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제안 방법
- 각각의 증폭된 산물을 pcDNA3(Invitrogen life technologies, USA) vector에 삽입하여 E. coli에 transformation한 뒤 Alkali lysis법으로 plasmid DNA를 추출하여 5',3'-말단에 인식부위로 붙여준 효소로 절단하여 삽입의 유무를 확인한 다음 염기서열을 결정하였다.
- 냉수성 고유어종인 열목어의 멸종을 방지하고 번식시키기 위한 생명공학적 연구 방법을 검토하기 위하여 GTHα, FSHβ와 LHβ 쇄를 발현 벡터에 cloning하여 염기서열을 결정하였다.
- S69276)을 기초로 하여 oligo primer를 제작하였다. 뇌하수체에서 합성한 cDNA를 주형으로 사용하여 PCR 방법으로 GTHα, FSHβ, LHβ를 각각 증폭하였다.
- 열목어의 뇌하수체에서 mRNA를 추출(QuickPrep™ Micro mRNA Purification Kit, Amersham Pharmacia Biotech., UK)한 뒤 cDNA로 합성(First-strand cDNA Synthesis Kit, Amersham Pharmacia Biotech., UK)하였다.
- 각각 74, 92, 97%의 유사성이 있었다. 이를 바탕으로 overapping PCR 법을 실시하여 단일 쇄 FSH와 LH 생산용 유전자를 확보하였다. 이를 이용하여 진핵세포에서의 뇌하수체 호르몬 대량생산의 가능성 여부를 연구 중이다.
대상 데이터
- 본 연구에 이용한 열목어는 2002년 삼척내수면 연구소로부터 수용된 것으로 성숙 초기의 암컷 개체 (평균체중: 190.6 g) 뇌하수체를 적출한 뒤 액체질소에 급속 냉동한 후 -80℃에서 mRNA 추출 전까지 보관하였다.
- 산천어 GTHα, FSHβ, LHβ 각각의 염기서열 (NCBI Accession number S69273, S69275, S69276)을 기초로 하여 oligo primer를 제작하였다. 뇌하수체에서 합성한 cDNA를 주형으로 사용하여 PCR 방법으로 GTHα, FSHβ, LHβ를 각각 증폭하였다.
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