초록

본 발명은 신규의 개 냉각- 및 멘톨-민감 수용체(개 CMR1(CCMR1)으로 지칭함)를 기술하는 핵산 및 폴리펩티드를 제공한다. 본 발명의 분리된 핵산 또는 폴리펩티드 분자가 검출 시험과 검색 시험에 사용될 수 있다.

대표청구항 ▼

냉각 자극을 검출하고 변환할 수 있으며 SEQ ID NO: 2에 적어도 96% 서열 동일성이 있는 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자.제 1 항에 있어서, SEQ ID NO: 2에 적어도 98% 서열 동일성이 있는 폴리펩티드를 코딩하는 분리된 핵산 분자.제 1 항에 있어서, SEQ ID NO: 2의 폴리펩티드를 코딩하는 분리된 핵산 분자.제 1 항에 있어서, SEQ ID NO: 1의 뉴클레오티드 69 내지 3380을 포함하는 분리된 핵산 분자.제 1 항의 분리된 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터.제 1

냉각 자극을 검출하고 변환할 수 있으며 SEQ ID NO: 2에 적어도 96% 서열 동일성이 있는 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자.제 1 항에 있어서, SEQ ID NO: 2에 적어도 98% 서열 동일성이 있는 폴리펩티드를 코딩하는 분리된 핵산 분자.제 1 항에 있어서, SEQ ID NO: 2의 폴리펩티드를 코딩하는 분리된 핵산 분자.제 1 항에 있어서, SEQ ID NO: 1의 뉴클레오티드 69 내지 3380을 포함하는 분리된 핵산 분자.제 1 항의 분리된 핵산 서열을 포함하는 발현 벡터.제 1 항의 분리된 핵산 서열을 포함하는 재조합 숙주 세포.냉각 자극을 검출하고 변환할 수 있으며 SEQ ID NO: 2에 적어도 96% 서열 동일성이 있는 실질적으로 정제된 폴리펩티드.제 7 항에 있어서, SEQ ID NO: 2에 적어도 98% 서열 동일성이 있는 실질적으로 정제된 폴리펩티드.제 7 항에 있어서, SEQ ID NO: 2를 포함하는 실질적으로 정제된 폴리펩티드.(a) 제 7 항의 폴리펩티디를 코딩할 수 있는 발현 벡터를 세포에 도입한 다음,(b) 발현 벡터로부터 폴리펩티드의 발현이 가능한 조건하에 세포를 배양하는 단계를 포함하는 제 7 항의 폴리펩티드를 발현하는 방법.엄격한 하이브리드화(hybridization) 조건하에 제 1 항의 핵산 분자로 선택적으로 하이브리드화하는 핵산 탐침(probe).제 7 항의 폴리펩티드에 선택적으로 결합하는 항체.제 11 항의 핵산 탐침을 포함하는 키트.제 12 항의 항체를 포함하는 키트.핵산 분자를 제 11 항의 핵산 탐침과 접촉하는 단계를 포함하는, 제 1 항의 핵산 분자를 검출하는 방법.폴리펩티드를 제 12 항의 항체와 접촉하는 단계를 포함하는, 제 7 항의 폴리펩티드를 검출하는 방법.(a) cCMR1 유전자의 발현을 조절하기 위한 메카니즘(mechanism)을 포함하는 세포와 시험 화합물을 접촉한 다음|(b) 시험 화합물이 세포로부터 상기 메카니즘에 의해 조절된 유전자의 발현을 증가시키거나 감소시키는지를 측정하는 단계를 포함하는, cCMR1 단백질의 발현을 증가시키거나 감소시키는 화합물을 확인하는 방법.제 17 항에 있어서, 발현이 메카니즘에 의해 조절되는 유전자가 리포터(reporter) 유전자인 방법.제 17 항에 있어서, 발현이 메카니즘에 의해 조절되는 유전자가 cCMR1 유전자인 방법.(a) 시험 화합물을 cCMR1 이온 채널과 접촉한 다음|(b) 시험 화합물이 이온 채널의 전도도를 증가시키거나 감소시키는지를 측정하는 단계를 포함하는, cCMR1 이온 채널의 전도도를 증가시키거나 감소시키는 화합물을 확인하는 방법.제 20 항에 있어서, cCMR1 이온 채널이 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열을 가진 폴리펩티드를 포함하는 방법.제 20 항에 있어서, cCMR1 이온 채널이 숙주 세포와 관련되어 있는 방법.제 22 항에 있어서, 숙주 세포가 cCMR1 이온 채널을 위한 재조합 숙주 세포인 방법.제 22 항에 있어서, 숙주 세포가 cCMR1 이온 채널을 위한 내생 숙주 세포인 방법.