초록 ▼

본 발명은 사람 싸이토메갈로 바이러스(human cytomegalovirus, "HCMV")의 즉시초기(immediate early, "IE") 유전자 또는 사람 EF1α 유전자로부터 유래된 유전자 발현 조절요소를 포함하는 강력한 전사활성을 가진 진핵세포 발현벡터에 관한 것이다. 본 발명의 진핵세포 발현벡터는 다음과 같은 특징을 가진다: 첫째, HCMV IE 유전자 또는 사람 EFlα 유전자의 인핸서/프로모터를 삽입하여 다양한 종류의 진핵세포에서 강력한 전사활성이 유도될 수 있도록 하였다; 둘째

본 발명은 사람 싸이토메갈로 바이러스(human cytomegalovirus, "HCMV")의 즉시초기(immediate early, "IE") 유전자 또는 사람 EF1α 유전자로부터 유래된 유전자 발현 조절요소를 포함하는 강력한 전사활성을 가진 진핵세포 발현벡터에 관한 것이다. 본 발명의 진핵세포 발현벡터는 다음과 같은 특징을 가진다: 첫째, HCMV IE 유전자 또는 사람 EFlα 유전자의 인핸서/프로모터를 삽입하여 다양한 종류의 진핵세포에서 강력한 전사활성이 유도될 수 있도록 하였다; 둘째, 다클로닝 부위(multiple cloning site) 상류에 HCMV IE 유전자 또는 사람 EFlα 유전자의 5' UTR(5' untranslated region)을 삽입하여 하류의 이종 유전자 발현효율을 극대화하였다; 셋째, 다양한 진핵세포에서 강력하고 안정한 유전자 발현을 유도할 수 있으므로, 진핵세포에서 일시적 혹은 영구적으로 높은 유전자 발현을 유도하고자 할 때 또는 레트로바이러스 패키징 벡터의 제조에 유용하게 사용될 수 있다; 넷째, 생체내에서도 강력하고 안정한 유전자 발현을 유도할 수 있으므로, 유전자 치료요법에 유용하게 사용될 수 있다.

대표청구항 ▼

다클로닝 부위, BGH(bovine growth hormone) poly(A) 아데닐화 신호부위, SV40 프로모터와 복제원점, 네오마이신 내성유전자 및 ColE1 복제원점을 포함하며, 전기 다클로닝 부위의 상류에 강력한 전사활성을 가진 이종 유전자 유래의 유전자 발현 조절요소를 포함하는 진핵세포 발현벡터. 제 1항에 있어서, 이종 유전자 유래의 유전자 발현 조절요소는 사람 싸이토메갈로 바이러스(human cytomegalo virus) 즉시초기 유전자의 프로모터/인핸서, 엑손 1, 인트론 A 및 엑손 2의 ATG 개시코돈 직전까

다클로닝 부위, BGH(bovine growth hormone) poly(A) 아데닐화 신호부위, SV40 프로모터와 복제원점, 네오마이신 내성유전자 및 ColE1 복제원점을 포함하며, 전기 다클로닝 부위의 상류에 강력한 전사활성을 가진 이종 유전자 유래의 유전자 발현 조절요소를 포함하는 진핵세포 발현벡터. 제 1항에 있어서, 이종 유전자 유래의 유전자 발현 조절요소는 사람 싸이토메갈로 바이러스(human cytomegalo virus) 즉시초기 유전자의 프로모터/인핸서, 엑손 1, 인트론 A 및 엑손 2의 ATG 개시코돈 직전까지의 염기서열인 것을 특징으로 하는 진핵세포 발현벡터. 제 1항에 있어서, 이종 유전자 유래의 유전자 발현 조절요소는 사람 EF1α 유전자의 프로모터/인핸서, 엑손 1, 인트론 A 및 엑손 2의 ATG 개시코돈 직전까지의 염기서열인 것을 특징으로 하는 진핵세포 발현벡터. 제 1항에 있어서, 다클로닝 부위에 사람의 VEGF(vascular endothelial growth factor) 유전자가 삽입된 것을 특징으로 하는 진핵세포 발현벡터. 다클로닝 부위, BGH(bovine growth hormone) poly(A) 아데닐화 신호부위, SV40 프로모터와 복제원점, 네오마이신 내성유전자 및 ColE1 복제원점을 포함하며, 전기 다클로닝 부위의 상류에 서열번호 3의 유전자 서열을 포함하는 하기와 같은 유전자 지도를 가지는 진핵세포 발현벡터 pCN:다클로닝 부위, BGH(bovine growth hormone) poly(A) 아데닐화 신호부위, SV40 프로모터와 복제원점, 네오마이신 내성유전자 및 ColE1 복제원점을 포함하며, 전기 다클로닝 부위의 상류에 서열번호 6의 유전자 서열을 포함하는 하기와 같은 유전자 지도를 가지는 진핵세포 발현벡터 pEF: 다클로닝 부위, BGH(bovine growth hormone) poly(A) 아데닐화 신호부위, SV40 프로모터와 복제원점, 네오마이신 내성유전자 및 ColE1 복제원점을 포함하며, 전기 다클로닝 부위의 상류에 서열번호 3의 유전자 서열을 포함하고, 전기 다클로닝 부위에 사람의 VEGF 유전자가 삽입된 하기와 같은 유전자 지도를 가지는 진핵세포 발현벡터 pCN-VEGF:다클로닝 부위, BGH(bovine growth hormone) poly(A) 아데닐화 신호부위, SV40 프로모터와 복제원점, 네오마이신 내성유전자 및 ColE1 복제원점을 포함하며, 전기 다클로닝 부위의 상류에 서열번호 6의 유전자 서열을 포함하고, 전기 다클로닝 부위에 사람의 VEGF 유전자가 삽입된 하기와 같은 유전자 지도를 가지는 진핵세포 발현벡터 pEF-VEGF: 제 5항의 pCN 벡터로 형질전환된 재조합 대장균(E. coli) Top10-pCN(KFCC-11045). 제 7항의 pCN-VEGF 벡터로 형질전환된 재조합 대장균(E. coli) Top10-pCN/VEGF(KFCC-11064). 제 8항의 pEF-VEGF 벡터로 형질전환된 재조합 대장균(E. coli) Top10-pEF/VEGF(KFCC-11063). <