppler waveform graphs (b).
그림 Fig. 4. Schematic representation of the measurement of the cardiac time intervals. FT, filling time; IVCT, isovolumetric contraction time; ET, ejection time; IVRT, isovolumetric relaxation time.
그림 Fig. 5. Flowchart of image processing conducted in this study. LPF, low-pass filter; AMPD, automatic multiscale-based peak detection; MPI, myocardial performance index.
그림 Fig. 6. The results matched with the measured values.
표 Table 1. One-way analysis of variance of the cardiac intervals and the MPI according to the fetal trimester of the automatical measurement
표 Table 2. One-way analysis of variance of the cardiac intervals and the MPI according to the fetal trimester of the manual measurement

AI 본문요약
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문제 정의

5. Flowchart of image processing conducted in this study. LPF, low-pass filter; AMPD, automatic multiscale-based peak detection; MPI, myocardial performance index.
따라서 본 연구에서는 영상처리 및 프로그래밍 환경을 제공하는 MATLAB을 이용하여 임신 중 초음파검사로 얻어진 태아 좌심실의 간헐파 도플러 파형을 분석하고 심근 성능 지수를 측정하는 자동화 프로그램을 개발하여 임신 분기별 심장 시간 간격(cardiac time intervals) 및 MPI를 측정하고자 한다. 그리고 자동 검출로 측정한 값과 실제 검사 중 측정한 실측값과 비교하고 최종적으로 자동 측정법에 기반한 임신 분기 별 변화에 대한 심근 성능 지수의 기준치를 제시하고자 한다.
따라서 본 연구에서는 영상처리 및 프로그래밍 환경을 제공하는 MATLAB을 이용하여 임신 중 초음파검사로 얻어진 태아 좌심실의 간헐파 도플러 파형을 분석하고 심근 성능 지수를 측정하는 자동화 프로그램을 개발하여 임신 분기별 심장 시간 간격(cardiac time intervals) 및 MPI를 측정하고자 한다. 그리고 자동 검출로 측정한 값과 실제 검사 중 측정한 실측값과 비교하고 최종적으로 자동 측정법에 기반한 임신 분기 별 변화에 대한 심근 성능 지수의 기준치를 제시하고자 한다.
^[7,8] 이는 초음파검사가 반 정량적인 평가방법이라는 제한점에 기인한 것이므로 이전 보다 정량적이고 객관적인 측정의 필요성에 대해 끊임없이 언급되었다. 따라서 본 저자는 이러한 초음파검사의 한계를 극복하기 위해 자동화된 프로그램을 이용하여 실제 임상에 적용 가능한 알고리즘을 개발하고자 연구를 시행하였다. MPI를 구하기 위해서는 심실 수축 시간 및 심실 이완 시간을 비롯하여 등용성 수축기 시간과 등용성 이완기 시간이 먼저 측정되어야 하며 본 연구에서는 혈류파형의 특성을 분석하고 그래프의 각 주기에서 time intervals를 자동으로 측정한 후에 MPI를 계산하는 방식을 적용하였다.
그러나 기존에 발표된 여러 선행 연구들은 심근 성능 지수를 임신을 두 시기로만 나누어 비교하였으며 각 임신 분기에 대한 자료가 없었고, 검사자의 주관적인 판단에 의지하는 측정 방식으로 인해 연구마다 결과가 달랐다. 본 연구는 임신 전체 분기의 심근 성능 지수를 측정하였다는 점과 자체 개발한 자동화 프로그램으로 임신 분기에 따른 태아 좌심실 심근 성능 지수의 정상 참고치를 제시하였다는 점에서 의미가 있다고 할 수 있다. 본 연구를 통해 향후 태아의 심장 기능 평가 뿐만 아니라 초음파 검사의 정량적인 평가를 위한 기초자료로 유용하게 적용될 수 있을 것으로 판단된다.
본 연구는 초음파 도플러를 이용한 태아의 좌심실 심근 성능 지수를 정량적이고 객관적으로 측정하기 위해 MATLAB을 이용한 자동화프로그램을 개발하여 IVCT, IVRT, ET, FT를 검출하고 MPI를 계산하였다. 데이터 수집을 제외한 모든 과정을 자동화하였으며 각 측정값의 임상적 유용성을 알아보기 위해 동일한 태아를 대상으로 검사 중 실제 계측한 값과 비교하였다.

