IPC분류정보
국가/구분 |
한국(KR)/공개특허
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국제특허분류(IPC8판) |
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출원번호 |
10-2007-7004221
(2007-02-22)
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공개번호 |
10-2007-0059065
(2007-06-11)
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국제출원번호 |
PCT/EP2005/007968
(2005-07-21)
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국제공개번호 |
WO2006008163
(2006-01-26)
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번역문제출일자 |
2007-02-22
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DOI |
http://doi.org/10.8080/1020077004221
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발명자
/ 주소 |
- 샤이벨, 토마스
/ 독일, ***** 뮌헨, 요셉스부르그슈트라쎄 **
- 휨메리치, 다니엘
/ 독일, ***** 민트라칭, 말벤베그 **
- 아케르쇼트, 크리스티안
/ 독일, ***** 뮌헨, 슈레이쉐이메르슈트라쎄 ***
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출원인 / 주소 |
- 테크니쉐 유니베르시테트 뮌헨 / 독일, 디-***** 뮌헨, 아르시스슈트라쎄 **
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대리인 / 주소 |
-
한양특허법인
(HAN YANG Patent Firm)
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서울 강남구 도곡동 ***-* 한양빌딩
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심사진행상태 |
취하(심사미청구) |
법적상태 |
취하 |
초록
본 발명은 재조합 거미줄 단백질, 상기 재조합 거미줄 단백질을 코딩하는 핵산, 및 상기 핵산을 발현하기에 적합한 숙주에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 거미줄 단백질의 응집 방법 및 생물공학 및/또는 의약의 분야 및 기타 산업 분야, 특히 자동차 부품의 생산, 항공기 제조, 섬유 및 가죽의 처리, 및 종이 등의 생산 및 처리에서의 단백질의 용도에 관한 것이다.
대표청구항
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다음을 포함하는 재조합 거미줄 단백질. A) 하나 이상의 합성 반복성 거미줄 단백질 서열, 및/또는B) 하나 이상의 진정한(AUTHENTIC) 비-반복성 거미줄 단백질 서열.청구항 1에 있어서, 상기 서열은 메이저 앰플레이트 샘(MAJOR AMPULLATE GLAND)으로부터의 거미 드래그라인(DRAGLINE) 단백질로부터 유래 및/또는 편모사 샘(FLAGELLIFORM GLAND)으로부터 유래된 단백질로부터 유래된 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기 진정한 비-반복성 서열은 자연적으로 발생하는
다음을 포함하는 재조합 거미줄 단백질. A) 하나 이상의 합성 반복성 거미줄 단백질 서열, 및/또는B) 하나 이상의 진정한(AUTHENTIC) 비-반복성 거미줄 단백질 서열.청구항 1에 있어서, 상기 서열은 메이저 앰플레이트 샘(MAJOR AMPULLATE GLAND)으로부터의 거미 드래그라인(DRAGLINE) 단백질로부터 유래 및/또는 편모사 샘(FLAGELLIFORM GLAND)으로부터 유래된 단백질로부터 유래된 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기 진정한 비-반복성 서열은 자연적으로 발생하는 거미줄 단백질의 카르복시 말단 비-반복성 영역(편모사 및 드래그라인 단백질) 및/또는 아미노 말단 비-반복성 영역(편모사 단백질)으로부터 유래된 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 3에 있어서, 상기 진정한 비-반복성 서열은 상기 서열이 숙주 내에서 발현하기에 적합하도록 변형되고, 바람직하게는 서열 식별 번호: 14, 15, 32 및 34 또는 그들의 변형(VARIANT)인 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 내지 청구항 4 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 드래그라인 및/또는 편모사 단백질은 오르브-웹(ORB-WEB) 거미(ARANEIDAE)의 드래그라인 또는 편모사 단백질로부터 선택되는 재조합 거미줄 단백질.