초록

본 발명은 기존의 다단계 RT-PCR 방법을 사용한 만성골수성백혈병(Chronic Myeloid Leukemia) 진단 방법을 개선하여, 단 한 번의 다중 RT-PCR (multiplex RT-PCR) 을 통해 만성골수성백혈병을 진단할 수 있는 프라이머를 포함하는 조성물 및 이 조성물을 함유하는 키트에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 키트를 사용하여 만성골수성백혈병 진단하는 지표가 될 수 있는 BCR-ABL 유전자의 증폭 방법에 관한 것이다.

대표청구항 ▼

서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 9를 포함하는 BCR-ABL 융합 유전자 증폭용 올리고 뉴클레오타이드 프라이머.제 1항에 있어서, 서열번호 1 및 서열번호 9는 센스 프라이머이고 서열번호 2는 안티센스 프라이머인 BCR-ABL 융합 유전자 증폭용 올리고뉴클레오타이드 프라이머.제 1항에 있어서, 상기 프라이머가 시그날을 제공할 수 있는 표지를 이용하여 변형된 것인 프라이머.서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 9의 올리고 뉴클레오타이드 프라이머, 및 (multiplex) RT-PCR 증폭 반응 혼합물을 포함하는 BCR-ABL

서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 9를 포함하는 BCR-ABL 융합 유전자 증폭용 올리고 뉴클레오타이드 프라이머.제 1항에 있어서, 서열번호 1 및 서열번호 9는 센스 프라이머이고 서열번호 2는 안티센스 프라이머인 BCR-ABL 융합 유전자 증폭용 올리고뉴클레오타이드 프라이머.제 1항에 있어서, 상기 프라이머가 시그날을 제공할 수 있는 표지를 이용하여 변형된 것인 프라이머.서열번호 1, 서열번호 2 및 서열번호 9의 올리고 뉴클레오타이드 프라이머, 및 (multiplex) RT-PCR 증폭 반응 혼합물을 포함하는 BCR-ABL 융합 유전자 증폭용 조성물.제 4항에 있어서, RT-PCR 증폭 반응 혼합물은 반응 완충액, 데옥시뉴클레오타이드, Taq-폴리머라아제 및 역전사 효소를 포함하는 것인 조성물.제 4항의 조성물을 포함하는 BCR-ABL 융합 유전자 분석 키트.제 6항에 있어서, 대조용 유전자 표준 BCR-ABL 융합 단백질의 cDNA를 더 포함하는 BCR-ABL 유전자 분석 키트.제 7항에 있어서, 표준 BCR-ABL 융합 단백질의 cDNA가 K 562세포주의 BCR-ABL 융합 단백질인 BCR-ABL 유전자 분석 키트.제 6항에 있어서, 멸균수를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 BCR-ABL유전자 분석 키트.제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항의 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 사용하여 다중 RT-PCR을 수행함으로써 BCR-ABL 유전자를 검출하는 방법.ⅰ) 생물 시료로부터 mRNA를 얻는 단계| 및 ⅱ) 상기 mRNA 및 서열번호 9, 서열번호 1 및 서열번호 2를 포함하는 프라이머를 사용하여 다중 RT-PCR을 수행하여 BCR-ABL 유전자를 증폭시키는 방법.제 11항에 있어서, 생물학적 시료를 골수 또는 말초 혈액에서 얻는 방법.제 11항에 있어서, RT-PCR을 수행하는 방법은 2.5㎕의 ABL-BCR 단백질의 cDNA, 0.25mM dNTP 및 Taq 폴리머라제를 포함하는 RT-PCR 증폭 반응 혼합물 25㎕를 이용하여 수행하는 것인 방법.제 11항에 있어서, RT-PCR을 수행하는 방법은 ⅰ) 94℃에서 predenaturation 시키는 단계|ⅱ) 94℃에서 30초, 63℃에서 30초, 72℃에서 30초를 1주기로 하여 30번 반복하는 단계|ⅲ) 72℃에서 최종 신장하는 단계| 및 상기 단계를 2번 반복하여 수행하는 것인 방법.