초록

본 발명은 살충제로써 사용될 수 있는 분리된 재조합 플루텔라 실로스텔라 (Plutella xylostella)의 바큐로바이러스(baculovirus)를 제공한다. 바람직하게는, 본 발명에 의한 재조합 바큐로바이러스는 이의 게놈에 살충효과가 있는 독소를 만드는 유전자를 포함한다. 또한, 본 발명은 재조합 Plutella xylostella의 바큐로바이러스를 포함하는 살충제의 조성물과 제형, 및 곤충 해충을 죽이고 병충해에 의한 농작물의 피해를 줄이는 방법을 제공한다.

대표청구항 ▼

야생형 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큐로바이러스(PxNPV)에 대하여 다음으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 유전적 변형을 갖는 분리된 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큐로바이러스(PxNPV):(a) 제한효소 절단부위의 도입 또는 결실;(b) 바이러스에 의해 암호화되는 유전자의 변형, 결실 또는 중복;(c) 이종 단백질을 암호하는 유전자의 도입; 및,(d) 전기의 조합.제 1항에 있어서,전기 바큐로바이러스 게놈 안에, 곤충 세포에서 전사를 활성화시킬 수 있는 프로모터와

야생형 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큐로바이러스(PxNPV)에 대하여 다음으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 유전적 변형을 갖는 분리된 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큐로바이러스(PxNPV):(a) 제한효소 절단부위의 도입 또는 결실;(b) 바이러스에 의해 암호화되는 유전자의 변형, 결실 또는 중복;(c) 이종 단백질을 암호하는 유전자의 도입; 및,(d) 전기의 조합.제 1항에 있어서,전기 바큐로바이러스 게놈 안에, 곤충 세포에서 전사를 활성화시킬 수 있는 프로모터와 작동가능하게 연결된(operably linked) 곤충을 변형시키는 물질을 암호화하는 핵산을 포함하고 있는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 2항에 있어서,전기 곤충을 변형시키는 물질은 살충 독소인 것을 특징으로 하는 재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 3항에 있어서,전기 독소는 AaIT, AaHIT1, AaHIT2, LqhIT2, LqqIT1, LqqIT2, BjIT1, BjIT2, LqhP35, LqhαIT, SmpIT2, SmpCT2, SmpCT3, SmpMT, DK9.2, DK11, DK12,μ-아가톡신(μ-agatoxin), 킹콩 톡신(King Kong toxin), Pt6, NPS-326, NPS-331, NPS-373, Tx4(6-1), TxP-1, ω-아트라코톡신(ω-atracotoxin), α-코노톡신(α-conotoxin), μ-코노톡신(conotoxin), 클로로톡신(chlorotoxin) 및 ω-코노톡신(ω-conotoxin)으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 4항에 있어서,전기 독소는 AaIT, TxP-1, LquIT2, 및 ω- 아트라코톡신으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 4항에 있어서,이종의 시그널 펩티드를 추가로 포함하고, 전기 시그널 펩티드를 암호화하는 서열은 전기 독소를 암호화하는 서열의 프레임에 맞춰 융합된 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 6항에 있어서,전기 시그널 펩티드는 봄빅스 모리(Bombyx mori)의 pBMHPC-12 시그널 서열; 만두카 섹스타(Manduca sexta)의 아디포키네틱 호르몬 시그널(adipokinetic hormone signal); 만두카 섹스타(Manduca sexta)의 아포리포포린(apolipophorin) 시그널 서열; 봄빅스 모리(Bombyx mori)의 코리온(chorion) 시그널 서열; 초파리(Drosophila melanogaster)의 큐티클 시그널 서열; 초파리(Drosophila melanogaster)의 에스터라제-6(esterase-6) 시그널 서열; 및, 봄빅스 모리(Bombyx mori)의 성-특이적인 시그널 서열로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 2항에 있어서,전기 프로모터는 hsp70 프로모터인 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 8항에 있어서,전기 프로모터는 hsp70 Bam 