초록 ▼

본 발명은 동물 유래 성분을 포함하지 않는(Animal Product Free, APF) 공정을 통한 보툴리눔 독소의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 보툴리눔 독소 생산 균주 배양액에 산을 처리하여 산 침전시키는 단계; 보툴리눔 독소를 포함하는 침전물에 완충용액을 첨가한 다음, 심층 여과(depth filtration, DF), 정밀여과(microfiltration, MF), 한외여과(ultrafiltration, UF), 멸균 여과(sterile filtration), 멤브레인 크로마토그래피(membrane chromat

본 발명은 동물 유래 성분을 포함하지 않는(Animal Product Free, APF) 공정을 통한 보툴리눔 독소의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 보툴리눔 독소 생산 균주 배양액에 산을 처리하여 산 침전시키는 단계; 보툴리눔 독소를 포함하는 침전물에 완충용액을 첨가한 다음, 심층 여과(depth filtration, DF), 정밀여과(microfiltration, MF), 한외여과(ultrafiltration, UF), 멸균 여과(sterile filtration), 멤브레인 크로마토그래피(membrane chromatography, MC) 및 원심분리(centrifugation)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 방법을 통해 정화(clarification)하는 단계; 정화된 보툴리눔 독소를 포함하는 용액을 UF 다이아필트레이션(UF diafiltration), 황산암모늄 침전, 또는 염산 침전을 수행한 다음, 상기 UF 다이아필트레이션의 투석유물(retentate)을 완충용액에 희석하거나, 황산암모늄 침전 또는 염산 침전의 침전물을 완충용액에 용해시키는 단계; 및 희석된 투석유물, 황산암모늄 침전물의 용해물, 또는 염산 침전물의 용해물을 음이온교환 크로마토그래피(Anion exchange chromatography: AEX)를 이용하여 보툴리눔 독소를 정제하는 단계; 를 포함하는 보툴리눔 독소의 제조방법에 대한 것이다. 본 발명에 따른 보툴리눔 독소의 제조방법은 동물 유래 성분의 유입이 원천적으로 차단되어, 전염성해면상뇌증(Transmissible Spongiform Encephalopathy: TSE) 등과 같은 감염을 예방할 수 있다. 또한, 본 발명의 간단한 공정으로 고순도의 보툴리눔 독소를 제조할 수 있으므로 매우 경제적이고 효율적이며, 기존의 방법으로 생산된 보툴리눔 독소에 비해 순도가 높아 국소작용력이 증가하므로 부작용으로 나타날 수 있는 보툴리눔 독소의 전신순환성이 낮아져 안전성이 증가하는 장점이 있어, 신경근육 장애, 주름살 제거제, 경직성 편마비 및 뇌성마비의 치료 등에 다양하게 이용될 수 있다.

대표청구항 ▼

(a) 보툴리눔 독소 생산 균주 배양액에 산을 처리하여 산 침전시키는 단계; (b) 상기 (a) 단계의 보툴리눔 독소를 포함하는 침전물에 완충용액을 첨가한 다음, 심층 여과(depth filtration, DF), 정밀여과(microfiltration, MF), 한외여과(ultrafiltration, UF) 및 멸균 여과(sterile filtration)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 방법을 통해 정화(clarification)하는 단계; (c) 상기 (b) 단계의 정화된 보툴리눔 독소를 포함하는 용액을 UF 다이아필트레이

(a) 보툴리눔 독소 생산 균주 배양액에 산을 처리하여 산 침전시키는 단계; (b) 상기 (a) 단계의 보툴리눔 독소를 포함하는 침전물에 완충용액을 첨가한 다음, 심층 여과(depth filtration, DF), 정밀여과(microfiltration, MF), 한외여과(ultrafiltration, UF) 및 멸균 여과(sterile filtration)로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 방법을 통해 정화(clarification)하는 단계; (c) 상기 (b) 단계의 정화된 보툴리눔 독소를 포함하는 용액을 UF 다이아필트레이션(UF diafiltration), 황산암모늄 침전, 또는 염산 침전을 수행한 다음, 상기 UF 다이아필트레이션의 투석유물(retentate)을 완충용액에 희석하거나, 황산암모늄 침전 또는 염산 침전의 침전물을 완충용액에 용해시키는 단계; 및 (d) 상기 (c) 단계의 희석된 투석유물, 황산암모늄 침전물의 용해물, 또는 염산 침전물의 용해물을 1회의 음이온교환 크로마토그래피(Anion exchange chromatography: AEX)을 이용하여 19S의 구성형태를 가지는 보툴리눔 독소를 정제하는 단계;를 포함하는 보툴리눔 독소의 제조방법으로서, 상기 방법은 (b) 단계에서 효소 처리가 배제되는 것을 특징으로 하는 보툴리눔 독소의 제조방법.