청구항 5에 있어서, 상기 드래그라인 단백질은 무당거미(ARANEUS DIADEMATUS)로부터 유래되고, 편모사 단백질은 황금 원형 거미(NEPHILA CLAVIPES)로부터 유래되는 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 내지 청구항 6 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 드래그라인 단백질은 야생형 ADF-3, ADF-4, MASP I 또는 MASP II이고, 편모사 단백질은 FLAG인 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 내지 청구항 6 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 드래그라인 단백질은 서열 식별 번호: 1에 의해 인코딩된 ADF-3 및/또는 서열 식별 번호: 2에 의해 인코딩된 ADF-4, 또는 상기 편모사 단백질은 서열 식별 번호: 6(FLAG-N) 및/또는 서열 식별 번호: 7(FLAG-C), 또는 그 변형(VARIANT)인 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 내지 청구항 8 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 합성 반복성 서열은 하나 이상의 폴리알라닌 함유 공통 서열(POLYALANINE CONTAINING CONSENSUS SEQUENCE)을 포함하는 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 9에 있어서, 상기 폴리알라닌 함유 공통 서열은 ADF-3으로부터 유래되고, 서열식별번호 3(모듈 A)의 아미노산 서열 또는 그 변형을 가지는, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 내지 청구항 10 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 합성 반복성 서열은 ADF-3으로부터 유래되고, 서열 식별 번호 4(모듈 Q)의 아미노산 서열 또는 그 변형의 하나 이상의 반복을 포함하는 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 9 내지 청구항 11 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 합성 반복성 서열은 하나 이상의 (AQ) 및/또는 (QAQ)를 반복 단위로서 포함하는 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 12에 있어서, 상기 합성 반복성 서열은 (AQ)12, (AQ)24, (QAQ)8 또는 (QAQ)16인 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 내지 청구항 13 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 합성 반복성 서열은 ADF-4로부터 유래되고, 서열 식별 번호 5(모듈 C)의 아미노산 서열 또는 그 변형의 하나 이상의 반복을 포함하는 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 14에 있어서, 상기 합성 반복성 서열은 C16 또는 C32인 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 내지 청구항 15 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 합성 반복성 서열은 편모사 단백질로부터 유래되고, 모듈 K(서열 식별 번호: 35), 모듈 SP(서열 식별 번호: 37), 모듈 X(서열 식별 번호: 39), 및 모듈 Y(서열 식별 번호: 41)인 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 16에 있어서, Y8, Y16, X8, X16, K8 또는 K16인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항에 있어서, 완전한 재조합 거미줄 단백질은 식(FORMULA) (QAQ)8NR3, (QAQ)16NR3, (AQ)12NR3, (AQ)24NR3, C16NR4 또는 C32NR4, (QAQ)8, (QAQ)16, (AQ)12, (AQ)24, C16 또는 C32를 포함하는 것인, 재조합 거미줄 단백질.청구항 1 내지 청구항 18 중 하나 이상의 항 기재의 재조합 거미줄 단백질을 코딩하는 핵산 서열.청구항 19 기재의 핵산 서열을 포함하며, 바람직하게는 도 6 또는 서열 식별 번호 55의 클로닝 벡터 또는 그것의 변형으로부터 유도된 벡터.청구항 19의 핵산 서열 및 하나 이상의 조절 서열을 포함하는 발현 벡터.청구항 20 또는 청구항 21에 있어서, 상기 벡터는 플라스미드 또는 바이러스 벡터이며, 바람직하게는 바쿨로바이러스(BACULOVIRUS) 시스템 또는 우두 바이러스 (VACCINIA VIRUS) 벡터 시스템인, 벡터.청구항 20 내지 청구항 22 중 하나 이상의 항 기재의 벡터로 형질전환된, 숙주.청구항 23에 있어서, 상기 숙주는 원핵세포인, 숙주.청구항 24에 있어서, 상기 숙주는 대장균(E.COLI) 또는 고초균(BACILLUS SUBTILIS)인, 숙주.청구항 25에 있어서, 상기 숙주는 진핵 세포인, 숙주.청구항 26에 있어서, 상기 숙주는 포유동물 세포, 식물 세포, 효모 세포 또는 곤충 세포인, 숙주.청구항 27에 있어서, CHO, COS, HELA, 293T, HEH 또는 BHK 세포인, 포유동물 세포.청구항 27에 있어서, 상기 숙주는 효모 세포인, 숙주.청구항 29에 있어서, 상기 숙주는 사카로마이세스 세레비지에(SACCHAROMYCES CEREVISIAE), 스키조사카로마이세스 폼베(SCHIZOSACCHAROMYCES POMBE), 피키아 파스토리스(PICHIA PASTORIS), 캔디다 알비칸스(CANDIDA ALBICANS) 또는 한세눌라 폴리모르파(HANSENULA POLYMORPHA)인, 숙주.