및 hsp70 Xba로 구성되는 그룹으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 3항에 있어서,전기 프로모터는 DA26, 35K, 6.9K, 폴리헤드린(polyhedrin), hsp70 및 액틴 프로모터로 구성되는 그룹으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 3항에 있어서,전기 게놈은 바이러스의 egt 유전자를 불활성화시키기 위해서 추가로 변형되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 3항에 있어서,곤충 세포에서 전사를 활성화시킬 수 있는 프로모터에 작동가능하게 연결된 (operably linked), 유충 호르몬 에스터라제(JHE)를 암호화하는 핵산을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 5항에 있어서,전기 프로모터는 hsp70 프로모터인 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).초파리 hsp70 프로모터에 작동가능하게 연결된, TxP-1를 암호화하는 서열을 게놈에 포함하는 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큐로바이러스 (PxNPV).초파리 hsp70 프로모터에 작동 가능하게 연결된, AaIT를 암호화하는 서열을 게놈에 포함하는 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큐로바이러스 (PxNPV).제 1항에 있어서,전기 유전적 변형은 야생형 PxNPV에는 존재하지 않는 클로닝 부위를 형성하는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 16항에 있어서,곤충 세포에서 전사를 활성화시킬 수 있는 프로모터에 작동 가능하게 연결된 (operably linked), 곤충을 변형시키는 물질을 암호화하는 핵산 서열이 전기 클로닝 부위에 삽입되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 17항에 있어서,전기 곤충을 변형시키는 물질은 살충 독소인 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 18항에 있어서,전기 독소는 AaIT, AaHIT1, AaHIT2, LqhIT2, LqqIT1, LqqIT2, BjIT1, BjIT2, LqhαIT, LqhP35, SmpIT2, SmpCT2, SmpCT3, SmpMT, DK9.2, DK11, DK12, μ-아가톡신 (μ-agatoxin), 킹콩 톡신(King Kong toxin), Pt6, NPS-326, NPS-331, NPS-373, Tx4(6-1), TxP-1, ω-아트라코톡신(ω-atracotoxin), α-코노톡신(α-conotoxin), μ-코노톡신(μ-conotoxin), 클로로톡신(chlorotoxin) 및 ω-코노톡신(ω-conotoxin)으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 19항에 있어서,전기 프로모터는 DA26, 35K, 6.9K, 폴리헤드린(polyhedrin), hsp70 및 액틴 프로모터로 구성되는 그룹으로 부터 선택되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 20항에 있어서,전기 게놈은 바이러스의 egt유전자를 불활성화시키기 위해서 추가로 변형되는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).제 21항에 있어서,곤충 세포에서 전사를 활성화시킬 수 있는 프로모터에 작동 가능하게 연결된, 유충 호르몬 에스터라제(JHE)를 암호화하는 핵산을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는재조합 바큐로바이러스(PxNPV).ATCC VR-2607, ATCC VR-2608, 및 ATCC VR-2609로 구성되는 그룹으로부터 선택 되는 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스(PxNPV).제 1항에서 정의된 재조합 바큘로바이러스로부터 분리된 게놈 DNA를 포함하는 직접연결 벡터(direct ligation vector).제 24항에 있어서,전기 DNA는 곤충 세포에서 전사를 활성화시킬 수 있는 프로모터와 작동 가능하게 연결된, 곤충을 변형시키는 물질을 암호화하는 DNA를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는직접연결 벡터(direct ligation vector).