초록 ▼

본 발명은 종양 및 전이 억제인자 RUNX3 에 거대분자 전달 도메인(macromolecule transduction domain, MTD)이 융합되어 세포투과성을 갖는 RUNX3 재조합 단백질, 상기 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 상기 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질의 발현벡터, 및 상기 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 유효성분으로 함유하는 RUNX3 결손 또는 기능 상실을 치료하기 위한 항암제용 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 세포투과성을 갖는 RUNX3 재조합 단백질은 종

본 발명은 종양 및 전이 억제인자 RUNX3 에 거대분자 전달 도메인(macromolecule transduction domain, MTD)이 융합되어 세포투과성을 갖는 RUNX3 재조합 단백질, 상기 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 상기 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질의 발현벡터, 및 상기 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 유효성분으로 함유하는 RUNX3 결손 또는 기능 상실을 치료하기 위한 항암제용 약학 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 세포투과성을 갖는 RUNX3 재조합 단백질은 종양 및 전이 억제인자인 RUNX3 를 세포 내로 고효율로 도입하여 세포주기를 억제하는 TGF근 신호전달 기작을 재활성화시킴으로써 다양한 암의 형성 및 전이를 효과적으로 억제할 수 있는 항암제로서 유용하게 사용될 수 있다.

대표청구항 ▼

[청구항 1]종양 및 전이 억제인자 RUNX3 단백질의 한쪽 또는 양쪽 말단에 거대분자 전달 도메인(macromolecule transduction domain, MTD)이 융합되어 있는, 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질.[청구항 2]제1항에 있어서,상기 종양 및 전이 억제인자 RUNX3 단백질이 N-말단, R-말단 및 PST-풍부 도메인으로 구성된 서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장 형태(full-length form)이거나, 상기 서열에서 적어도 하나의 도메인이 결실된 결절 형태(truncated form)인 것을 특