제안 방법

MPI 자동 측정 프로그램은 MATLAB R2016b 환경을 바탕으로 작성하였다. MATLAB 프로그램은 많은 분야에서 자료를 보다 쉽게 분석할 수 있도록 다양한 함수를 제공하며 정교한 영상처리를 수행할 수 있다.
따라서 본 저자는 이러한 초음파검사의 한계를 극복하기 위해 자동화된 프로그램을 이용하여 실제 임상에 적용 가능한 알고리즘을 개발하고자 연구를 시행하였다. MPI를 구하기 위해서는 심실 수축 시간 및 심실 이완 시간을 비롯하여 등용성 수축기 시간과 등용성 이완기 시간이 먼저 측정되어야 하며 본 연구에서는 혈류파형의 특성을 분석하고 그래프의 각 주기에서 time intervals를 자동으로 측정한 후에 MPI를 계산하는 방식을 적용하였다.
검사 중 Invert기능을 이용하여 좌심실 유입혈류는 양의 방향, 유출혈류는 음의 방향을 향하도록 설정하고 Sweep speed는 5, 샘플 체적의 크기는 2mm로 고정하였다. PRF는 8.3kHz, wall motion filter는 60Hz로, low Doppler gain으로 설정하였으며 모든 검사에서 입사각은 20도 아내, thermal index는0.4, mechanical index는 0.7이하로 유지한 채 검사를 시행하였다. 검사 장비는 Voluson E10(GE, USA)이며 3.
다음으로 펄스 도플러 모드를 시행하고 샘플 체적을 대동맥판과 승모판이 근접한 곳에 위치시키고 혈류 파형을 획득한다. 검사 중 Invert기능을 이용하여 좌심실 유입혈류는 양의 방향, 유출혈류는 음의 방향을 향하도록 설정하고 Sweep speed는 5, 샘플 체적의 크기는 2mm로 고정하였다. PRF는 8.
먼저 태아의 심첨사방단면도에서 탐촉자를 태아의 어깨 방향으로 약간 회전시켜 대동맥 기시부를 확인한다. 다음으로 펄스 도플러 모드를 시행하고 샘플 체적을 대동맥판과 승모판이 근접한 곳에 위치시키고 혈류 파형을 획득한다. 검사 중 Invert기능을 이용하여 좌심실 유입혈류는 양의 방향, 유출혈류는 음의 방향을 향하도록 설정하고 Sweep speed는 5, 샘플 체적의 크기는 2mm로 고정하였다.
본 연구는 초음파 도플러를 이용한 태아의 좌심실 심근 성능 지수를 정량적이고 객관적으로 측정하기 위해 MATLAB을 이용한 자동화프로그램을 개발하여 IVCT, IVRT, ET, FT를 검출하고 MPI를 계산하였다. 데이터 수집을 제외한 모든 과정을 자동화하였으며 각 측정값의 임상적 유용성을 알아보기 위해 동일한 태아를 대상으로 검사 중 실제 계측한 값과 비교하였다. 프로그램을 이용하여 측정한 MPI는 TI의 경우, 임신 1삼분기에서 0.
MPI를 측정하기 위한 도플러 파형의 획득 방법은 다음과 같다. 먼저 태아의 심첨사방단면도에서 탐촉자를 태아의 어깨 방향으로 약간 회전시켜 대동맥 기시부를 확인한다. 다음으로 펄스 도플러 모드를 시행하고 샘플 체적을 대동맥판과 승모판이 근접한 곳에 위치시키고 혈류 파형을 획득한다.
52로 임신이 지속될수록 MPI도 같이 증가하였으므로 선행 연구된 결과값과 같은 경향성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 비교를 위해 같은 태아를 대상으로 검사 중 실제로 MPI를 측정하였는데 임신초기, 중기, 말기 각 0.38, 0.50, 0.56으로 마찬가지로 임신이 증가할수록 MPI도 함께 증가하는 양상을 관찰하였다. 기존의 방식으로 측정한 MPI는 임신 초기, 중기, 말기에 각 0.
획득한 데이터는 자동 프로그램을 이용하여 IVRT, IVCT, ET, FT를 검출하고 MPI를 계산하였다. 비교를 위해 동일한 태아를 대상으로 각 time intervals와 MPI를 측정하였다. 임신 분기별 측정치의 평균값과 표준편차를 계산하였으며, Shapiro-Wilk test를 통해 정규성 검정을 시행하였다.
3은 도플러 파형 그래프에서 피크 검출을 시행하는 과정을 보여준다. 알고리즘을 이용하여 4개의 주기를 찾은 후 각각 주기에 해당하는 고 신호 통해 cardiac intervals의 timing 신호의 위치정보를 검출할 수 있다.
또한, 산전 검사상 고위험군에 속한 산모이거나 자궁 내 태아발육지연을 산부인과 전문의가 진단한 경우에는 연구대상에서 제외하였으며 영상의 화질이 떨어지거나 심실 유입혈류와 유출혈류가 충분히 포함되지 못한 경우에도 제외하였다. 초음파 검사는 경력 5년 이상의 숙련된 초음파사가 시행하였으며 태아의 움직임이 가장 적은 안정적인 상태에서 도플러 파형을 획득하였다. 모든 검사는 산모의 자율적인 참여하에 이루어졌다.
기존의 윤곽선은 미세한 변동이나 불연속성을 포함하고 있기 때문에 이를 감소시키거나 제외하여 파형 신호를 단순화시킨다. 획득한 최초의 도플러 파형은 이진화를 통하여 0과1의 영상으로 변환하고 윤곽선을 따라 Fig 2와 같이 단순 그래프 영상으로 만들어준 후 저역 통과 필터를 적용하여 신호의 미세한 변동을 제거하였다.

