초록 ▼

본 발명은 초고성능액체크로마토그래피를 이용한 봉독 내 멜리틴, 아파민 및 포스포리파아제 A2의 동시 분석법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 필터여과된 봉독 수용액 시료를 초고성능액체크로마토그래피하여 봉독 내의 멜리틴, 아파민 및 포스포리파아제 A2를 동시에 분석하는 방법에 관한 것이다. 종래에는 멜리틴과 같은 단일 물질만을 봉독의 지표물질로서 확인하여 봉독의 품질확인에 대한 실험결과가 정확하지 않았지만, 본 발명을 통해 봉독의 정확한 함량 분석을 위해 한 번의 실험방법을 이용하여 봉독 내의 지표 물질인 멜리틴, 아파민 및 포스포리파

본 발명은 초고성능액체크로마토그래피를 이용한 봉독 내 멜리틴, 아파민 및 포스포리파아제 A2의 동시 분석법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 필터여과된 봉독 수용액 시료를 초고성능액체크로마토그래피하여 봉독 내의 멜리틴, 아파민 및 포스포리파아제 A2를 동시에 분석하는 방법에 관한 것이다. 종래에는 멜리틴과 같은 단일 물질만을 봉독의 지표물질로서 확인하여 봉독의 품질확인에 대한 실험결과가 정확하지 않았지만, 본 발명을 통해 봉독의 정확한 함량 분석을 위해 한 번의 실험방법을 이용하여 봉독 내의 지표 물질인 멜리틴, 아파민 및 포스포리파아제 A2를 동시에 분석하는 방법을 확인함으로써 양봉 농가 및 관련 업체가 봉독의 품질 관리 및 봉독 채취량 분석에 관련된 비용을 절감할 수 있는 방법을 용이하게 제공할 수 있게 되었다.

대표청구항 ▼

(1단계) 봉독, 멜리틴 표준품, 아파민 표준품 및 포스포리파아제 A2 표준품을 각각 증류수에 녹여 수용액을 준비하는 단계;(2단계) 상기 1단계에서 준비한 각각의 수용액을 필터로 여과한 액상을 초고성능액체크로마토그래피용 시료로 준비하는 단계; (3단계) 상기 2단계에서 얻은 각각의 시료를 초고성능액체크로마토그래피 분석용 옥타데실실란(C18)으로 충전된 역상 비극성 컬럼에 각각 주입시키는 단계;(4단계) 상기 초고성능액체크로마토그래피 분석용 컬럼에, A용액과 B용액을 혼합한 혼합용매로서 A용액은 10~30mM 트리플루오로아세트산의

(1단계) 봉독, 멜리틴 표준품, 아파민 표준품 및 포스포리파아제 A2 표준품을 각각 증류수에 녹여 수용액을 준비하는 단계;(2단계) 상기 1단계에서 준비한 각각의 수용액을 필터로 여과한 액상을 초고성능액체크로마토그래피용 시료로 준비하는 단계; (3단계) 상기 2단계에서 얻은 각각의 시료를 초고성능액체크로마토그래피 분석용 옥타데실실란(C18)으로 충전된 역상 비극성 컬럼에 각각 주입시키는 단계;(4단계) 상기 초고성능액체크로마토그래피 분석용 컬럼에, A용액과 B용액을 혼합한 혼합용매로서 A용액은 10~30mM 트리플루오로아세트산의 아세토나이트릴 용액이고, B용액은 10~30mM 트리플루오로아세트산의 수용액인 혼합용매를, 이동시간이 3분 미만일 때는 A용액이 10 부피% 이상 31 부피% 미만, 이동시간이 3분 이상에서 5분 미만일 때는 A용액이 31 부피% 이상 40 부피% 미만, 이동시간이 5분 이상에서 10분 이하일 때는 A용액이 40 부피% 이상에서 45 부피% 이하가 되도록 B용액과 혼합하여 흘려주어 봉독 내의 단백질을 분리하는 단계; 및,(5단계) 분리된 단백질의 초고성능액체크로마토그래피 흡광도 분석을 통해 봉독 내의 멜리틴, 아파민 및 포스포리파아제 A2의 함량을 분석하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 봉독 내의 멜리틴, 아파민 및 포스포리파아제 A2의 동시 분석법.