청구항 27에 있어서, 상기 곤충 세포는 인시류(LEPIDOPTERA) 곤충 세포들로부터 선택되고, 바람직하게는 스포도프테라 프루기페르다(SPODOPTERA FRUGIPERDA) 및 양배추은무늬밤나방(TRICHOPLUSIA NI)으로부터 선택되는, 숙주.청구항 31에 있어서, 상기 곤충 세포는 SF9, SF2L 또는 하이 파이브(HIGH FIVE) 세포인, 숙주.청구항 27에 있어서, 상기 식물 세포는 담배, 감자, 옥수수, 완두 및 토마토로부터 유래된 것인, 숙주.다음 단계를 포함하는, 거미줄 단백질의 응집 방법.A) 청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항 기재의 지향되지 않은(UNORIENTED) 거미줄 단백질을 함유하는 단백질 용액을 제조하는 단계; B) 상기 A)에서 제조된 용액을 응집 유발(AGGREGATION TRIGGER)에 노출시키는 단계; 및C) 침전된 거미줄 단백질을 회수하는 단계.청구항 34에 있어서, 상기 단계 A)에서 사용되는 거미줄 단백질은 청구항 23 내지 청구항 33 중 하나 이상의 항 기재의 적당한 숙주를, 청구항 20 내지 청구항 22 중 하나 이상의 항 기재의 벡터 또는 청구항 19 기재의 핵산으로 형질전환하고, 적당한 조건 하에서 거미줄 단백질을 발현함에 의해 제조되는, 거미줄 단백질의 응집 방법.청구항 34 또는 청구항 35에 있어서, 상기 응집 유발은 바람직하게는 약 PH 1로의 산성화(ACIDIFICATION),인산칼륨, 및 바람직하게는 단백질 용액을 회전시키고 전단력을 가하는 기계적인 응력,으로부터 선택되는 것인, 거미줄 단백질의 응집 방법.청구항 34 내지 청구항 36 중 하나 이상의 항에 있어서, 상기 방법은 추가로 단계 A)에서 제공되거나 또는 단계 C)에서 회수된 상기 단백질을 적당한 방법에 의해 필라멘트, 나노파이버, 및 실로 방적하는 단계, 또는 필름을 형성하는 단계를 포함하는, 거미줄 단백질의 응집 방법.청구항 1 내지 청구항 37 중 하나 이상의 항에 기재된 단백질/실의 생물공학 및/또는 의약 분야에서의 용도.청구항 1 내지 청구항 38 중 하나 이상의 항에 기재된 단백질/실의 창상 봉합(WOUND CLOSURE) 또는 피복(COVERAGE) 시스템의 제조를 위한 용도.청구항 39에 있어서, 봉합사 재료(SUTURE MATERIAL)의 제조를 위한 용도.청구항 40에 있어서, 상기 봉합사 재료는 신경수술 또는 안과 수술에서 사용하기 위한 것인 용도.대체 재료, 바람직하게는 인공 연골 또는 건(TENDON) 재료의 제조를 위한 청구항 1 내지 청구항 41 중 하나 이상의 항에 기재된 단백질/실의 용도.자동차 및 항공기 부품의 제조에서의 청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항에 기재된 단백질/실의 용도.청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항에 기재된 단백질/실을 포함하거나, 또는 청구항 33 내지 청구항 36 중 하나 이상의 항에 기재된 방법에 의해 얻을 수 있는 창상 봉합 또는 피복 시스템, 봉합사 재료, 대체 재료, 바람직하게는 인공 연골, 건(TENDON) 재료, 자동차 부품 또는 항공기 건조(CONSTRUCTION)에서 사용되는 부품.청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항에 기재된 재조합 거미줄 단백질을 포함하는, 종이 제품.청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항에 기재된 재조합 거미줄 단백질을 포함하는, 섬유 또는 가죽 제품.청구항 45에 있어서, 상기 재조합 거미줄 단백질은 코팅으로서 존재하는 섬유 또는 가죽 제품.청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항에 기재된 단백질로 구성되거나 또는 포함하는 겔 또는 발포체.청구항 48에 있어서, 상기 겔은 (QAQ)8NR3, (QAQ)16NR3, (AQ)12NR3, (AQ)24NR3, C16NR4 또는 C32NR4, (QAQ)8, (QAQ)16, (AQ)12, (AQ)24, C16 또는 C32에 기초한 단백질로 구성되거나 또는 포함하는 겔.청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항에 기재된 단백질로 구성되거나 또는 포함하는 임플란트(IMPLANT) 및 스텐트(STENT)용 코팅.청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항에 기재된 단백질/실 및 추가의 파이버를 포함하는 실 또는 파이버로서, 상기 파이버는 거미 기원의 것이 아니며 바람직하게는 식물 유래의 파이버 또는 합성 파이버인 것인, 실 또는 파이버.청구항 1 내지 청구항 17 중 하나 이상의 항에 기재된 단백질 또는 (QAQ)8NR3, (QAQ)16NR3, (AQ)12NR3, (AQ)24NR3, C16NR4 또는 C32NR4, (QAQ)8, (QAQ)16, (AQ)12, (AQ)24, C16 또는 C32에 기초한 단백질로 구성되거나 또는 포함하는 필름.청구항 52에 있어서, 상기 필름은 (AQ)24NR3 또는 C16에 기초한 단백질로 구성되거나 또는 포함하는 필름.청구항 52 또는 청구항 53에 있어서, 상기 필름의 표면은 작은 유기 분자 및/또는 생물학적 거대분자, 예를 들면 단백질, 플루오레세인(FLUORESCEIN) 또는 Β-갈락토시다아제에 의해 변형되는 것인, 필름.
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