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• 연구 방법
• 연구 결과

제안 방법

• 배양된 간세포 구상체의 detoxification 능력을 조사하기 위하여 암모니아의 분해 속도를 아산제약의 indophenol kits를 사용해서 측정하였고 이에 따른 urea 생성농도는 Blood urea nitrogen assay kit(Sigma Co.)를 사용하여 측정하였다. 암모니아의 제거 속도를 측정하기 위하여 배양 3일째부터 ImM NH₄CI을 첨가한 배지를 사용하였다.
• 본 연구에서는 보다 간세포에 적합하고 가교 정도에 따라 분해 정도를 조절할 수 있는 콜라젠을 이용하여 다공성 스폰지를 제조하였으며 이를 이용하여 쥐 일차 간세포를 배양하였다. 콜라젠 스폰지에 배양된 간세포는 단층 배양의 경우보다 높은 간 기능 활성을 나타내어 이를 이용한 인공 간의 개발이나 간세포 이식과 같은 조직 공학적 응용이 가능할 것으로 기대된다.
• )를 사용하여 측정하였다. 암모니아의 제거 속도를 측정하기 위하여 배양 3일째부터 ImM NH₄CI을 첨가한 배지를 사용하였다. 간세포의 중요한 대사기능의 하나인 알부민의 합성 및 분비는 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) 법을 사용하였는데, 1 차항체(IgG fraction to rat albumin), 알부민 표준, 2차 항체 (Peroxidase-Conjugated IgG fraction to rat albumin)는 OGARNON TECHNIKA CORPORATION 시약을 사용하였으며, 1 차항 체는 2您/成를 2차 항체는 1/5000을 사용하였다.
• 초산에 녹인 pH 3~4, 농도 0.5〜0.75(W/V)%의 콜라젠 용액 1 ml를 24 well plate의 각 well에 도포하고 -85°C의 초저온 냉동고에서 12시간 이상 냉동시킨 뒤 -80°C의 진공동결건조기(SAMWON, SFDSM 06, Korea)에서 24시간 동안 동결건조 시켰다. 동결건조된 다공성 형태의 콜라젠 스폰지를 진공 오븐에 넣고 먼저 2시간 정도 진공을 걸어 스폰지 내의 미량의 수분을 제거한 뒤 110°C까지 온도를 상승 시켜 24시간 동안 진공을 걸어주었다.

대상 데이터

• 1uM), ZnSO₄ . 7H₂O(50pM), H₂SeO₃(3pg/l), Linoleic acid(50mg/l), NaHCO₃(1.05g/l), HEPES(1.19g/l), Penicillin(0.0588g/l), Streptomycin (0.100g/l)을 첨가하여 사용하였다. 단층배양에 사용하는 직경 35mm 배양 well (Nunc Co.

이론/모형

• 풀어진 간 조직을 William's Medhim E(Gibco BRL)로 세척하여 거즈에 거르고, 100 Um pore의 나일론 메쉬에 거른 후 4°C에서 원심분리(500rpm, 50g, 2분)한다. 간세포의 viability는 trypan blue staining 방법에 의하여 측정하였다. 보통 200 g의 쥐로부터 약 2-3 X 108개 정도의 간세포를 회수할 수 있으며 viability는 90% 이상이다.
• 암모니아의 제거 속도를 측정하기 위하여 배양 3일째부터 ImM NH₄CI을 첨가한 배지를 사용하였다. 간세포의 중요한 대사기능의 하나인 알부민의 합성 및 분비는 ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) 법을 사용하였는데, 1 차항체(IgG fraction to rat albumin), 알부민 표준, 2차 항체 (Peroxidase-Conjugated IgG fraction to rat albumin)는 OGARNON TECHNIKA CORPORATION 시약을 사용하였으며, 1 차항 체는 2您/成를 2차 항체는 1/5000을 사용하였다.

후속연구

• 본 연구에서는 보다 간세포에 적합하고 가교 정도에 따라 분해 정도를 조절할 수 있는 콜라젠을 이용하여 다공성 스폰지를 제조하였으며 이를 이용하여 쥐 일차 간세포를 배양하였다. 콜라젠 스폰지에 배양된 간세포는 단층 배양의 경우보다 높은 간 기능 활성을 나타내어 이를 이용한 인공 간의 개발이나 간세포 이식과 같은 조직 공학적 응용이 가능할 것으로 기대된다.

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