IPC분류정보
국가/구분 |
한국(KR)/등록특허
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국제특허분류(IPC9판) |
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출원번호 |
10-2006-7019384
(2006-09-20)
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공개번호 |
10-2006-0134111
(2006-12-27)
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등록번호 |
10-0872847-0000
(2008-12-02)
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국제출원번호 |
PCT/KR2005/000888
(2005-03-25)
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국제공개번호 |
WO2005092920
(2005-10-06)
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번역문제출일자 |
2006-09-20
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DOI |
http://doi.org/10.8080/1020067019384
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발명자
/ 주소 |
- 차형준
/ 경상북도 포항시 남구 지곡동 포항공과대학교 교수아파트 *동****호
- 황동수
/ 광주 북구 오치동 ****-* 번지
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출원인 / 주소 |
- 주식회사 포스코 / 경북 포항시 남구 괴동동 *번지
- 학교법인 포항공과대학교 / 경북 포항시 남구 효자동 산**번지
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대리인 / 주소 |
-
유미특허법인
(YOU ME Patent & Law Firm)
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서울특별시 강남구 역삼동 ***-** 서림빌딩**층(유미특허법인)
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심사청구여부 |
있음 (2007-03-30) |
심사진행상태 |
등록결정(심사전치후) |
법적상태 |
등록 |
초록
본 발명은 홍합유래 바이오-접착제에 관한 것이다. 특히 본 발명은 본 신규한 MGFP-5(MYTILUS GALLOPROVINCIALIS FOOT PROTEIN-5) 단백질 및 MGFP-5과 FP(FOOT PROTEIN)-1간의 조합형 단백질에 관한 것으로, 본 발명을 통하여 접착 활성을 가지는 접착 단백질을 경제적이면서도 대량으로 생산하여 화학 접착제 대용으로 사용할 수 있다.
대표청구항
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서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 접착 단백질.제 1항에 있어서, 상기 접착 단백질은 카르복시 말단 및/또는 아미노 말단에 접착 단백질의 물리화학적 특성을 향상시키기 위한 펩타이드가 더욱 연결된 것인 접착 단백질.제 2항에 있어서, 상기 물리화학적 특성은 용해도, 접착력, 가교도, 단백질의 발현, 정제 및 회수율 증강으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접착 단백질.제 2항에 있어서, 상기 펩타이드는 접착 단백질 유래인 것인 접착 단백질.제 4항에 있어서, 상기 접착 단백질은 홍합 접착 단백질 유래인 접착 단백질.제 2항에 있어
서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 접착 단백질.제 1항에 있어서, 상기 접착 단백질은 카르복시 말단 및/또는 아미노 말단에 접착 단백질의 물리화학적 특성을 향상시키기 위한 펩타이드가 더욱 연결된 것인 접착 단백질.제 2항에 있어서, 상기 물리화학적 특성은 용해도, 접착력, 가교도, 단백질의 발현, 정제 및 회수율 증강으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접착 단백질.제 2항에 있어서, 상기 펩타이드는 접착 단백질 유래인 것인 접착 단백질.제 4항에 있어서, 상기 접착 단백질은 홍합 접착 단백질 유래인 접착 단백질.제 2항에 있어서, 상기 펩타이드는 서열번호 25에 기재된 아미노산 서열이 1 내지 10회 연속하여 연결된 것인 단백질.제 6항에 있어서, 상기 접착 단백질은 서열번호 10에 기재된 아미노산 서열, 서열번호 12에 기재된 아미노산 서열 및 서열번호 14에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 접착 단백질.제 2항에 있어서, 상기 펩타이드는 6개의 히스티딘 잔기로 이루어진 것인 접착 단백질.제 8항에 있어서, 상기 접착 단백질은 서열번호 16에 기재된 아미노산 서열,서열번호 18에 기재된 아미노산 서열, 서열번호 20에 기재된 아미노산 서열 및 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 접착 단백질.제 1항에 따른 접착 단백질을 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.제 10항에 있어서, 상기 접착 단백질을 코딩하는 서열은 서열번호 5에 기재된 핵산 서열을 포함하는 것인 폴리뉴클레오타이드.제 2항에 따라 서열번호 6의 아미노산 서열을 갖는 접착 단백질의 카르복시 말단 및/또는 아미노 말단에 접착 단백질의 물리화학적 특성을 향상시키기위한 펩타이드가 더욱 연결된 접착 단백질을 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.제 12항에 있어서, 상기 펩타이드는 서열번호 25에 기재된 아미노산 서열이 1 내지 10회 연속하여 연결된 것인 폴리뉴클레오타이드.제 13항에 있어서, 상기 펩타이드를 코딩하는 핵산 서열은 서열번호 26 내지 31로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열이 1 내지 10회 연속하여 연결된 것인 폴리뉴클레오타이드.