초록

본 발명은 브라제인 다중 변이체 고효율 분비발현용 형질전환 효모 및 이를 이용한 브라제인 다중 변이체의 대량 생산 방법에 관한 것이다. 본 발명은 단백질의 이황화결합의 형성과 이성질화에 관여하는 단백질인 PDI와 ERO의 과발현으로 브라제인의 올바른 구조 형성을 유도하여 균체 밖으로 배출되는 재조합 브라제인 다중 변이체 변이체의 양을 증가시킴으로써 브라제인 다중 변이체 고효율 분비발현용 효모 발현계를 구축하였다.

대표청구항 ▼

클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis)를 브라제인 다중 변이체 발현을 위한 숙주로 하고, 브라제인 다중 변이체 유전자를 포함하는 재조합 발현벡터; 및 클루이베로마이세스 락티스 유래의 단백질 이황화결합 이성화효소(protein disulfide isomerase, PDI) 유전자를 포함하는 재조합 발현벡터;로 동시에 형질전환된 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis)를 배양하는 단계를 포함하되, 상기 브라제인 다중 변이체는 서열번호 14로 표시되는 브라제인 3차 변이체, 서열번호 15로

클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis)를 브라제인 다중 변이체 발현을 위한 숙주로 하고, 브라제인 다중 변이체 유전자를 포함하는 재조합 발현벡터; 및 클루이베로마이세스 락티스 유래의 단백질 이황화결합 이성화효소(protein disulfide isomerase, PDI) 유전자를 포함하는 재조합 발현벡터;로 동시에 형질전환된 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis)를 배양하는 단계를 포함하되, 상기 브라제인 다중 변이체는 서열번호 14로 표시되는 브라제인 3차 변이체, 서열번호 15로 표시되는 브라제인 4차 변이체, 서열번호 16으로 표시되는 브라제인 4차 변이체, 서열번호 17로 표시되는 브라제인 4차 변이체 및 서열번호 18로 표시되는 브라제인 4차 변이체인 브라제인으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나이고,상기 브라제인 다중 변이체 유전자를 포함하는 재조합 발현벡터는 서열번호 1로 표시되는 클루이베로마이세스 락티스(Kluyveromyces lactis) 알파-메이팅(α-mating) 신호서열 및 LAC4-PBⅠ 프로모터를 더 포함하며, 상기 배양 시 내재적 ERO(Endoplasmic reticulum oxidoreductin)의 과발현을 위해 배지에 DTT를 첨가하는 브라제인 다중 변이체의 대량 생산 방법.