초록

Fmoc 및 Boc 모두로 보호된 아미노산 및 클로로메틸화된 폴리스티렌 레진을 이용한 3 개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 펩타이드를 합성하기 위한 고상 방법.

대표청구항 ▼

하기 식의 펩타이드를 제조하는 방법에 있어서,H-D-β-Nal-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH2상기 방법은, (a) 제1-결합-생성물을 형성하기 위하여 제1 아미노산을 에스테르 결합으로 고체 지지체 레진에 부착하는 단계, 이는 (i) 제1 아미노산의 세슘염을 형성하기 위하여 세슘 카보네이트 수용액을 제1 아미노산의 알코올 용액과 반응시키는 단계, (ii) 상기 제1 아미노산의 유리 세슘염 용매를 얻는 단계; (iii) 제1-결합-생성물을 형성하기 위하여 극성 비양성자성 용매에서 상기 고체 지지체 레진과

하기 식의 펩타이드를 제조하는 방법에 있어서,H-D-β-Nal-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH2상기 방법은, (a) 제1-결합-생성물을 형성하기 위하여 제1 아미노산을 에스테르 결합으로 고체 지지체 레진에 부착하는 단계, 이는 (i) 제1 아미노산의 세슘염을 형성하기 위하여 세슘 카보네이트 수용액을 제1 아미노산의 알코올 용액과 반응시키는 단계, (ii) 상기 제1 아미노산의 유리 세슘염 용매를 얻는 단계; (iii) 제1-결합-생성물을 형성하기 위하여 극성 비양성자성 용매에서 상기 고체 지지체 레진과 상기 제1 아미노산의 세슘염을 반응시키는 단계를 포함하고;여기서 상기 제1 아미노산은 상기 펩타이드의 C-터미널 아미노산에 해당하는 Boc-L-Thr이고, 상기 고체 지지체 레진은 클로로메틸화된 폴리스티렌 레진이며;(b) 제1-디블록된-결합-생성물을 형성하기 위하여 산(acid)으로 상기 제1-결합-생성물로부터 Boc를 디블로킹하는 단계;(c) 다음 아미노산을 α-아미노기의 Boc 또는 Fmoc 보호로 상기 제1-디블록된-결합-생성물에 결합시키는 단계, 이는 다음-블록된-결합-생성물을 형성하기 위하여 펩타이드 커플링 시약을 포함하는 유기 용매에서 상기 다음-아미노산과 상기 제1-디블록된-결합-생성물을 반응시키는 단계를 포함하고, 여기서 상기 다음-아미노산은 Boc 에 의해 블록된 비측쇄 아미노 그룹을 갖고, 상기 다음-아미노산이 하나 이상의 측쇄 기능기를 갖는다면 상기 측쇄 기능기는 보호가 필요없거나 또는 측쇄 기능기는 각각 Boc 및 Fmoc를 디블록하기 위하여 사용되는 산 및 염기 시약에 안정한 보호기를 갖으며;(d) 상기 다음-블록된-결합-생성물로부터 상기 Boc 를 디블로킹하는 단계, 이는 다음-디블록된-결합-생성물을 생성하기 위하여 상기 다음-블록된-결합-생성물과 산을 반응시키는 단계를 포함하며;(e) 단계 (c) 및 (d)를 반복하는 단계, 각 사이클은 (X+1)-다음-디블록된-결합-생성물을 형성하고, 여기서 X 는 원하는 사이클 반복의 횟수이며;(f) 다음-아미노산을 (b)로부터 얻어진 상기 제1-디블록된-결합-생성물, 또는 (e)로부터 얻어진 상기 (X+1)-다음-디블록된-결합-생성물에 결합시키는 단계, 이는 다음-블록된-결합-생성물을 형성하기 위해 펩타이드 커플링 시약을 포함하는 유기 용매에서 상기 다음-아미노산과 상기 제1-디블록된-결합-생성물 또는 상기 (X+1)-다음-디블록된-결합-생성물을 