제 25항에 있어서,전기 곤충을 변형시키는 물질은 AaIT, AaHIT1, AaHIT2, LqhIT2, LqqIT1, LqqIT2, LqhP35,BjIT1, BjIT2, LqhαIT, SmpIT2, SmpCT2, SmpCT3, SmpMT, DK9.2, DK11, DK12, μ-아가톡신(μ-agatoxin), 킹콩 톡신(King Kong toxin), Pt6, NPS-326, NPS-331, NPS-373, Tx4(6-1), TxP-1, ω-아트라코톡신(ω-atracotoxin), α-코노톡신(α-conotoxin), μ-코노톡신(μ-conotoxin), 클로로톡신(chlorotoxin) 및 ω-코노톡신(ω-conotoxin)으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 독소를 포함하는 것을 특징으로 하는직접연결 벡터(direct ligation vector).제 26항에 있어서,이종의 시그널 펩티드를 추가로 포함하고, 전기 시그널 펩티드를 암호화하는 서열은 전기 독소를 암호화하는 서열의 프레임에 맞게 융합되는 것을 특징으로 하는직접연결 벡터(direct ligation vector).제 27항에 있어서,전기 시그널 펩티드는 봄빅스 모리(Bombyx mori)의 pBMHPC-12 시그널 서열; 만두카 섹스타(Manduca sexta)의 아디포키네틱 호르몬 시그널(adipokinetic hormone signal); 만두카 섹스타(Manduca sexta)의 아포리포포린(apolipophorin) 시그널 서열; 봄빅스 모리(Bombyx mori)의 코리온(chorion) 시그널 서열; 초파리(Drosophila melanogaster)의 큐티클 시그널 서열; 초파리(Drosophila melanogaster)의 에스터라제-6(esterase-6) 시그널 서열; 및, 봄빅스 모리(Bombyx mori)의 성-특이적인 시그널 서열로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 직접연결 벡터(direct ligation vector).제 25항에 있어서,전기 게놈은 바이러스의 egt 유전자를 불활성화시키기 위해서 추가로 변형되는 것을 특징으로 하는직접연결 벡터(direct ligation vector).제 25항에 있어서,곤충 세포에서 전사를 활성화시킬 수 있는 프로모터에 작동 가능하게 연결된 (operably linked) 유충 호르몬 에스터라제(JHE)를 암호화하는 핵산을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는직접연결 벡터(direct ligation vector).제 16항에서 정의된 재조합 바큘로바이러스로부터 분리된 게놈 DNA를 포함하는 직접연결 벡터(direct ligation vector).제 19항에서 정의된 재조합 바큘로바이러스로부터 분리된 게놈 DNA를 포함하는 직접연결 벡터(direct ligation vector).제 23항에서 정의된 재조합 바큘로바이러스로부터 분리된 게놈 DNA를 포함하는 직접 연결 벡터(direct ligation vector).야생형 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스(PxNPV)에 대하여 다음으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 유전적 변형을 갖는 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스(PxNPV) 및 농학적으로 허용되는 담체를 포함하는 살충제 조성물:(a) 제한 효소 절단 부위의 도입 또는 결실;(b) 바이러스에 의해 암호화되는 유전자의 변형, 결실 또는 중복;(c) 이종 단백질을 암호하는 유전자의 도입; 및,(d) 전기의 조합.제 34항에 있어서,전기 바큘로바이러스 게놈 안에, 곤충 세포에서 전사를 활성화시킬 수 있는 프로모터와 작동가능하게 연결된(operably linked), 곤충을 변형시키는 물질을 암호화하는 핵산을 포함하고 있는 것을 특징으로 하는살충제 조성물.제 35항에 있어서,전기 곤충을 변형시키는 물질은 AaIT, AaHIT1, AaHIT2, LqhIT2, LqqIT1, LqqIT2, LqhP35, BjIT1, BjIT2, LqhαIT, SmpIT2, SmpCT2, SmpCT3, SmpMT, DK9.2, DK11, DK12, μ-아가톡신(μ-agatoxin), 킹콩 톡신(King Kong toxin), Pt6, NPS-326, NPS-331, NPS-373, Tx4(6-1), TxP-1, ω-아트라코톡신(ω-atracotoxin), α-코노톡신(α-conotoxin), μ-코노톡신(μ-conotoxin), 클로로톡신(chlorotoxin) 및 ω-코노톡신(ω-conotoxin)으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 살충 독소인 것을 특징으로 하는살충제 조성물.