[논문]Stage-Specific Assays to Study Biosynthetic Cargo Selection and Role of SNAREs in Export from the Endoplasmic Reticulum and Delivery to the Golgi

Allan, B.B.; Weissman, J.; Aridor, M.; Moyer, B.; Chen, C.D.; Yoo, J.S.; Balch, W.E.

doi:10.1006/meth.2000.0954

[해외논문] Stage-Specific Assays to Study Biosynthetic Cargo Selection and Role of SNAREs in Export from the Endoplasmic Reticulum and Delivery to the Golgi

Methods, v.20 no.4, 2000년, pp.411 - 416

Allan, B.B. , Weissman, J. , Aridor, M. , Moyer, B. , Chen, C.D. , Yoo, J.S. , Balch, W.E.

Abstract ▼ AI-Helper

To analyze the role of coat protein type II (COPII) coat components and targeting and fusion factors in selective export from the endoplasmic reticulum (ER) and transport to the Golgi, we have developed three novel, stage-specific assays. Cargo selection can be measured using a ''stage 1 cargo capture assay,'' in which ER microsomes are incubated in the presence of glutathione S-transferase (GST)-tagged Sar1 GTPase and purified Sec23/24 components to follow recruitment of biosynthetic cargo to prebudding complexes. This cargo recruitment assay can be followed by two sequential assays that measure separately the budding of COPII-coated vesicles from ER microsomes (stage 2) and, finally, delivery of cargo-containing vesicles to the Golgi (stage 3). We show how these assays provide a means to identify the snap receptor (SNARE) protein rBet1 as an essential component that is not required for vesicle formation, but is required for vesicle targeting and fusion during ER-to-Golgi transport. In general, these assays provide an approach to characterize the biochemical basis for the recruitment of a wide variety of biosynthetic cargo proteins to COPII vesicles and the role of different transport components in the early secretory pathway of mammalian cells.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

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용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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