초록 ▼

본 발명은 식물에서 발병시기의 중복성과 발병증상의 유사성으로 정확한 진단이 어려운 세균성 시들음병을 유발하는 R. 솔라나세아룸과 곰팡이성 시들음병을 유발하는 F. 옥시스포룸을 동시에 검출하기 위한 면역 진단 키트 및 진단 방법으로 반정량 수평류 면역진단기술을 사용하여 식물체 즙액에서 병원균을 검출하여 식물 시들음병 원인균을 초기에 판별하기 위한 검사 키트에 관한 것이다. 또한, 병원균의 밀도를 반정량적으로 측정하여 식물에서 감염 정도를 측정할 수 있고 본 발명의 구성에 따라 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸을 동시에 구분하여 검출

본 발명은 식물에서 발병시기의 중복성과 발병증상의 유사성으로 정확한 진단이 어려운 세균성 시들음병을 유발하는 R. 솔라나세아룸과 곰팡이성 시들음병을 유발하는 F. 옥시스포룸을 동시에 검출하기 위한 면역 진단 키트 및 진단 방법으로 반정량 수평류 면역진단기술을 사용하여 식물체 즙액에서 병원균을 검출하여 식물 시들음병 원인균을 초기에 판별하기 위한 검사 키트에 관한 것이다. 또한, 병원균의 밀도를 반정량적으로 측정하여 식물에서 감염 정도를 측정할 수 있고 본 발명의 구성에 따라 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸을 동시에 구분하여 검출할 수 있어 종래의 육안관찰, 미생물 분리동정법보다 더 빠른 기간에 쉽고 정확하게 질병을 진단하는데 도움이 되어 농가에서 식물 질병의 치료제 선정에 기여할 수 있는 유용한 발명이다.

대표청구항 ▼

세균성 시들음병 (Bacterial wilt disease)을 유발하는 랄스토니아 솔라나세아룸 (Ralstonia Solanacearum; R. 솔라나세아룸; R.S)과 곰팡이성 시들음병 (Fungal wilt diseases)을 유발하는 푸사리움 옥시스포룸 (Fusarium Oxysporum; F. 옥시스포룸; F.O) 각각의 항체를 제공하는 단계;상기 각각의 항체에 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸을 결합시키는 단계;상기 결합된 각각의 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸의 양을 정량하는 단계로 구성되고,상기 R. 솔라나세아룸과

세균성 시들음병 (Bacterial wilt disease)을 유발하는 랄스토니아 솔라나세아룸 (Ralstonia Solanacearum; R. 솔라나세아룸; R.S)과 곰팡이성 시들음병 (Fungal wilt diseases)을 유발하는 푸사리움 옥시스포룸 (Fusarium Oxysporum; F. 옥시스포룸; F.O) 각각의 항체를 제공하는 단계;상기 각각의 항체에 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸을 결합시키는 단계;상기 결합된 각각의 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸의 양을 정량하는 단계로 구성되고,상기 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸 각각의 항체를 제공하는 단계에서,상기 랄스토니아 솔라나세아룸 (Ralstonia Solanacearum; R. 솔라나세아룸; R.S)과 푸사리움 옥시스포룸 (Fusarium Oxysporum; F. 옥시스포룸; F.O) 각각의 항체는 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸 각각을 항원으로 하여 이들을 고온에서 불활화한 후 면역원으로 사용하여 마우스에 면역을 진행하고, 마우스 비장세포(Splenocyte)와 골수종세포(Myeloma cell, Sp2/0 Ag-18)를 비장세포:골수종세포가 5:1이 비율이 되게 융합(Cell fusion)하여 하이브리도마(Hybridoma)를 제작하고, 상기 하이브리도마(Hybridoma)에서 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸에 각각 특이적이고, 세균 Bacillus Subtilis, Lactobacillus Plantarum, Peseudomonas SP., Bacillus Amyloliquefaciens와, 곰팡이 Botrysis Cinerea, Colletotrichum Gloeosporioides, Alternaria Panax, Fusarium Graminearum에 교차반응성이 나타나지 않는 단클론 항체를 각각 확보하여, 확보된 항체 중에서 항-R. 솔라나세아룸 항체와 항-F. 옥시스포룸 항체를 선정하고,상기 R. 솔라나세아룸 항체의 최종 농도가 18ug/ml이 되도록 교반하면서 금 용액에 첨가하고, 상기 F. 옥시스포룸 항체는 최종 농도가 16ug/ml이 되도록 교반하면서 금 용액에 첨가하고, 각각의 금 입자 부유물에 10% BSA 용액을 첨가하고 교반한 후, 결합된 금 용액을 원심분리하여, 결합되지 않은 항체를 제거하기 위해서 상등액은 버리고, 결합된 금 용액(펠렛)에, 펠렛 용량의 3배의 1% BSA가 첨가된 5mM 보레이트(Sodium Tetraborate, pH 7.2)을 첨가한 후 펠렛을 재 부유한 후, 부유물을 다시 원심분리하고, 최종 펠렛을 1%의 BSA가 첨가된 5mM 보레이트(Sodium Tetraborate, pH 7.2)에 스펙트로포토메터 530nm에서 흡광도가 10±1 O.D.가 되게 조정하여 항체 금 접합체를 제조하여, 최종적으로 항-R. 솔라나세아룸 항체 금 접합체와 항-F. 옥시스포룸 항체 금 접합체를 각각 얻고,상기 R. 솔라나세아룸과 F. 옥시스포룸의 양을 정량하는 단계는, 검출 키트의 컷-오프 레벨을 선정하고, 항-R. 솔라나세아룸 항체와 항-F. 옥시스포룸 항체가 적용된 검출 키트를 이용하여 감염원을 반정량적으로 분석하여 식물체 시들음병 원인균을 동시에 판정하되, 각각의 컷-오프 레벨은, R. 솔라나세아룸의 경우 저역가: 105 cfu/ml, 중역가: 106 cfu/ml, 고역가: 107 cfu/ml이 되고, F. 옥시스포룸의 경우 저역가: 104 cfu/ml, 중역가: 105 cfu/ml, 고역가: 106 cfu/ml로 판단하며, 고역가인 경우 시들음병 증상을 성기로 판단하고, 중역가인 경우 시들음병 증상을 중기로 판단하고, 저역가인 경우 시들음병 증상을 초기로 판단하며, R. 솔라나세아룸은 104 cfu/ml인 경우 음성으로 판단하고, F.옥시스포롬은 103 cfu/ml인 경우 음성으로 판단하는 것을 특징으로 하는 반정량 수평류 면역진단 기술을 이용한 랄스토니아 솔라나세아룸과 푸사리움 옥시스포룸의 동시 진단 방법.