본 발명은 항노화 물질의 탐색방법에 관한 것이다. 본 발명의 탐색방법은 인간을 포함하는 동물세포의 세포배양 단계와, 상기 동물세포의 노화를 인위적으로 유도하는 단계와, 상기 노화가 유도된 동물세포에 항노화 물질의 후보군의 생리활성물질을 처리하는 단계와, 상기 생리활성물질을 처리한 후에 상기 동물세포의 변화를 측정하는 단계를 포함한다. 본 발명에 따른 탐색방법은 세포의 노화를 억제하거나 방지하는 물질의 탐색에 유용하게 사용될 수 있다.
대표청구항▼
인간을 포함하는 동물세포의 세포배양 단계와, 상기 동물세포의 노화를 인위적으로 유도하는 단계와, 상기 노화가 유도된 동물세포에 항노화 물질의 후보군의 생리활성물질을 처리하는 단계와, 상기 생리활성물질을 처리한 후에 상기 동물세포의 변화를 측정하는 단계를 포함하는 항노화 물질 탐색방법.제1항에 있어서, 노화와 연관된 베타-갈락토시다아제의 발현정도의 변화를 측정하는 단계를 더 포함하는 항노화 물질 탐색방법.인간의 정상 섬유모세포(NORMAL FIBROBLAST)의 세포배양 단계와, 상기 세포의 노화를 인위적으로 유도하는 단계와, 상기
인간을 포함하는 동물세포의 세포배양 단계와, 상기 동물세포의 노화를 인위적으로 유도하는 단계와, 상기 노화가 유도된 동물세포에 항노화 물질의 후보군의 생리활성물질을 처리하는 단계와, 상기 생리활성물질을 처리한 후에 상기 동물세포의 변화를 측정하는 단계를 포함하는 항노화 물질 탐색방법.제1항에 있어서, 노화와 연관된 베타-갈락토시다아제의 발현정도의 변화를 측정하는 단계를 더 포함하는 항노화 물질 탐색방법.인간의 정상 섬유모세포(NORMAL FIBROBLAST)의 세포배양 단계와, 상기 세포의 노화를 인위적으로 유도하는 단계와, 상기 노화가 유도된 세포에 노화억제 및/또는 지연활성을 가지는 것으로 추정되는 생리활성물질을 처리하는 단계와, 상기 생리활성물질을 처리한 후에 상기 세포의 변화를 측정하는 단계와, 복제노화가 일어난 인간의 정상 섬유모세포에 상기 생리활성물질을 처리한 후, 노화와 연관된 베타-갈락토시다아제의 발현정도의 변화를 측정하는 단계를 포함하는 항노화 물질 탐색방법.제3항에 있어서,상기 인간의 정상 섬유모세포는 인간의 음경포피에서 유래한 정상 섬유모세포(NORMAL HUMAN FORESKIN FIBROBLAST)인 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 세포의 노화를 인위적으로 유도하는 단계는 외래 유전자를 상기 세포 내로 도입하여 항시적으로 발현시키는 것을 포함하는 항노화 물질 탐색방법.제5항에 있어서,상기 항시적 발현은, 상기 세포 내에 상기 외래 유전자를 도입하고, 이를 상기 세포 내에서 발현시킴으로써 상기 외래 유전자의 발현이 항시적으로 일어나는 세포주를 확립하는 방식인 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.제6항에 있어서,상기 항시적 발현은 외래 유전자와 선별 마커(SELECTION MARKER)를 상기 세포 내로 도입하고, 상기 외래 유전자가 상기 세포의 유전체에 삽입된 세포를 상기 선별 마커를 이용하여 선별함으로써 상기 외래 유전자의 발현이 항시적으로 일어나는 세포주를 확립하는 방식인 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.제5항에 있어서,상기 항시적 발현에 있어서 상기 외래 유전자는 노화관련 단백질의 유전자인 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.제8항에 있어서,상기 노화관련 단백질의 유전자는 TRF2 단백질의 돌연변이형인 TRF2ΔBΔM 단백질의 유전자인 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.제7항에 있어서, 상기 선별마커는 형광단백질인 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.제7항에 있어서,상기 외래 유전자와 상기 선별마커의 세포 내에서의 동시 발현을 위해 IRES 서열을 사용하는 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.제11항에 있어서,상기 IRES 서열 앞에 TRF2ΔBΔM 단백질을 암호화하는 유전자를 삽입하고, IRES 서열 뒤에는 녹색형광단백질을 암호화하는 유전자를 삽입함으로써, TRF2ΔBΔM 단백질과 녹색형광단백질이 동시에 발현되는 벡터를 구성하는 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 생리활성물질을 처리한 후에 세포의 변화를 측정하는 단계는, 상기 세포의 수의 변화, 크기의 변화 또는 형태의 변화를 측정하는 단계를 포함하는 항노화 물질 탐색방법.제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 생리활성물질은 핵산(NUCLEIC ACID), 뉴클레오티드(MONO-/OLIGO-/POLY-NUCLEOTIDE), 단백질(PROTEIN), 펩타이드(MONO-/OLIGO-/POLY-PEPTIDE), 아미노산(AMINO ACID), 당(MONO-/OLIGO-/POLY-SACCHARIDE), 지질(LIPID), 비타민, 합성된 화합물, 및 각종 생물자원에서 추출된 천연물(NATURAL PRODUCT)과 이들을 구성하는 요소로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나인 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.제14항에 있어서,상기 생리활성물질은 CGK733인 것을 특징으로 하는 항노화 물질 탐색방법.
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