[논문]꽃게 유생시기별 RNA/DNA, 단백질, Trypsin 및 Chymotrypsin 활성 변화

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김수경 (동해수산연구소,국립수산과학원) , 서형철 (갑각류연구센터,국립수산과학원) , 조영록 (갑각류연구센터,국립수산과학원) , 김아름 (갑각류연구센터,국립수산과학원) , 이윤호 (남해수산연구소,국립수산과학원) , 장인권 (갑각류연구센터,국립수산과학원)

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2004년 4월 10일 부화된 유생을 15톤 콘크리트 사각수조에 대량사육을 하면서 발달단계별로 총 500마리씩 채취하여 크기에 따라 3~50마리씩 동결건조하여(-56℃, 24시간) 무게를 측정하고 Tris-HCl용액 500 ul에 마쇄를 하여 원심분리(4℃, 1시간)한 후, 상등액을 10 成씩 취하고 TE 40 以로 희석을 한 후, 0.2 nmol 의 Na-benzoyl-L-arginin-4 methyl coumarinyl-7-amid (Bachem 사, 0.5% dimethyl-sulfoxide, Merck, Germany) 기질용액을 250 畝 첨가하여 형광광도계 (Fluoroskan Ascent FL, 30℃, 5분)로 Trypsin을 측정하였다. Chymotrypsine 상동의 방법으로 추출하고 0.

1 mM의 N-succinyl-(Ala)2-prol-phe-p-nitroanilide (SAPPNA, Sigma, Germany) 250 叫를 첨가하여 분광광도계로 410 nm에서 5분 동안 1분 간격으로 측정하여(25℃, PowerWave XS, Bio-Tek, USA) 단백질 mg당 1분 동안의 흡광도의 변화로 나타내었다(ABS/mg/min). RNA와 DNA는 상동의 방법으로 마쇄된 균질액을 100 成 취하여 0.2% TE-SDS (Sodium dodecyl sulfate)을 20 以 첨가하여 최종농도를 0.01% TE-SDS로 조절하고 Clemmesen (1993) 방법에 의해 형광광도계로 측정을 하였다(Fluoroskan Ascent FL, Thermo사, Germany).

/min로 급격하게 증가를 하였다. Chymotrypsin의 경우는 Zoea 3기까지는 검출이 되지 않았으며 4기에 이르러 0.10 ABS/mgProtein/min 로 나타났고 Crab 1기에 0.44 ABS/mg protein/min 로 증가하는 경향을 보임으로 유생초기의 단백질분해효소로서 chymotrypsino] 작용하지 않는 것으로 나타났다. 효소학적인 측면에서 보면 meglaopa기에서 crab 1기로 발달시 가장 큰 변화를 갖는 것을 알 수 있었다.
꽃게 유생의 발달단계별 마리당 RNA, DNA 농도의 변화와 그 비율을 보면(그림 2), megalopa기까지 RNA와 DNA의 양이 각각 마리당 0.15~2.08 昭, 0.02-0.24 您 으로 10배정도 증가하였고, megalopa에서 crabl기에 이르러 급격하게 증가하여 마리당 12.6 fig 과 L31 “g으로 나타나 유생이 발달하면서 RNA와 DNA양이 점차적으로증가하는 것으로 나타났다. R/D의 비율은 이와는 다르게 zoea 2기(10.
44 ABS/mg protein/min 로 증가하는 경향을 보임으로 유생초기의 단백질분해효소로서 chymotrypsino] 작용하지 않는 것으로 나타났다. 효소학적인 측면에서 보면 meglaopa기에서 crab 1기로 발달시 가장 큰 변화를 갖는 것을 알 수 있었다.

이는 Rotifer, Brachiunus μlicatilis를 zoea 2기까지 공급하고 zoea 3기부터 Artemia sp.를 제공하며, megalpa에서부터 바지락을 혼합공급 함으로 먹이계열 및 전환에 따른 영향 유무를 좀더 세밀하게 분석하면 꽃게 유생의 초기생활사를 이해하며 더 나은 성장을 유도할 수 있는 중요한 자료가 될 것으로 추측된다 .

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