[청구항 1]종양 및 전이 억제인자 RUNX3 단백질의 한쪽 또는 양쪽 말단에 거대분자 전달 도메인(macromolecule transduction domain, MTD)이 융합되어 있는, 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질.[청구항 2]제1항에 있어서,상기 종양 및 전이 억제인자 RUNX3 단백질이 N-말단, R-말단 및 PST-풍부 도메인으로 구성된 서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장 형태(full-length form)이거나, 상기 서열에서 적어도 하나의 도메인이 결실된 결절 형태(truncated form)인 것을 특징으로 하는 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질.[청구항 3]제1항에 있어서,상기 거대분자 전달 도메인이 서열번호: 4 내지 196으로 기재되는 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질.[청구항 4]제3항에 있어서,상기 거대분자 전달 도메인이 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4(kaposi fibroblast growth factor 4)-유래 MTD, 서열번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 JO-13 MTD, 서열번호: 60의 아미노산 서열을 갖는 JO-57 MTD, 서열번호: 88의 아미노산 서열을 갖는 JO-85 MTD 및 서열번호: 111의 아미노산 서열을 갖는 JO-108 MTD 로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질.[청구항 5]제1항에 있어서,상기 재조합 단백질의 한쪽 말단에 세포핵 배치 서열(nuclear localization sequence: NLS) 및 히스티딘-표지(histidine-tag) 친화성 도메인이 융합되어 있는 것을 특징으로 하는 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질.[청구항 6]제1항 내지 제5항 중의 어느 한 항에 있어서,상기 재조합 단백질이 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질:서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 N-말단에 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4-유래 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 C-말단에 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4-유래 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 양 말단에 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4-유래 MTD가 융합된 재조합 단백질,서열번호: 2의 아미노산 서열에서 R-말단 및 PST-풍부 도메인이 결실된 RUNX3의 N-말단 도메인에 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4-유래 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열에서 N-말단 및 PST-풍부 도메인이 결실된 RUNX3의 R-말단 도메인에 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4-유래 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열에서 N- 및 R-말단 도메인이 결실된 RUNX3의 PST-풍부 도메인에 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4-유래 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열에서 PST-풍부 도메인이 결실된 RUNX3의 N- 및 R-말단 도메인에 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4-유래 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열에서 N-말단 도메인이 결실된 RUNX3의 R-말단 및 PST-풍부 도메인에 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4-유래 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열에서 N-말단 도메인이 결실되고 68 번부터 200번까지의 R-말단 및 일부 PST-풍부 도메인을 포함하는 RUNX3의 PST-풍부 도메인에 서열번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 kFGF4-유래 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 N-말단에 서열번호: 60의 아미노산 서열을 갖는 JO-57 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 C-말단에 서열번호:60의 아미노산 서열을 갖는 JO-57 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 양 말단에 서열번호: 60의 아미노산 서열을 갖는 JO-57 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 N-말단에 서열번호: 88의 아미노산 서열을 갖는 JO-85 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 C-말단에 서열번호:88의 아미노산 서열을 갖는 JO-85 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 양 말단에 서열번호: 88의 아미노산 서열을 갖는 JO-85 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 N-말단에 서열번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 JO-13 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 C-말단에 서열번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 JO-13 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 양 말단에 서열번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 JO-13 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 N-말단에 서열번호: 111의 아미노산 서열을 갖는 JO-108 MTD가 융합된 재조합 단백질;서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 C-말단에 서열번호: 111의 아미노산 서열을 갖는 JO-108 MTD가 융합된 재조합 단백질; 및서열번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 전장의 RUNX3 양 말단에 서열번호: 111의 아미노산 서열을 갖는 JO-108 MTD가 융합된 재조합 단백질로서,상기 모든 재조합 단백질의 N-말단에 히스티딘-표지와 SV40 거대 T 항원 유래 NLS가 공유적으로 결합되어 있는 재조합 단백질.[청구항 7]제1항에 있어서,상기 재조합 단백질이 서열번호: 199, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 235, 237 및 239의 아미노산 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질.[청구항 8]제1항의 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드.[청구항 9]제8항에 있어서,상기 폴리뉴클레오티드가 서열번호: 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 226, 228, 230, 232, 234, 236 및 238의 염기서열로 구성된 군으로부터 선택되는 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드,[청구항 10]제8항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 발현벡터.[청구항 11]제10항에 있어서,상기 재조합 발현벡터가 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 발현벡터:kFGF4-유래 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 198의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM1R3;kFGF4-유래 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 200의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3M1;kFGF4-유래 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 202의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM1R3M1;kFGF4-유래 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 204의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3NM1;kFGF4-유래 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 206의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3RM1:kFGF4-유래 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 208의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3PM1;kFGF4-유래 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 210의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3NRM1;kFGF4-유래 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 212의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3RPM1;kFGF4-유래 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 214의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3CRM1;JO-57 MTD MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 216의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM2R3;JO-57 MTD MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 218의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3M2;JO-57 MTD MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 220의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM2R3M2;JO-85 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 222의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM3R3;JO-85 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 224의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3M3;JO-85 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 226의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM3R3M3;JO-13 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 228의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM4R3;JO-13 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 230의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3M4;JO-13 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 232의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM4R3M4;JO-108 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 234의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM5R3;JO-108 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 236의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHR3M5; 및JO-108 MTD가 융합된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 코딩하는 서열번호: 238의 염기서열을 갖는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 발현벡터 pHM5R3M5.[청구항 12]제10항의 재조합 발현벡터로 형질전환된 형질전환 세균.[청구항 13]제12항에 있어서,형질전환 세균이 대장균 DH5α/HM2R3(KCTC-11408BP)인 것을 특징으로 하는 형질전환 세균.[청구항 14]제12항에 있어서,형질전환 세균이 대장균 DH5α/HM3R3(KCTC-11409BP)인 것을 특징으로 하는 형질전환 세균.[청구항 15]하기 단계를 포함하는 제1항의 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 생산하는 방법:1) 제12항의 형질전환 세균을 배양하여 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 발현시키는 단계; 및2) 상기 배양액으로부터 발현된 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 정제하는 단계.[청구항 16]제1항의 세포투과성 RUNX3 재조합 단백질을 유효성분으로 함유하고 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 RUNX3 결손 또는 기능상실을 치료하기 위한 약학 조성물.[청구항 17]제16항에 있어서,상기 약학 조성물이 위암, 췌장암, 폐암, 대장암 및 간암으로 구성군으로부터 선택되는 암의 형성 및 전이를 예방 또는 치료하기 위한 것임을 특징으로 하는 약학 조성물.