제 20 항에 있어서, cCMR1이 분리된 막 제제(membrane preparation)와 관련되어 있는 방법.제 20 항에 있어서, 단계 (b)가 세포 내 칼슘 수준의 양을 측정하는 것을 포함하는 방법.제 20 항에 있어서, 시험 화합물을 이온 채널과 접촉하는 단계 전에 이온 채널의 전도도를 증가시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.제 27 항에 있어서, 이온 채널의 전도도를 증가시키는 단계가 채널의 전도도를 증가시킬 수 있는 화합물이 함유된 완충액에서 이온 채널을 배양하는 것을 포함하는 방법.제 28 항에 있어서, 채널의 전도도를 증가시킬 수 있는 화합물이 멘톨, 이실린, 및 겨자씨 오일로 구성된 그룹 중에서 선택되는 방법.제 27 항에 있어서, 이온 채널의 전도도를 증가시키는 단계가 cCMR1 채널 활성화 온도에서 이온 채널을 배양하는 것을 포함하는 방법.제 30 항에 있어서, cCMR1 채널 활성화 온도가 4-17℃인 방법.제 27 항에 있어서, 이온 채널의 전도도를 증가시키는 단계가 이온 채널을 탈분극화하는 것을 포함하는 방법.제 20 항에 있어서, 시험 화합물을 이온 채널과 접촉하는 단계 전에 이온 채널의 전도도를 감소시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.제 33 항에 있어서, 이온 채널의 전도도를 감소시키는 단계가 채널의 전도도를 감소시킬 수 있는 화합물이 함유된 완충액에서 이온 채널을 배양하는 것을 포함하는 방법.제 33 항에 있어서, 이온 채널의 전도도를 감소시키는 단계가 cCMR1 채널 비활성화 온도에서 이온 채널을 배양하는 것을 포함하는 방법.제 35 항에 있어서, cCMR1 채널 비활성화 온도가 실온인 방법.제 33 항에 있어서, 이온 채널의 전도도를 감소시키는 단계가 세포 외 Ca2+ 가 함유된 완충액에서 채널의 전도도를 감소시키는데 충분한 농도로 이온 채널을 배양하는 것을 포함하는 방법.제 33 항에 있어서, 이온 채널의 전도도를 감소시키는 단계가 이온 채널을 과분극화하는 것을 포함하는 방법.(a) 칼슘의 서브-비활성화 양이 함유된 완충액에서 이온 채널을 배양하고|(b) 이온 채널을 활성화하며|(c) 이온 채널을 시험 화합물과 접촉하고|(d) 완충액에서 칼슘의 양을 증가시킨 다음|(e) 시험 화합물이 이온 채널의 전도도를 증가시키거나 감소시키는지를 측정하는 단계를 포함하는, 포유류 CMR1 이온 채널의 전도도를 증가시키거나 감소시키는 화합물을 확인하는 방법.제 39 항에 있어서, 이온 채널을 활성화하는 단계가 채널의 전도도를 증가시키는 화합물이 함유된 완충액에서 이온 채널을 배양하는 것을 포함하는 방법.제 39 항에 있어서, 이온 채널을 활성화하는 단계가 포유류 CMR1 채널-활성화 온도에서 이온 채널을 배양하는 것을 포함하는 방법.제 39 항에 있어서, 이온 채널을 활성화하는 단계가 이온 채널을 탈분극화하는 것을 포함하는 방법.제 39 항에 있어서, 포유류 CMR1 단백질이 인간, 쥐, 새앙쥐, 또는 개로부터 유래된 것인 방법.제 39 항에 있어서, 시험 화합물이 이온 채널의 전도도를 증가시키거나 감소시키는지를 측정하는 단계가 칼슘의 세포 내 양을 측정하는 것을 포함하는 방법.제 44 항에 있어서, 칼슘의 세포 내 양이 FLIPR 시험을 이용하여 측정되는 방법.제 39 항에 있어서, 시험 화합물이 이온 채널의 전도도를 증가시키거나 감소시키는지를 측정하는 단계가 이온 채널에 의해 전도된 전류를 측정하는 것을 포함하는 방법.제 46 항에 있어서, 이온 채널에 의해 전도된 전류가 패치-클램프(patch-clamp) 기술을 이용하여 측정되는 방법.(a) 시험 화합물을 cCMR1으로 구성된 이온 채널과 접촉한 다음|(b) 시험 화합물이 이온 채널의 전도도를 증가시키거나 감소시키는지를 측정하는 단계를 포함하는, 통증 치료에 유용한 화합물을 확인하는 방법.제 48 항에 있어서,(a) 시험 화합물을 동물에 투여한 다음|(b) 시험 화합물이 동물의 통각 수용/통각 방위(nociceptive/nocifensive) 반응을 변경하는 정도를 측정하는 단계를 추가로 포함하는 방법.