[논문]무지개송어에서 분리된 IHNV (감염성 조혈 괴사바이러스) 유전자형에 따른 병원성 비교

이창주; 김광일; 한유선; 제갈명은; 김영진

doi:10.5352/jls.2021.31.6.574

무지개송어에서 분리된 IHNV (감염성 조혈 괴사바이러스) 유전자형에 따른 병원성 비교
Comparison of the Pathogenicity of Infectious Hematopoietic Necrosis Virus Genotypes Isolated from Rainbow Trout in Gangwon Province 원문보기

생명과학회지 = Journal of life science, v.31 no.6, 2021년, pp.574 - 580

이창주 (부산대학교 화학과) , 김광일 (부경대학교 수산생명의학과) , 한유선 (부산대학교 분자생물학과) , 제갈명은 (부산대학교 분자생물학과) , 김영진 (부산대학교 분자생물학과)

초록
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본 연구는 강원도지역에서 분리된 전염성조혈기괴사증 바이러스(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus: IHNV) 변이주들의 유전자형에 따른 병원성의 분석에 대한 연구이다. JRt-Shizuoka linage와 JRt-Nagano lineage에 속하는 IHNV 변이주들을 무지개송어 치어에 실험적으로 감염시켜 각 변이주들에 감염된 무지개송어의 폐사율을 비교하고, 병리조직을 관찰하며, 혈청형을 분석하였다. 그 분석의 결과, 고역가로 접종하였을 때 Sizuoka linage에 속하는 RtPc0314c와 RtPc0314g 변이주와 JRt-Nagano lineage에 속하는 RtPc0816g 변이주 모두 100% 누적 폐사율을 보였고, JRt-Shizuoka linage에 속하는 RtPc0314c와 RtPc0314g 변이주에 감염된 무지개송어에서 더 빠른 폐사가 관찰되었다. 저역가로 접종하였을 때에는 실험종료시까지 100% 폐사율을 보이지 않았지만, JRt-Nagano lineage에 속하는 변이주 보다 JRt-Shizuoka linage에 속하는 변이주에 감염된 무지개송어에서 더 높은 폐사율을 보였다. 또한 병리조직 분석 결과 RtPc0314c와 RtPc0314g 변이주에 감염된 무지개 송어의 신장과 비장 조직에서는 감염 증상이 확인되었지만, RtPc0816g 변이주에 감염된 무지개송어에서는 감염 증상이 확인되지 않았다. 하지만 이들 변이주들간의 구조 단백질, 혈청형에서는 차이가 없었다. 이러한 결과로 볼 때 강원도 지역에서 분리된 IHNV는 비록 구조 단백질과 혈청형의 차이는 나타나지 않았지만, JRt-Shizuoka lineage에 속하는 변이주들의 병원성이 더 높음을 확인할 수 있었다.

Abstract ▼ AI-Helper

This study investigated the pathogenicity of different genotypes of infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) strains isolated from infected rainbow trout in Gangwon Province. RtPc0314c and RtPc0314g strains belonging to the JRt-Shizuoka lineage and RtPc0816g strain belonging to the JRt-Nagano lineage showed 100% cumulative mortality when inoculated at a high titer. In addition, more rapid necrosis was observed in rainbow trout infected with RtPc0314c and RtPc0314g mutations. When inoculated at a low titer, 100% mortality was not observed until the end of the experiment, but the mortality was higher in rainbow trout infected with a mutant strain belonging to the JRt-Shizuoka linage than a mutant strain belonging to the JRt-Nagano lineage. A histopathological analysis showed a clear signature of infection in kidney and spleen tissues upon infection with RtPc0314c and RtPc0314g but no signature of infection associated with the Rt03186 strain. Based on the results in this study, it seems that strains belonging to the JRt-Shizuoka lineage in Gangwon Province IHNV are more pathogenic.

주제어

표/그림 (5)

그림 Fig. 1. Cytopathic effect (CPE) on EPC cell. IHNV isolates (B) RtPc0314c, (C) RtPc0314g, (D) RtPc0816g in Gangwon-province showed CPE on EPC cell 3days after inoculation.
그림 Fig. 2. Cumulative mortality (%) according to experimental infection. (A) Cumulative mortality (%) for 2 weeks after injection 7×10⁶ PFU isolates into abdominal cavity of rainbow trout. (B) Cumulative mortality (%) for 2 weeks after injection 7×10⁴ PFU isolates into abdominal cavity of Rainbow trout. IHNV isolates: RtPc0314c (◆), RtPc0314g (O) and RtPc0816g (▲), as a control of HBSS buffer (□).
그림 Fig. 3. Symptoms of rainbow trout after experimental infection of IHNV isolates. Rainbow trout infected with IHNV revealed symp-toms such as (A) pale gills, (B) dark skin or eyes, abdominal swelling, (C) hernia, (D) fin bleeding and (E) swollen intestine.
그림 Fig. 4. H&E staining from kidney and spleen of randomly selected rainbow trout 7days after infection with IHNV.
그림 Fig. 5. Analysis of Structural protein and serotype from IHNV isolates. (A) Structural protein of IHNV isolates (10% SDS-PAGE). (B) Structural protein of IHNV isolates by western blotting (C-D) Analysis of serotype from rainbow trout plasma after experimental infection. Primary antibody: Anti-MsYy0613 (C), Anti-RtPc0314d (D)

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서는 강원도 지역에서 보고된 변이주 중 JRt- Shizuoka lineage에 속하는 RtPc0314c와 RtPc0314g 그리고 JRt-Nagano lineage에 속하는 RtPc0816g를 대상으로 유전형에 따른 병원성을 무지개송어의 치어에서 실험적으로 평가하였다. 또한 아직까지 공식적으로 인정되는 표준 혈청형은 정해진 바 없지만 이들 변이주의 혈청형을 비교하였다.

제안 방법

본 연구에서는 무지개송어 양식장에서 빈번히 발생하는 IHNV 변이들에 대해 강원도 지역에서 보고된 두 유전형 JRt- shizuoka lineage와 JRt-Nagano lineage의 병원성에 대한 실험적 검증을 하였다. JRt-shizuoka lineage인 RtPc0314c, RtPc0314g와 JRt-Nagano lineage인 RtPc0618g IHNV 변이주들을 EPC 세포에 0.
혈청형 분석을 위해 0.3% formaldehyde로 불활화 시킨 1 μg/μl의 IHNV 변이주MsYy0613b, RtPc0314g 100 μl를 Freund’s adjuvant (Promega, USA)와 함께 1주일 간격으로 4회 주사하여 폴리클로날 항체를 생산하였다

후속연구

더 많은 변이주들에 따른 특성 및 병원성에 대한 연구가 필요하지만 본 연구는 앞으로 국내 IHNV 변이주들의 특성을 이해하고, 감염에 대응하기 위한 기초 자료로 기여할 것으로 기대한다.

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