초록 ▼

본 발명은 실시간 PCR 방법 및 장치에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 단일파장으로 다중검출이 가능하도록 단일파장의 광원에서 방사되는 여기 광에 반응하여 동일 파장 대의 형광을 발산하는 인터칼레이터 타입(intercalator type) 형광물질과 프로브 타입(probe type) 형광물질을 혼합하여 사용하되, DNA 변성단계에서 프로브 타입 형광물질에서 발광하는 형광을 실시간으로 측정하여 목표 유전자의 증폭 산물을 정량하고, 용해곡선 측정단계에서 인터칼레이터 타입 형광물질에서 발광하는 형광이 온도의 증가에 따라 감소하는 추세를 보

본 발명은 실시간 PCR 방법 및 장치에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 단일파장으로 다중검출이 가능하도록 단일파장의 광원에서 방사되는 여기 광에 반응하여 동일 파장 대의 형광을 발산하는 인터칼레이터 타입(intercalator type) 형광물질과 프로브 타입(probe type) 형광물질을 혼합하여 사용하되, DNA 변성단계에서 프로브 타입 형광물질에서 발광하는 형광을 실시간으로 측정하여 목표 유전자의 증폭 산물을 정량하고, 용해곡선 측정단계에서 인터칼레이터 타입 형광물질에서 발광하는 형광이 온도의 증가에 따라 감소하는 추세를 보여주는 융해곡선(melting curve)의 융해온도(Tm)를 이용하여 목표 유전자 또는 내부대조 유전자의 검출 여부를 확인하여 PCR 공정 및 장치의 신뢰성을 검증할 수 있는 단일파장으로 다중검출이 가능한 실시간 PCR 방법 및 이를 위한 실시간 PCR 장치에 관한 것이다.

대표청구항 ▼

DNA 변성(Denaturation), 어닐링(Annealing) 및 DNA 합성(Extension)단계를 반복적으로 실시하여 목표 유전자 및 내부대조 유전자를 증폭하고 다수의 형광물질에서 발광하는 형광을 측정하여 증폭 산물을 실시간으로 정량하는 다중검출이 가능한 실시간 PCR 방법에 있어서,단일 파장 대의 광원에서 방사되는 여기 광에 반응하여 동일 파장 대의 형광을 발광하는 인터칼레이터 타입(intercalator type) 형광물질과 프로브 타입(probe type) 형광물질을 사용하여 유전자를 증폭하고;상기 프로브 타입 형광물

DNA 변성(Denaturation), 어닐링(Annealing) 및 DNA 합성(Extension)단계를 반복적으로 실시하여 목표 유전자 및 내부대조 유전자를 증폭하고 다수의 형광물질에서 발광하는 형광을 측정하여 증폭 산물을 실시간으로 정량하는 다중검출이 가능한 실시간 PCR 방법에 있어서,단일 파장 대의 광원에서 방사되는 여기 광에 반응하여 동일 파장 대의 형광을 발광하는 인터칼레이터 타입(intercalator type) 형광물질과 프로브 타입(probe type) 형광물질을 사용하여 유전자를 증폭하고;상기 프로브 타입 형광물질에서 발광하는 형광은, DNA 변성단계에서 실시간으로 측정하여 프로브 타입 형광물질과 결합되는 목표 유전자의 증폭 산물을 실시간으로 정량하되, 이중나선 DNA (dsDNA) 중 95% 이상이 단일 가닥 DNA(ssDNA)로 분리되는 융해온도(Tm95) 이상에서 형광을 측정하여 상기 인터칼레이터 타입 형광물질에서 발광하는 형광을 배제하고 상기 프로브 타입 형광물질에서 발광하는 형광만을 측정하며;상기 DNA 변성, 어닐링 및 DNA 합성단계를 반복적으로 수행하여 목표 유전자 및 내부대조 유전자를 증폭한 후, 온도를 점차로 증가시키면서 일정한 시간 간격으로 형광을 측정하되, 이중나선 DNA (dsDNA) 중 50% 이상이 단일 가닥 DNA(ssDNA)로 분리되는 융해온도(Tm50)를 이용하여 목표 유전자 또는 내부대조 유전자의 증폭 여부를 확인하여 PCR 공정 및 장치의 신뢰도를 검증하는 것을 특징으로 하는 단일파장으로 다중검출이 가능한 실시간 PCR 방법.