대상 데이터

본 연구는 2019년 4월부터 2020년 2월까지 산전초음파 검사를 위해 내원한 임산부 133명을 대상으로 시행한 전향적 단면 연구이다. 대상자는 임신성당뇨, 임신성 고혈압 등의 합병증이 동반되지 않은 건강한 단태 임산부로 하였으며 12주에 내원한 산모 47명을 임신 초기, 24주에 내원한 산모 54명을 임신 중기, 30주 이후에 내원한 산모 32명을 임신 말기로 정하였다. 또한, 산전 검사상 고위험군에 속한 산모이거나 자궁 내 태아발육지연을 산부인과 전문의가 진단한 경우에는 연구대상에서 제외하였으며 영상의 화질이 떨어지거나 심실 유입혈류와 유출혈류가 충분히 포함되지 못한 경우에도 제외하였다.
본 연구는 2019년 4월부터 2020년 2월까지 산전초음파 검사를 위해 내원한 임산부 133명을 대상으로 시행한 전향적 단면 연구이다. 대상자는 임신성당뇨, 임신성 고혈압 등의 합병증이 동반되지 않은 건강한 단태 임산부로 하였으며 12주에 내원한 산모 47명을 임신 초기, 24주에 내원한 산모 54명을 임신 중기, 30주 이후에 내원한 산모 32명을 임신 말기로 정하였다.
본 연구는 질병 이력이 없는 건강한 산모와 정상 태아만을 대상으로 평가하였다. 이는 본 연구의 가장 큰 제한점이며, 추후 이상 태아 또는 고위험 산모와의 비교 분석을 통해 자동화 프로그램의 임상적 유효성을 확보하여야 한다.
본 연구에서는 임신 초기에 해당하는 태아 47명과 임신 중기에 해당하는 태아 54명, 임신 말기에 해당하는 태아 32명, 총 133명을 대상으로 데이터를 얻었다. 획득한 데이터는 자동 프로그램을 이용하여 IVRT, IVCT, ET, FT를 검출하고 MPI를 계산하였다.
임신 중 초음파검사를 시행한 산모를 대상으로 좌심실의 도플러 영상을 획득하였다. 총 133개의 파형을 분석하였으며 임신 초기에 해당하는 47명, 임신 중기에 해당하는 54명, 임신 말기에 32명의 혈류 파형을 분석하였다.
임신 중 초음파검사를 시행한 산모를 대상으로 좌심실의 도플러 영상을 획득하였다. 총 133개의 파형을 분석하였으며 임신 초기에 해당하는 47명, 임신 중기에 해당하는 54명, 임신 말기에 32명의 혈류 파형을 분석하였다.

