[논문]In Vivo에서 젖소 초유 Insulin-like Growth Factor-I 분획이 마우스의 Splenocyte Activity에 미치는 영향

황경아; 김승일; 정순희; 양희진; 이수원

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황경아 (성균관대학교 식품생명공학과) , 김승일 (성균관대학교 식품생명공학과) , 정순희 (성균관대학교 식품생명공학과) , 양희진 (성균관대학교 식품생명공학과) , 이수원 (성균관대학교 식품생명공학과)

젖소 초유중에 함유된 IGF-I 은 30kDa와 1kDa ultrafiltration(UF) membrane을 이용하여 IGF-I rich fraction을 효과적으로 분리하였으며 분획내의 IGF-I은 SDS-PAGE와 Western blot으로 확인하였다. 분획한 IGF-I rich fraction이 murine splenocyte의 면역 활성에 미치는 영향을 실험한 결과 $1{\mu}g$ 투여군의 경우 대조구에 대비하여 Bcell과 T cell의 증식능력은 각각 33%와 76%의 증식능력을 보였고, natural killer cell의 항암 능력은 42.3%의 세포 독성을 나타내었다.

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문제 정의

이에 본 연구에서는 젖소 초유 IGF-K ultrafiltmtion 30kDa과 IkDa을 사용하여 IGFT을분획하고 분획된 IGF*"! rich fraction을 마우스에 게 2주간 복강 투여하고 이후 해부하여 비장 세포를 회수하여 splenocyte 활성으로 B cell과 T cell 증식과 종양세포에 대한 세포독성을 Natural killer cell 활성을 측정함으로써 면역 활성에 관하여 실험을 하였다.

제안 방법

젖소 초유중에 함유된 IGF-I 은 30kDa와 IkDa ultrafiltration(UF) membranee 이용하여 IGF-I rich fraction을 효과적으로 분리하였으며 분획내의 IGFTe SDS-PAGE와 Western blot으로 확인하였다. 분획한 IGF-I rich fracfiori이 murine splenocytee] 면역 활성에 미치는 영향을 실험한 결과 1㎍ 투여군의 경우 대조구에 대비하여 Be이}과 T cell의 증식능력은 각각 33%와 76%의 증식능력을 보였고, natural kilier cell의 항암 능력은 42.
초유중에 함유되어 있는 free IGF-I 의 분리는 30kDa 과 IkDa 의 ultrafiltration cartridge를 사용하여 retentate인 30kDa 이상의 성분을 제거하고 free IGFT을 포함하는 30kDa과 lkDa 사이의 IGFT rich fraction을 분리해 내었다. 분리된 IGF-I rich fraction 내의 IGFTe SDS-PAGE(Fig.

대상 데이터

assay를 이용하여 측정하였다(3). 실험동물로는 4주령 ICR 마우스를 구입하여 1주일 예비사육 시킨 후 2주간 복강 투여하고 Holsapple 등(4)의 방법에 의해 Murine splenocyte 분리를 분리하여 실험에 사용하였다.

이론/모형

NK cell의 활성측정은 Odaldo 등(6)의 방법에 따라 natural killer cell에 민감한 YAC-1 cell 에 대한 cytotoxicity로서 측정하였고, 세포독성은 아래의 식에 의해 산출하였다*
분리한 비장세포는 Landreth 등(5)의 방법에 의해 즉정하였고, 세포 증식을 위한 mitogen으로 B ceil과 T cell은 각각 con A와 LPS를 사용하였다.
분만 후 24시간이내에 착유 한 젖소 초유는 30kDa과 가cDa ultrafiltration membrane를 이용하여 IGF-I rich fraction을 분리하였고(2), 분리된 fraction 중의 IGF-I 양은 sandwich ELISA assay를 이용하여 측정하였다(3). 실험동물로는 4주령 ICR 마우스를 구입하여 1주일 예비사육 시킨 후 2주간 복강 투여하고 Holsapple 등(4)의 방법에 의해 Murine splenocyte 분리를 분리하여 실험에 사용하였다.

성능/효과

B cell 증식효과는 1, 0.1 및 0.01㎍/㎖의 농도에서 대조구에 비해 IGF~I rich fraction 은 각각 76%, 42%의 세포증식 효과를 보였으며 0.01, 0.001㎍/㎖의 농도에서는 각각 40% 와 10%의 증식율을 나타내었다(Fig. 3).
001㎍의 농도에서는 세포증식 효과를 나타내지 못했다. IGF-I 처리구는 1, 0.1, 0.01 및 0.001㎍의 농도로 복강 투여시 대조구에 비해 100%, 50%, 24% 및 10%의 세포 증식율을나타내었고, 유청 처리구에서는 1, 0.1, 0.01 및 0.001㎍의 농도로 투여한 군이 각각 20%, 5%, 8%와 약 3%의 세포 증식율을 나타내었다.
Natural killer cell의 항암작용은 l/g의 농도로 복강 투여한 군에서 IGF-I rfe 약 42.3% 의 세포독성율을 보였고, 1GFTe 55.43%, whey는 3(X44%의 세표독성율을 나타내었다. 또한 in vivo에서 IGF-I rich fraction과 IGFTe YAC-1 cell lysis에 대해 농도 의존적인 경향을 보였다(Fig.
43%, whey는 3(X44%의 세표독성율을 나타내었다. 또한 in vivo에서 IGF-I rich fraction과 IGFTe YAC-1 cell lysis에 대해 농도 의존적인 경향을 보였다(Fig. 4).
lkDa 사이의 IGFT rich fraction을 분리해 내었다. 분리된 IGF-I rich fraction 내의 IGFTe SDS-PAGE(Fig. 1A)와 Western blotting(Fig. IB)으로서 IGFT의 존재를 확인하였고, IGFT 함량을 ELISA로 정량한 결과 단백질 ling당 10ng의 IGF-1 이 함유되어있는 것으로 확인되었다.
분리한 IGF니 rich fractione] T cell 증식에 미치는 영향을 실혐한 결과 Fig. 2와 같이 IGF-I rf 처리구는 1, 0.1, 0.01/zg/me 처리구에서 약 33%, 12%, 7%의 증식능력을 보였고 0.001㎍의 농도에서는 세포증식 효과를 나타내지 못했다. IGF-I 처리구는 1, 0.
blot으로 확인하였다. 분획한 IGF-I rich fracfiori이 murine splenocytee] 면역 활성에 미치는 영향을 실험한 결과 1㎍ 투여군의 경우 대조구에 대비하여 Be이}과 T cell의 증식능력은 각각 33%와 76%의 증식능력을 보였고, natural kilier cell의 항암 능력은 42.3%의 세포 독성을 나타내었다.

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