반응시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 다음 아미노산은 Fmoc에 의해 블록된 비측쇄 아미노 그룹을 갖고, 상기 다음-아미노산이 하나 이상의 측쇄 기능기를 갖는다면 측쇄 기능기는 보호가 필요없거나 또는 상기 측쇄 기능기는 Fmoc를 디블록하기 위해 사용되는 염기 시약에 안정한 보호기를 갖으며;(g) 상기 다음-블록된-결합-생성물로부터 Fmoc를 디블로킹하는 단계, 이는 다음-디블록된-결합-생성물을 생성하기 위해 상기 다음-블록된-결합-생성물과 1 차 또는 2 차 아민을 반응시키는 단계를 포함하며;(h) 단계 (f) 및 (g) 를 반복하는 단계, 각 사이클은 (X+1)-다음-디블록된-결합-생성물을 형성하고, 여기서 X 는 상기 펩타이드의 N-터미널 아미노산 쪽의 끝에서 두번째 아미노산이 결합 및 디블록될때까지, 사이클 반복의 원하는 횟수이며;(i) N-터미널 아미노산을 상기 (X+1)-다음-디블록된-결합-생성물과 결합시키는 단계, 이는 완성된-블록된-결합-생성물을 형성하기 위하여 펩타이드 커플링 시약을 포함하는 유기 용매에서 N-터미널 아미노산과 (X+1)-다음-디블록된-결합-생성물을 반응시키는 단계를 포함하며, 여기서 상기 N-터미널-아미노산은 Boc 또는 Fmoc에 의해 블록되는 비측쇄 아미노 그룹을 가지며;(j) Boc 또는 Fmoc 그룹을 상기 완성된-블록된-결합-생성물로부터 디블로킹하는 단계, 이는 완성된-펩타이드-레진-생성물을 형성하기 위해, 완성된-블록된-결합-생성물을 Boc의 경우에는산, 또는 Fmoc의 경우에는 염기와 반응시키는 단계를 포함하며;(k) 상기 완성된-펩타이드-레진-생성물상에 측쇄 기능기가 존재한다면 상기 완성된-펩타이드-레진-생성물의 측쇄 기능기를 탈보호하는 단계, 이는 탈보호된-완성된-펩타이드-레진-생성물을 형성하기 위하여 상기 완성된-펩타이드-레진-생성물을 적절한 탈보호 시약과 반응시키는 단계를 포함하며; 그리고(l) 펩타이드를 생성하기 위하여 상기 펩타이드를 상기 완성된-펩타이드-레진-생성물 또는 상기 탈보호된-완성된-펩타이드-레진-생성물의 고체 지지체 레진으로부터 분리시키는 단계, 이는 레진으로부터 펩타이드의 분리가 완결될때까지 상기 완성된-펩타이드-레진-생성물 또는 상기 탈보호된-완성된-펩타이드-레진 생성물을 암모니아, 1차 아민 또는 2차 아민과 반응시키는 단계를 포함하며;단계 (f) 및 (g)는 식 H-L-Thr-레진의 제1-디블록된-결합-생성물의 형성 후에 6 회 수행되고, 여기서 하기의 아미노산들이 H-Cys(Acm)-Tyr(O-t-Bu)-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys(Acm)-Thr-레진을 형성하기 위하여 Fmoc-L-Cys(Acm), Fmoc-L-Val, Fmoc-L-Lys(Boc), Fmoc-D-Trp, Fmoc-L-Tyr(O-t-Bu) 및 Fmoc-L-Cys(Acm)의 순서로 결합되고,Boc-D-β-Nal-Cys(Acm)-Tyr(O-t-Bu)-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys(Acm)-Thr-레진을 형성하기 위하여 상기 단계 (i)에 따라 Boc-D-β-Nal 을 H-Cys(Acm)-Tyr(O-t-Bu)-D-Trp-Lys(Boc)-Val-Cys(Acm)-Thr-레진에 결합시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 펩타이드의 제조 방법.