제 36항에 있어서,전기 재조합 바큘로바이러스는 이종의 시그널 펩티드를 추가로 포함하고, 전기 시그널 펩티드를 암호화하는 서열은 전기 독소를 암호화하는 서열의 프레임에 맞게 융합되는 것을 특징으로 하는 살충제 조성물.제 37항에 있어서,전기 시그널 펩티드는 봄빅스 모리(Bombyx mori)의 pBMHPC-12 시그널 서열; 만두카 섹스타(Manduca sexta)의 아디포키네틱 호르몬 시그널(adipokinetic hormone signal); 만두카 섹스타(Manduca sexta)의 아포리포포린(apolipophorin) 시그널 서열; 봄빅스 모리(Bombyx mori)의 코리온(chorion) 시그널 서열; 초파리(Drosophila melanogaster)의 큐티클 시그널 서열; 초파리(Drosophila melanogaster)의 에스터라제-6(esterase-6) 시그널 서열; 및, 봄빅스 모리(Bombyx mori)의 성-특이적인 시그널 서열로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는살충제 조성물.제 36항에 있어서,전기 게놈은 바이러스의 egt 유전자를 변형시키기 위해서 추가로 변형되는 것을 특징으로 하는 살충제 조성물.제 36항에 있어서,전기 유전적 변형은 야생형 PxNPV에는 존재하지 않는 클로닝 부위를 형성하는 것을 특징으로 하는살충제 조성물.제 40항에 있어서,전기 바큘로바이러스는 곤충 세포에서 전사를 활성화시킬 수 있는 프로모터에 작동 가능하게 연결된(operably linked), 곤충을 변형시키는 물질을 암호화하는 핵산 서열을 전기 클로닝 부위에 포함하고 있는 것을 특징으로 하는살충제 조성물.제 41항에 있어서,전기 곤충을 변형시키는 물질은 살충 독소인 것을 특징으로 하는살충제 조성물.제 42항에 있어서,전기 독소는 AaIT, AaHIT1, AaHIT2, LqhIT2, LqqIT1, LqqIT2, BjIT1, BjIT2, LqhαIT, LqhP35, SmpIT2, SmpCT2, SmpCT3, SmpMT, DK9.2, DK11, DK12, μ-아가톡신 (μ-agatoxin), 킹콩 톡신(King Kong toxin), Pt6, NPS-326, NPS-331, NPS-373, Tx4(6-1), TxP-1, ω-아트라코톡신(ω-atracotoxin), α-코노톡신(α-conotoxin), μ-코노톡신(μ- conotoxin), 클로로톡신(chlorotoxin) 및 ω-코노톡신(ω-conotoxin)으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는살충제 조성물.제 2항에서 정의된 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스 및 농학적으로 허용되는 담체를 포함하는 살충제 조성물.제 4항에서 정의된 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스 및 농학적으로 허용되는 담체를 포함하는 살충제 조성물.제 7항에서 정의된 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스 및 농학적으로 허용되는 담체를 포함하는 살충제 조성물.제 14항에서 정의된 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스 및 농학적으로 허용되는 담체를 포함하는 살충제 조성물.제 15항에서 정의된 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스 및 농학적으로 허용되는 담체를 포함하는 살충제 조성물.제 20항에서 정의된 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스 및 농학적으로 허용되는 담체를 포함하는 살충제 조성물.제 23항에서 정의된 재조합 플루텔라 실로스텔라(Plutella xylostella) 바큘로바이러스 및 농학적으로 허용되는 담체를 포함하는 살충제 조성물.제 44항에서 정의된 살충제 조성물을 살충에 효과적인 양으로 병충에 접촉시키는 것을 포함하는 곤충을 죽이는 방법.제 45항에서 정의된 살충제 조성물을 살충에 효과적인 양으로 병충에 접촉시키는 것을 포함하는 곤충을 죽이는 방법.제 46항에서 정의된 살충제 조성물을 살충에 효과적인 양으로 병충에 접촉시키는 것을 포함하는 곤충을 죽이는 방법.제 47항에서 정의된 살충제 조성물을 살충에 효과적인 양으로 병충에 접촉시키는 것을 포함하는 곤충을 죽이는 방법.제 48항에서 정의된 살충제 조성물을 살충에 효과적인 양으로 병충에 접촉시키는 것을 포함하는 곤충을 죽이는 방법.제 49항에서 정의된 살충제 조성물을 살충에 효과적인 양으로 병충에 접촉시키는 것을 포함하는 곤충을 죽이는 방법.제 50항에서 정의된 살충제 조성물을 살충에 효과적인 양으로 병충에 접촉시키는 것을 포함하는 곤충을 죽이는 방법.