IPC분류정보
국가/구분 |
한국(KR)/공개특허
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국제특허분류(IPC9판) |
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출원번호 |
10-2005-7023041
(2005-12-01)
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공개번호 |
10-2006-0006846
(2006-01-19)
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국제출원번호 |
PCT/CH2004/000321
(2004-05-27)
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국제공개번호 |
WO2004106557
(2004-12-09)
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번역문제출일자 |
2005-12-01
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DOI |
http://doi.org/10.8080/1020057023041
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발명자
/ 주소 |
- 고에세 마르쿠스 귄터
/ 스위스 체하-**** 바젤 하르트스트라쎄 **
- 퍼킨스 존 비
/ 스위스 체하-**** 라이나흐 마르스베그 *
- 쉰스 기슬라인
/ 스위스 체하-**** 아에쉬 에팅거스트라쎄 *
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출원인 / 주소 |
- 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. / 네덜란드 엔엘-**** 티이 헤르렌 헤트 오버룬 *
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대리인 / 주소 |
-
장성구;
김창세
(JANG, Seong Ku)
-
서울시 서초구 양재동 ***-* 트러스트타워**층(제일광장특허법률사무소);
서울 서초구 양재동 ***-* 트러스트타워**층(제일광장특허법률사무소)
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심사진행상태 |
취하(심사미청구) |
법적상태 |
취하 |
초록
본 발명은 티아민 생성물을 과생산하여 배지로 방출하게 하는 돌연변이를 함유하는 미생물을 이용하여 티아민 생성물을 제조하는 방법에 관한 것이다. 또한 미생물의 생물학적으로 순수한 배양물 및 돌연변이를 함유하는 단리된 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 또한, 임상 시료에서 병원성 미생물을 검출하는 방법, 항생제를 확인하기 위한 분석법, 및 이런 분석법에 의해 확인되는 항생제에 관한 것이다.
대표청구항
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바실라세아에(Bacillaceae), 락토바실라세아에(Lactobacillaceae), 스트렙토코카세아에(Streptococcaceae), 코리네박테리아세아에(Corynebacteriaceae) 및 브레비박테리아세아에(Brevibacteriaceae)로 구성된 군에서 선택되고, 티아민 생산을 규제철폐하여 티아민 생성물이 배양 배지로 방출되게 하는 돌연변이를 함유하는 미생물.제 1 항에 있어서, 돌연변이가 △thiL, tx1, tx26 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 미생물.제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,바실러스, 락토
바실라세아에(Bacillaceae), 락토바실라세아에(Lactobacillaceae), 스트렙토코카세아에(Streptococcaceae), 코리네박테리아세아에(Corynebacteriaceae) 및 브레비박테리아세아에(Brevibacteriaceae)로 구성된 군에서 선택되고, 티아민 생산을 규제철폐하여 티아민 생성물이 배양 배지로 방출되게 하는 돌연변이를 함유하는 미생물.제 1 항에 있어서, 돌연변이가 △thiL, tx1, tx26 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 미생물.제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,바실러스, 락토바실러스, 락토코커스, 코리네박테리움 및 브레비박테리움으로 구성된 군에서 선택되는 미생물.제 3 항에 있어서, 바실러스 섭틸리스(Bacillus subtilis) 세포인 미생물.제 4 항에 있어서, 비. 섭틸리스(B. Subtilis) TH95(ATCC PTA-5221)인 미생물.제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한 항에 있어서, (a) thiA 유전자 생성물을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열(여기서, 상기 폴리뉴클레오타이드 서열의 하나 이상의 카피가 DNA 카세트에 함유되어 있다)|(b) thiKC 오페론의 유전자 생성물을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열(여기서, 상기 폴리뉴클레오타이드 서열의 하나 이상의 카피가 DNA 카세트에 함유되어 있다)| 및(c) tenAl-thiOSGFD 오페론의 유전자 생성물을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열(이 폴리뉴클레오타이드 서열은 강한 구성적 프로모터에 의해 유효하게 제어된다)로 구성된 군에서 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열을 함유하는 DNA 카세트를 추가로 포함하는 미생물.제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한 항에 있어서, (a) tenAl-thiOSGFD 오페론의 유전자 생성물을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 함유하는 DNA 카세트, 및 (b) thiA 유전자 생성물을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열(이 폴리뉴클레오타이드 서열은 강한 구성적 프로모터에 의해 유효하게 제어된다)을 함유하는 DNA 카세트를 추가로 포함하는 미생물.제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,비. 섭틸리스 TH116(ATCC PTA-5224), TH115(ATCC PTA-5223), TH404(DSM 16333) 및 TH405(DSM 16334)로 구성된 군에서 선택된 미생물.