데이터처리

검사 중 실제 측정한 값이 임신 분기별로 차이가 있는지 알아보기 위해 정규성 검정을 시행한 후 일원 배치 분산분석을 실시하였다(Table 2). 임신 분기에 따라 IVCT, IVRT, FT, TI에는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났으나 ET는 p값이 0.
비교를 위해 동일한 태아를 대상으로 각 time intervals와 MPI를 측정하였다. 임신 분기별 측정치의 평균값과 표준편차를 계산하였으며, Shapiro-Wilk test를 통해 정규성 검정을 시행하였다. 임신 전 분기에서 자동 측정값과 실제 측정 값을 포함한 모든 측정치의 p값이 0.
자동 검출 시스템으로 측정한 값과 검사 중 실제 측정한 값이 임신 분기별로 차이가 있는지 알아보기 위해 일원 배치 분산분석을 실시하였다. 자료의 모든 통계학적 유의수준(p)은 0.
자동 검출 시스템으로 측정한 값이 임신 분기별로 유의한 차이가 있는지 알아보기 위해 정규성 검정을 시행한 후 일원 배치 분산분석을 실시하였다(Table 1). 임신 분기에 따라 IVCT, IVRT, ET, FT, TI에는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났다.
본 연구에서는 임신 초기에 해당하는 태아 47명과 임신 중기에 해당하는 태아 54명, 임신 말기에 해당하는 태아 32명, 총 133명을 대상으로 데이터를 얻었다. 획득한 데이터는 자동 프로그램을 이용하여 IVRT, IVCT, ET, FT를 검출하고 MPI를 계산하였다. 비교를 위해 동일한 태아를 대상으로 각 time intervals와 MPI를 측정하였다.

이론/모형

따라서 본 연구에서는 A wave의 최대값을 기준으로 각각의 cardiac intervals와 MPI를 구하고자 하며 이를 자동으로 측정하기 위해 피크 검출 알고리즘이 이용되었다.
저역 통과 필터를 이용하여 그래프의 고주파 신호를 감소시킨 후에는, 심장 주기에 따른 그래프의 규칙성을 찾기 위해 피크 검출 알고리즘을 적용하였다.^[12] 좌심실에 유입되는 혈류는 조기 이완기 승모판 유입 혈류 속도(E wave)와 후기 이완기 승모판 유입 혈류 속도(A wave)로 이루어져 있으며 태아는 성인과 달리 A wave가 더 우세하므로 그래프에서 가장 두드러지는 값은 A wave이다^[13-15].