제 13항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열번호 9에 기재된 핵산 서열, 서열번호 11에 기재된 핵산 서열 및 서열번호 13에 기재된 핵산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 폴리뉴클레오타이드.제 8항에 따른 접착 단백질을 코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.제 16항에 있어서, 상기 접착 단백질을 코딩하는 서열은 서열번호 15에 기재된 핵산 서열, 서열번호 17에 기재된 핵산 서열, 서열번호 19에 기재된 핵산 서열 및 서열번호 21에 기재된 핵산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 폴리뉴클레오타이드.제 1항 내지 9항중 어느 한항에 따른 접착 단백질을 코딩하는 핵산 서열을 발현가능하도록 포함하는 벡터.제 18항에 있어서, 상기 접착 단백질을 코딩하는 핵산 서열은 서열번호 5에 기재된 핵산 서열, 서열번호 9에 기재된 핵산 서열, 서열번호 11에 기재된 핵산 서열, 서열번호 13에 기재된 핵산 서열, 서열번호 15에 기재된 핵산 서열, 서열번호 17에 기재된 핵산 서열, 서열번호 19에 기재된 핵산 서열 및 서열번호 21에 기재된 핵산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 벡터.제 18항에 있어서, 상기 벡터는 pMDG05(KCTC 10291BP) 또는 pENG151(KCTC 10766BP)인 것인 벡터.제 18항에 따른 벡터로 형질전환된 형질전환체이며,상기 형질전환체는 원핵생물, 진핵생물 및 진핵생물 유래 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 형질전환체.제 21항에 있어서, 상기 원핵생물은 E. coli 또는 Bacillus인 형질전환체.제 21항에 있어서, 상기 진핵생물은 효모, 곤충, 식물 및 동물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 형질전환체.제 21항에 있어서, 상기 진핵생물 유래 세포는 식물 세포, 곤충 세포 및 동물 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 형질전환체.(a) 제1항에 따른 접착 단백질을 코딩하는 유전자를 발현가능하도록 포함하는 벡터를 제조하는 단계|(b) 상기 벡터를 숙주세포에 형질전환하여 형질전환체를 제조하는 단계 및(c) 상기 형질전환체를 배양하여 재조합 접착 단백질을 생산하는 단계를 포함하는 접착 단백질의 생산방법.제 25항에 있어서, 상기 접착 단백질은 카르복시 말단 및/또는 아미노 말단에 접착 단백질의 물리화학적 특성을 향상시키기 위한 펩타이드가 더욱 연결된 것인 방법.제 26항에 있어서, 상기 물리화학적 특성은 용해도, 접착력, 가교도, 단백질의 발현, 정제 및 회수율 증강으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.제 26항에 있어서, 상기 펩타이드는 접착 단백질 유래인 것인 방법.제 28항에 있어서, 상기 접착 단백질은 홍합 접착 단백질 유래인 방법.제 26항에 있어서, 상기 펩타이드는 서열번호 25에 기재된 아미노산 서열이 1 내지 10회 연속하여 연결된 것인 방법.제 30항에 있어서, 상기 접착 단백질은 서열번호 10에 기재된 아미노산 서열, 서열번호 12에 기재된 아미노산 서열 및 서열번호 14에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.제 26항에 있어서, 상기 펩타이드는 6개의 히스티딘 잔기로 이루어진 것인 방법.제 32항에 있어서, 상기 접착 단백질은 서열번호 16에 기재된 아미노산 서열, 서열번호 18에 기재된 아미노산 서열, 서열번호 20에 기재된 아미노산 서열 및 서열번호 22에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.(a) 제 21항에 따른 형질전환체를 파쇄한 후 원심분리하여 상층액 및 펠렛을 각각 분리하는 단계|(b) 상기 펠렛에 산성 유기용매를 가한 후 현탁시켜 현탁액을 제조하는 단계| 및(c) 상기 현탁액을 원심분리하여 상층액을 분리하는 단계|를 포함하는 접착 단백질의 정제방법.제 34항에 있어서, 상기 산성 유기용매는 pH 3 내지 6을 갖는 유기용매인 방법.제 34항에 있어서, 상기 산성 유기용매는 아세트산, 구연산 및 젖산으로 이루어진 군으로부터 1종이상 선택되는 것인 방법.제 36항에 있어서, 상기 아세트산은 5 내지 30 (v/v)%의 수용액으로 사용되는 것인 방법.제 34항에 있어서, 상기 (c)의 상층액은 젤 여과 크로마토그래피를 더욱 실시하는 것인 방법.제 1항 내지 제9항중 어느 한 항에 따른 접착 단백질을 유효성분으로 포함하는 접착제.제 39항에 있어서, 상기 접착 단백질을 이루는 타이로신 잔기 총수의 5 내지 100%가 3,4-디하이드록시페닐-L-알라닌(DOPA)로 수정된 것인 접착제.제 39항에 있어서, 상기 접착제는 플라스틱, 유리, 금속, 진핵생물의세포, 원핵생물의 세포, 식물세포의 세포벽 및 지질로 이루어진 군으로부터 선택된 기질에 접착되는 것인 접착제.제 39항에 있어서, 상기 접착제는 생물 시료에 적용되는 것인 접착제.제 39항에 있어서, 상기 접착제는 계면활성제, 산화제 및 충진제(filler)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종이상의 물질을 더욱 포함하는 것인 접착제.제 43항에 있어서, 상기 계면활성제는 소듐 도데실설페이트 또는 소듐 도데실벤젠설포네이트인 접착제.제 43항에 있어서, 상기 산화제는 티로시나제 또는 H2O2인 접착제.제 43항에 있어서, 상기 충진제는 콜라겐, 히알루론 산, 콘드로이탄 설페이트, 엘라스틴, 라미닌, 카세인, 하이드록시아페티트 및 알부민, 피브로넥틴 및 하이브린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접착제.제 39항에 있어서, 상기 접착제는 수중환경에 사용되는 기질에 적용되는 것인 접착제.제 39항에 따른 접착제에 산화제, 충진제 및 계면활성제로 이루어진 군으로부터 1종이상 선택된 물질을 처리하거나, 또는 상기 접착제의 유효성분인 접착 단백질의 농도를 조절하는 것을 포함하는 접착제의 접착력을 조절하는 방법.제 1항 내지 제 9항중 어느 한항에 따른 접착 단백질을 유효성분으로 함유하는 코팅제.
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