초록

게놈 DNA의 텔로미어를 증폭하는 방법, 이에 사용되는 게놈 DNA의 텔로미어 증폭용 조성물 및 키트를 제공한다. 이에 의하면, 하나의 어댑터를 사용하므로 반응 효율이 향상되고, 텔로미어 이외의 게놈 DNA의 증폭을 감소시켜 텔로미어 영역의 증폭 효율이 향상되고, 서던 블로팅과 같은 추가적인 과정 없이도 민감도가 높고 간편하게 증폭된 텔로미어 단편을 검출할 수 있고, 단일 염색체의 텔로미어를 증폭하기 때문에 단일 텔로미어의 길이를 측정할 수 있다.

대표청구항 ▼

텔로미어(telomere)를 포함하는 게놈 DNA를 포함하는 시료를 하나 이상의 핵산 절단 효소의 존재 하에서 인큐베이션시켜 텔로미어 단편을 수득하는 단계;상기 텔로미어 단편을 단일 가닥 어댑터 핵산 및 리가제의 존재 하에서 인큐베이션시켜 텔로미어 단편-어댑터 핵산 연결체를 형성하는 단계로서, 상기 단일 가닥 어댑터 핵산은 텔로미어 핵산 서열 또는 그의 단편에 상보적인 제1 영역을 포함하는 것인 단계;상기 텔로미어 단편-어댑터 핵산 연결체를 3'에서 5' 방향으로 핵산을 절단하는 단일 가닥 특이적 엑소뉴클레아제 및 제1 핵산 폴리머

텔로미어(telomere)를 포함하는 게놈 DNA를 포함하는 시료를 하나 이상의 핵산 절단 효소의 존재 하에서 인큐베이션시켜 텔로미어 단편을 수득하는 단계;상기 텔로미어 단편을 단일 가닥 어댑터 핵산 및 리가제의 존재 하에서 인큐베이션시켜 텔로미어 단편-어댑터 핵산 연결체를 형성하는 단계로서, 상기 단일 가닥 어댑터 핵산은 텔로미어 핵산 서열 또는 그의 단편에 상보적인 제1 영역을 포함하는 것인 단계;상기 텔로미어 단편-어댑터 핵산 연결체를 3'에서 5' 방향으로 핵산을 절단하는 단일 가닥 특이적 엑소뉴클레아제 및 제1 핵산 폴리머라제의 조합의 존재 하에서 인큐베이션시켜 블런트(blunt) 말단을 갖는 텔로미어 단편-어댑터 핵산 연결체를 형성하는 것인 단계;상기 블런트 말단을 갖는 텔로미어 단편-어댑터 핵산 연결체를 리가제의 존재 하에서 인큐베이션시켜 원형의 텔로미어 단편-어댑터 핵산 연결체를 형성하는 단계; 및상기 원형의 텔로미어 단편-어댑터 핵산 연결체를 프라이머 및 제2 핵산 폴리머라제의 존재 하에서 인큐베이션시켜 텔로미어 단편을 증폭하는 단계로서,상기 프라이머는 상기 단일 가닥 어댑터의 제1 영역의 5' 방향에 위치하는 2 이상 연속 폴리뉴클레오티드와 동일한 핵산 서열을 포함하는 정방향 프라이머, 상기 단일 가닥 어댑터의 제1 영역의 5' 방향에 위치하는 2 이상 연속 폴리뉴클레오티드에 상보적인 핵산 서열을 포함하는 역방향 프라이머, 또는 이들의 조합인 것인 단계를 포함하는, 게놈 DNA의 텔로미어를 증폭하는 방법.