초록

증식된 세포가 증가된 세포 독성을 나타내는, 폐쇄된 세포 배양계에서 NK 세포 및 NK 유사 T 세포의 대량 증식 및 동시 활성화 방법이 제시된다.

대표청구항 ▼

하기를 포함하고, 표현형 CD3-CD56+을 가지는 증식되고 활성화된 자연살해(natural killer(NK)) 세포 및 표현형 CD3+CD56+을 가지는 NK-유사 T 세포를 수득하는 방법:i) 종양을 가지는 개체 또는 기증자로부터 수득된, 분리된 말초 혈액(peripheral blood) 세포를 성장 배지에 재현탁하는 단계;ii) 분리된 세포를 0.5 x 106 내지 2 x 106/ml의 농도로 성장 배지가 포함된 폐쇄된 세포계(closed cell system) 생물반응장치(bioreactor)에 첨가하는 단계;iii) 진동

하기를 포함하고, 표현형 CD3-CD56+을 가지는 증식되고 활성화된 자연살해(natural killer(NK)) 세포 및 표현형 CD3+CD56+을 가지는 NK-유사 T 세포를 수득하는 방법:i) 종양을 가지는 개체 또는 기증자로부터 수득된, 분리된 말초 혈액(peripheral blood) 세포를 성장 배지에 재현탁하는 단계;ii) 분리된 세포를 0.5 x 106 내지 2 x 106/ml의 농도로 성장 배지가 포함된 폐쇄된 세포계(closed cell system) 생물반응장치(bioreactor)에 첨가하는 단계;iii) 진동 움직임 교반(rocking motion agitation)을 가지는 단계 i)의 세포를 배양 및 증식하고 적어도 50%의 증식된 세포 군(cell population)이 활성화된 NK 세포 및 NK-유사 T 세포를 포함할 때까지 36 내지 40℃의 온도로 가열하는 단계; 및iv) 상기 생물반응장치로부터 치료상으로 활성 NK-세포를 수확 및 증식하는 단계, 여기서 상기 치료상으로 활성 NK 세포는:(1) 10:1의 작동세포(effector cell) 대 표적세포(target cell) 비율에서 표적세포로서 K562 세포로 시험관 내 테스트에 결정되는 바와 같이, 플라스크에서 배양된 세포와 비교하여 세포독성에서 증가를 나타내고; 및(2) 플라스크 증식으로부터 수득된 표현형　CD3-CD56+ 세포를 가지는 활성화된 자연살해(natural killer(NK))세포와 비교하여 적어도 2배 더 높은 수준의 NKp44를 표현한다.