제 1 항 내지 제 5 항중 어느 한 항에 있어서, 비. 섭틸리스의 퓨린 오페론의 발현을 규제철폐하는 제 1 돌연변이 및 5-아미노이미다졸 라이보타이드(AIR)의 카복시아미노이미다졸 라이보타이드(CAIR)로의 전환을 차단하는 제 2 돌연변이를 추가로 포함하는 미생물.제 9 항에 있어서,제 1 돌연변이가 pur 오페론의 리더(leader) 영역 내부의 돌연변이를 포함하고, 제 2 돌연변이가 포스포라이보실아미노이미다졸 카복실라제 I을 코딩하는 purE 유전자 내부의 돌연변이를 포함하는 미생물.제 10 항에 있어서,비. 섭틸리스 TH101(ATCC PTA-5222)인 미생물.(a) 티아민 생성물을 배지로 과다생산하는 제 1 항 내지 제 11 항중 어느 한 항의 미생물을 적합한 배지중에서 배양시키는 단계| 및(b) 티아민 생성물을 회수하는 단계를 포함하는, 티아민 생성물을 생산하는 방법.제 12 항에 있어서,(a) 티아민 전구체,(b) 티아민 전구체 및 퓨린 공급원,(c) HET 경로의 전구체,(d) HMP 경로의 전구체 및(e) HMP의 유도체로 구성된 군에서 선택된 성분의 존재하에서 미생물을 배양함을 추가로 포함하는 방법.제 13 항에 있어서,티아민 전구체가 4-아미노-5-하이드록시메틸-2-메틸피리미딘(HMP), 5-(2-하이드록시에틸)-4-메틸티아졸(HET) 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 방법.제 13 항에 있어서,티아민 전구체가 HET이고, 퓨린 공급원이 잔틴인 방법.제 13 항에 있어서,HET 경로의 전구체가 글리신, 시스테인, 아이소류신, 트레오닌 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 방법.제 13 항에 있어서,HMP의 유도체가 4-아미노-2-메틸-5-피리미딘메탄아민(그레웨(Grewe) 다이아민)인 방법.tx1 돌연변이를 함유하는 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열.제 18 항에 있어서,돌연변이로 인해 아미노산 잔기 116에서 류신이 페닐알라닌으로 치환되는 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열.제 18 항 또는 제 19 항에 있어서,서열이 서열 번호 31이거나, 또는 엄격한 존재하에서 서열 번호 31에 하이브리드를 형성하는 폴리뉴클레오타이드 서열이고, 미생물에 존재하는 경우 티아민 생산을 규제철폐하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열.△yufR::Tn917에 대해 70% 연쇄를 나타내는 제 1 돌연변이(tx26-1), 및 ΩmotA::Tn917에 대해 59% 연쇄를 나타내는 제 2 돌연변이(tx26-2)를 포함하고, 돌연변이 둘 모두의 존재로 인해 티아민-생산 미생물에서 티아민 생산이 규제철폐되는, 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열.제 21 항에 있어서,tx26-1 돌연변이가 서열 번호 33인 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 엄격한 조건하에서 서열 번호 33과 하이브리드를 형성하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩되고, tx26-2 돌연변이가 서열 번호 36인 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 엄격한 조건하에서 서열 번호 36과 하이브리드를 형성하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩되고, 미생물에 존재하는 경우 티아민 생산의 규제철폐를 야기하는, 단리된 폴리뉴클레오타이드 서열.제 18 항 내지 제 22 항중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 DNA 카세트.제 23 항의 DNA 카세트를 함유하는 미생물.(a) 그램 양성 미생물이 시료에 존재하는지를 측정하는 단계,(b) 미생물이 yloS 오르토로그(ortholog)를 함유하는지를 측정하는 단계 및(c) 미생물이 thiL 오르토고르를 함유하는지를 측정하는 단계를 포함하며, 그램 양성 미생물에 yloS 오르토로그가 존재하고 thiL 오르토로그가 부재하는 것이 미생물이 병원성임을 나타내는, 임상 시료에서 병원성 미생물을 검출하는 방법.제 25 항에 있어서,미생물이 리스테리아(Listeria), 스태필로코커스(Staphylococcus), 클로스트리듐(Clostridium), 엔테로코커스(Enterococcus) 및 스트렙토코커스(Streptococcus)로 구성된 군에서 선택되는 방법.제 26 항에 있어서,미생물이 리스테리아 모노사이토게네스(Listeria monocytogenes), 스태필로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus), 스태필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis), 클로스트리듐 테타니(Clostridium tetani), 클로스트리듐 퍼프링겐즈(Clostridium perfringens), 엔테로코커스 종(Enterococcus sp.), 스트렙토코커스 아갈락티아에(Streptococcus agalactiae), 스트렙토코커스 파이오게네스(Streptococcus pyogenes) 및 스트렙토코커스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae)로 구성된 군에서 선택되는 방법.(a) YloS 단백질을 포함하는 분석 조성물을 시험 화합물과 접촉시키는 단계, 및(b) 시험 화합물이 YloS 단백질 활성을 억제하는지를 측정하는 단계를 포함하고, 여기서 YloS 단백질의 활성을 억제하는 화합물의 능력에 근거하여 화합물을 항생제로서 확인하는, 항생제 확인용 분석법.제 28 항에 있어서,분석 조성물에 포함된 YloS 단백질이 정제된 YloS 단백질, 부분적으로 정제된 YloS 단백질, 및 YloS 단백질을 생산하는 세포로부터의 조질 세포 추출물로 구성된 군에서 선택되는 분석법.제 28 항 또는 제 29 항에 있어서,YloS 단백질이 리스테리아, 스태필로코커스, 클로스트리듐, 엔테로코커스 및 스트렙토코커스로 구성된 군에서 선택되는 병원성 미생물로부터 유래된 폴리뉴클레오타이드에 의해 코딩되는 분석법.제 30 항에 있어서,미생물이 리스테리아 모노사이토게네스, 스태필로코커스 오레우스, 스태필로코커스 에피더미디스, 클로스트리듐 테타니, 클로스트리듐 퍼프링겐즈, 엔테로코커스 종, 스트렙토코커스 아갈락티아에, 스트렙토코커스 파이오게네스 및 스트렙토코커스 뉴모니아에로 구성된 군에서 선택되는 분석법.
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