성능/효과

사후검정에서는 IVCT와 IVRT, ET의 경우, 임신 초기보다 임신 중기와 말기에서 증가하는 모습을 보였으나 임신 중기와 말기 간에는 유의한 차이가 없었다. FT의 경우 임신 전 분기마다 유의한 차이가 나타났으며 임신 초기에서 말기로 갈수록 측정값이 증가하는 것을 확인하였다. TI는 임신 초기보다 임신 중기와 임신 말기에서 증가하였으나 임신 중기와 말기 간에는 유의한 차이가 없었다.
사후 검정에서는 IVCT와 FT의 경우, 임신 초기보다 임신 중기와 말기에서 증가하는 모습을 보였으나 임신 중기와 말기 간에는 유의한 차이가 없었다. IVRT와 TI의 경우 임신 전 분기마다 유의한 차이가 나타났으며 임신 초기에서 말기로 갈수록 측정값이 증가하는 것을 확인하였다.
56으로 마찬가지로 임신이 증가할수록 MPI도 함께 증가하는 양상을 관찰하였다. 기존의 방식으로 측정한 MPI는 임신 초기, 중기, 말기에 각 0.38, 0.50, 0.56으로 측정되었으며 임신이 진행됨에 따라 증가하는 경향을 보였으나 자동 측정법에 비하여 높은 분산을 보였다. 동일한 검사자가 측정함에도 결과에 분산이 높다는 것은 초음파 검사가 주관적이라는 특성상 측정에 변동이 있다는 것을 의미하며 본 연구의 자동측정법을 통하여 이를 극복할 수 있었다.
56으로 측정되었으며 임신이 진행됨에 따라 증가하는 경향을 보였으나 자동 측정법에 비하여 높은 분산을 보였다. 동일한 검사자가 측정함에도 결과에 분산이 높다는 것은 초음파 검사가 주관적이라는 특성상 측정에 변동이 있다는 것을 의미하며 본 연구의 자동측정법을 통하여 이를 극복할 수 있었다.
50이였으며 임신이 지속될수록 MPI도 같이 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. 본 연구에서는 133명의 태아를 대상으로 MPI를 측정하였고 임신 초기, 중기, 말기 각 0.45, 0.51, 0.52로 임신이 지속될수록 MPI도 같이 증가하였으므로 선행 연구된 결과값과 같은 경향성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 비교를 위해 같은 태아를 대상으로 검사 중 실제로 MPI를 측정하였는데 임신초기, 중기, 말기 각 0.
07으로 분기에 따른 평균 차이를 확인할 수 없었다. 사후 검정에서는 IVCT와 FT의 경우, 임신 초기보다 임신 중기와 말기에서 증가하는 모습을 보였으나 임신 중기와 말기 간에는 유의한 차이가 없었다. IVRT와 TI의 경우 임신 전 분기마다 유의한 차이가 나타났으며 임신 초기에서 말기로 갈수록 측정값이 증가하는 것을 확인하였다.
임신 분기에 따라 IVCT, IVRT, ET, FT, TI에는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났다. 사후검정에서는 IVCT와 IVRT, ET의 경우, 임신 초기보다 임신 중기와 말기에서 증가하는 모습을 보였으나 임신 중기와 말기 간에는 유의한 차이가 없었다. FT의 경우 임신 전 분기마다 유의한 차이가 나타났으며 임신 초기에서 말기로 갈수록 측정값이 증가하는 것을 확인하였다.
자동 검출 시스템으로 측정한 값이 임신 분기별로 유의한 차이가 있는지 알아보기 위해 정규성 검정을 시행한 후 일원 배치 분산분석을 실시하였다(Table 1). 임신 분기에 따라 IVCT, IVRT, ET, FT, TI에는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났다. 사후검정에서는 IVCT와 IVRT, ET의 경우, 임신 초기보다 임신 중기와 말기에서 증가하는 모습을 보였으나 임신 중기와 말기 간에는 유의한 차이가 없었다.
검사 중 실제 측정한 값이 임신 분기별로 차이가 있는지 알아보기 위해 정규성 검정을 시행한 후 일원 배치 분산분석을 실시하였다(Table 2). 임신 분기에 따라 IVCT, IVRT, FT, TI에는 유의한 차이가 있는 것으로 나타났으나 ET는 p값이 0.07으로 분기에 따른 평균 차이를 확인할 수 없었다. 사후 검정에서는 IVCT와 FT의 경우, 임신 초기보다 임신 중기와 말기에서 증가하는 모습을 보였으나 임신 중기와 말기 간에는 유의한 차이가 없었다.
임신한 기간 동안에는 태아의 심장이 성장 및 변화함에 따라 time intervals와 MPI도 변하게 되는데 본 연구의 결과를 보면 임신 기간 동안 IVCT와 IVRT이 주수가 증가 함에 따라 증가하였으며 임신이 지속될수록 MPI의 값을 증가함을 볼 수 있었다. 이같이 임신 기간에 따른 각 주기들의 변화는 임신 중 태아 심장의 발달 변화로 설명할 수 있다.
데이터 수집을 제외한 모든 과정을 자동화하였으며 각 측정값의 임상적 유용성을 알아보기 위해 동일한 태아를 대상으로 검사 중 실제 계측한 값과 비교하였다. 프로그램을 이용하여 측정한 MPI는 TI의 경우, 임신 1삼분기에서 0.45, 임신 2삼분기에서 0.51, 임신 3삼분기에서 0.52로 임신이 지속될수록 함께 증가하였으며 검사 중 실제 측정한 MPI도 각 0.38, 0.50, 0.56으로 증가하였다. 이는 본 연구에서 구현한 자동 측정 프로그램이 임상에서 유효하게 사용될 수 있다는 것으로 판단되며 선천적 심질환의 정확한 평가와 조기 진단에 도움을 줄 것으로 기대된다.

후속연구

본 연구는 임신 전체 분기의 심근 성능 지수를 측정하였다는 점과 자체 개발한 자동화 프로그램으로 임신 분기에 따른 태아 좌심실 심근 성능 지수의 정상 참고치를 제시하였다는 점에서 의미가 있다고 할 수 있다. 본 연구를 통해 향후 태아의 심장 기능 평가 뿐만 아니라 초음파 검사의 정량적인 평가를 위한 기초자료로 유용하게 적용될 수 있을 것으로 판단된다.
56으로 증가하였다. 이는 본 연구에서 구현한 자동 측정 프로그램이 임상에서 유효하게 사용될 수 있다는 것으로 판단되며 선천적 심질환의 정확한 평가와 조기 진단에 도움을 줄 것으로 기대된다.
본 연구는 질병 이력이 없는 건강한 산모와 정상 태아만을 대상으로 평가하였다. 이는 본 연구의 가장 큰 제한점이며, 추후 이상 태아 또는 고위험 산모와의 비교 분석을 통해 자동화 프로그램의 임상적 유효성을 확보하여야 한다. 그러나 기존에 발표된 여러 선행 연구들은 심근 성능 지수를 임신을 두 시기로만 나누어 비교하였으며 각 임신 분기에 대한 자료가 없었고, 검사자의 주관적인 판단에 의지하는 측정 방식으로 인해 연구마다 결과가 달랐다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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