초록 ▼

본 발명은 히알루론산 나노섬유/HRP 고정체를 제조하기 위한 것으로 상기 목적을 달성하기 위해 일 실시예에 따른 효소 고정용 히알루론산 나노섬유 지지체의 제조 방법, HRP 효소 고정 방법, HRP 효소 고정체를 이용한 TMB 농도의 측정 방법 등을 제공한다.본 발명의 히알루론산 나노섬유/HRP 고정체를 통해 히알루론산에 고정된 효소의 산화력을 조절하여 보다 정확하게 정량적인 TMB의 청색의 양성 반응 여부를 확인하는 것이 가능해졌다. 또한, 본 발명의 방법을 통해 획득한 히알루론산 나노섬유 지지체에 HRP 효소의 고정화를 성공하여

본 발명은 히알루론산 나노섬유/HRP 고정체를 제조하기 위한 것으로 상기 목적을 달성하기 위해 일 실시예에 따른 효소 고정용 히알루론산 나노섬유 지지체의 제조 방법, HRP 효소 고정 방법, HRP 효소 고정체를 이용한 TMB 농도의 측정 방법 등을 제공한다.본 발명의 히알루론산 나노섬유/HRP 고정체를 통해 히알루론산에 고정된 효소의 산화력을 조절하여 보다 정확하게 정량적인 TMB의 청색의 양성 반응 여부를 확인하는 것이 가능해졌다. 또한, 본 발명의 방법을 통해 획득한 히알루론산 나노섬유 지지체에 HRP 효소의 고정화를 성공하여 인체에 존재하는 다양한 효소들의 고정이 가능함을 확인하였고 이를 통해 미래의 의학적 응용 및 산업적 용도로 활용할 수 있는 계기가 마련될 수 있다.

대표청구항 ▼

(a) 완충용액에 PEO(Polyethylene oxide)를 넣고 교반시키는 단계;(b) 상기 PEO 완충용액에 히알루론산 고분자를 넣고 교반시켜 히알루론산/PEO 완충용액을 제조하는 단계; 및(c) 상기 히알루론산/PEO 완충용액을 가교제 및 커플링제가 포함되어 있는 에탄올 배스에 전기 방사시켜 HRP(Horseradish Peroxidase) 고정용 히알루론산 나노섬유 지지체를 제조하는 단계로 상기 가교제는 ADH이고, 상기 커플링제는 EDC, EIC 및 DCC 중 어느 하나 또는 2 이상의 혼합물이며;(d) pH 4 내지 5

(a) 완충용액에 PEO(Polyethylene oxide)를 넣고 교반시키는 단계;(b) 상기 PEO 완충용액에 히알루론산 고분자를 넣고 교반시켜 히알루론산/PEO 완충용액을 제조하는 단계; 및(c) 상기 히알루론산/PEO 완충용액을 가교제 및 커플링제가 포함되어 있는 에탄올 배스에 전기 방사시켜 HRP(Horseradish Peroxidase) 고정용 히알루론산 나노섬유 지지체를 제조하는 단계로 상기 가교제는 ADH이고, 상기 커플링제는 EDC, EIC 및 DCC 중 어느 하나 또는 2 이상의 혼합물이며;(d) pH 4 내지 5의 아세트산 나트륨염 완충용액(Sodium acetate buffer)에 커플링제, 활성화제 및 상기 단계 (c)의 HRP(Horseradish Peroxidase) 고정용 히알루론산 나노섬유 지지체를 넣고 반응시키는 단계; (e) 반응 후 HRP(Horseradish Peroxidase)가 고정된 히알루론산 나노섬유 지지체가 용해된 완충용액을 원심 분리 후 고순도 에탄올을 이용하여 세척하는 단계; 및(f-1) 상기 세척된 HRP(Horseradish Peroxidase)가 고정된 히알루론산 나노섬유 지지체를 과산화수소와 미지의 농도인 TMB(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine)가 포함되어 있는 용액에 첨가하여 반응시켜 변환되는 청색의 색상 변환 정도를 확인하여 TMB(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine)의 농도를 확인하는 단계 로 구성된 HRP(Horseradish Peroxidase) 고정용 히알루론산 나노섬유 지지체를 이용한 미지의 TMB 농도를 확인하는 방법.