초록 ▼

본 발명은 혈청 또는 혈장의 아미노산 회수율을 높이는 방법 및 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS/MS)를 이용한 혈청 또는 혈장의 유리 아미노산의 정량분석방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 제단백 처리 전 액체-액체 추출법을 이용하여 분석 대상의 이온화를 방해하는 매트릭스 효과(matrix effect)를 유발하는 인지질을 제거하는 전처리로 혈장 또는 혈청 시료의 수용성인 아미노산의 회수율을 높일 수가 있으며, 또한 별도의 유도체화 반응 없이 LC-MS/MS로 신속하고 정확한 분석이 가능하며 진단 및 검사의 보조수단으로 유용

본 발명은 혈청 또는 혈장의 아미노산 회수율을 높이는 방법 및 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS/MS)를 이용한 혈청 또는 혈장의 유리 아미노산의 정량분석방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 제단백 처리 전 액체-액체 추출법을 이용하여 분석 대상의 이온화를 방해하는 매트릭스 효과(matrix effect)를 유발하는 인지질을 제거하는 전처리로 혈장 또는 혈청 시료의 수용성인 아미노산의 회수율을 높일 수가 있으며, 또한 별도의 유도체화 반응 없이 LC-MS/MS로 신속하고 정확한 분석이 가능하며 진단 및 검사의 보조수단으로 유용할 수 있다.

대표청구항 ▼

시료인 혈청 또는 혈장에 제 1 유기용매와 완충용액을 이용한 액체-액체 추출법을 수행한 후 원심분리하여 극성 수층인 하층액을 얻는 단계(단계 1);상기 단계 1에서 얻은 하층액에 혼입된 유기용매를 증발시켜 제거한 뒤, 제 2 유기용매로 제단백 처리한 후 원심분리하여 상층액을 얻는 단계(단계 2); 및상기 단계 2에서 얻은 상층액을 고성능 액체크로마토그래피-질량분석기로 정량분석하는 단계(단계 3);를 포함하고,상기 단계 1의 제 1 유기용매는 2-프로판올(2-propanol)과 헵테인(heptane)의 부피비가 1:3 내지 1:5인

시료인 혈청 또는 혈장에 제 1 유기용매와 완충용액을 이용한 액체-액체 추출법을 수행한 후 원심분리하여 극성 수층인 하층액을 얻는 단계(단계 1);상기 단계 1에서 얻은 하층액에 혼입된 유기용매를 증발시켜 제거한 뒤, 제 2 유기용매로 제단백 처리한 후 원심분리하여 상층액을 얻는 단계(단계 2); 및상기 단계 2에서 얻은 상층액을 고성능 액체크로마토그래피-질량분석기로 정량분석하는 단계(단계 3);를 포함하고,상기 단계 1의 제 1 유기용매는 2-프로판올(2-propanol)과 헵테인(heptane)의 부피비가 1:3 내지 1:5인 혼합용매, 또는 2-프로판올(2-propanol)과 헥세인(hexane)의 부피비가 1:1 내지 1:2인 혼합용매이고,상기 단계 1의 완충용액은 염석효과(salting-out effect)를 일으키는 것으로 암모늄 아세테이트 수용액이고,상기 단계 1의 완충용액과 제 1 유기용매의 부피비는 1:20 내지 1:10이고,상기 단계 3에서 액체크로마토그래피의 컬럼은 HILIC(Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography)이고,상기 단계 3의 액체크로마토그래피의 이동상 조성은 이동상 A로서 0.09~0.11% 농도의 포름산 및 이동상 B로서 아세토니트릴을 사용하고, 상기 이동상 A 및 이동상 B의 부피비가 20:80 내지 95:5의 기울기 용리(gradient)를 적용하며, 이동상의 속도는 0.2~0.3 ㎖/min이고,상기 단계 3의 질량분석기로 분석시 분석 완료까지 포지티브 이온화 모드(positive ionization mode)로 이온화하는 것을 특징으로 하는,유도체화 단계없이 액체크로마토그래피-질량분석기를 이용한 혈청 또는 혈장 중의 아미노산의 검출방법.