건국대학교 글로컬산학협력단 / 충청북도 충주시 충원대로 *** (단월동,건국대학교글로컬캠퍼스)
대리인 / 주소
김정수
심사청구여부
있음 (2019-07-02)
심사진행상태
등록결정(일반)
법적상태
등록
초록▼
본 발명은, (a) 모유 시료를 채집하는 단계; (b) 상기 모유 시료를 이용하여 복수 개의 검출용 시료를 제조하는 단계; (c) 상기 검출용 시료를 융합 실리카 모세 혈관 칼럼(fused-silica capillary column)을 이용한 액체 크로마토그래피법으로 분리하고, 분리된 성분을 질량 분석법으로 분석하여 상기 모유 시료의 성분 정보를 산출하는 단계; 및 (d) 상기 단계 (c)에서 산출한 성분 정보를 표준화된 모유의 성분 정보와 비교하는 단계;를 포함하는 다차원 모유 분석방법을 제공한다. 본 발명에 따른 다차원 모유 분
본 발명은, (a) 모유 시료를 채집하는 단계; (b) 상기 모유 시료를 이용하여 복수 개의 검출용 시료를 제조하는 단계; (c) 상기 검출용 시료를 융합 실리카 모세 혈관 칼럼(fused-silica capillary column)을 이용한 액체 크로마토그래피법으로 분리하고, 분리된 성분을 질량 분석법으로 분석하여 상기 모유 시료의 성분 정보를 산출하는 단계; 및 (d) 상기 단계 (c)에서 산출한 성분 정보를 표준화된 모유의 성분 정보와 비교하는 단계;를 포함하는 다차원 모유 분석방법을 제공한다. 본 발명에 따른 다차원 모유 분석방법은 모유에 포함된 단백질, 지질, 탄수화물 등의 영양 성분을 고감도로 분석할 수 있어, 신뢰성 있는 분석 결과를 산출할 수 있다.
대표청구항▼
(a) 18세 이상 여성의 출산 후 45일 이후의 성숙유인 모유 시료를 채집하는 단계;(b) 상기 모유 시료를 이용하여 단백질 검출용 시료, 지질 검출용 시료, 및 탄수화물 검출용 시료를 제조하는 단계로서,상기 단백질 검출용 시료는 모유 시료를 원심분리하여 얻은 상등액에 TCA(trichloroacetic acid)를 첨가하여 TCA-모유 반응물을 제조하고, 4 ℃의 온도 조건에서 초음파를 조사하여 1시간 동안 반응시킨 후 원심분리하여 상등액을 수득하고, 수득한 상등액에 우레아(urea) 및 트리스-염산(Tris-HCl buffer
(a) 18세 이상 여성의 출산 후 45일 이후의 성숙유인 모유 시료를 채집하는 단계;(b) 상기 모유 시료를 이용하여 단백질 검출용 시료, 지질 검출용 시료, 및 탄수화물 검출용 시료를 제조하는 단계로서,상기 단백질 검출용 시료는 모유 시료를 원심분리하여 얻은 상등액에 TCA(trichloroacetic acid)를 첨가하여 TCA-모유 반응물을 제조하고, 4 ℃의 온도 조건에서 초음파를 조사하여 1시간 동안 반응시킨 후 원심분리하여 상등액을 수득하고, 수득한 상등액에 우레아(urea) 및 트리스-염산(Tris-HCl buffer, pH 8.5)을 첨가하여 단백질 추출물을 얻고, 얻어진 단백질 추출물에 5 mM의 TCEP[Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride]를 첨가하여 실온에서 반응시켜 단백질 추출물을 환원시키고, 환원이 완료된 단백질 추출물에 10 mM의 이오도아세트아미드(iodoacetamide)를 첨가한 후 실온에서 반응시켜 카바미도메틸화를 유도하고, 카바미도메틸화 유도가 완료된 단백질 추출물에 2 내지 8 M의 우레아와 1 M 트리스 버퍼 및 2 mM의 염화칼슘을 첨가한 후, 트립신을 첨가하여 단백질을 가수분해하고 질소농축기를 이용하여 농축하여 얻은 것이고,상기 지질 검출용 시료는 모유 시료를 동결건조하여 침전물을 제조하고, 제조한 침전물에 클로로포름 및 메탄올이 2:1의 비율로 혼합된 용매를 첨가한 후, 20분 동안 와류교반하고 멸균수를 첨가한 후 추가로 와류교반을 수행한 다음, 원심분리하여 유기용매 층과 수용액 층으로 분리하고, 유기용매층을 취하여 원심건조기에서 건조한 후, 건조가 완료된 분말에 클로로포름 및 메탄올의 혼합물(1:1 중량비)을 추가하여 얻은 것이고,상기 탄수화물 검출용 시료는 모유 시료에 아세톤 및 클로로포름을 9:4의 중량비로 포함하는 혼합용액과 1M의 질산을 순차적으로 첨가한 후, 원심분리하여 단백질 및 지질을 침전시키고 상등액을 수득한 다음, 수득한 상등액을 10,000 Mw 분자량을 배제하는 폴리설폰 나노여과막을 이용하여 상등액을 여과하고, 여과한 상등액에 방사선 동위원소인 세슘(Cs)을 첨가하여 얻은 것을 특징으로 하는 단계;(c) 상기 검출용 시료를 융합 실리카 모세 혈관 칼럼(fused-silica capillary column)을 이용한 액체 크로마토그래피법으로 분리하고, 분리된 성분을 질량 분석법으로 분석하여 상기 모유 시료의 단백질, 면역글로불린, 지질 및 탄수화물을 포함하는 성분 정보를 산출하는 단계; 및(d) 상기 단계 (c)에서 산출한 성분 정보를 표준화된 모유의 성분 정보와 비교하는 단계;를 포함하고,산출한 성분 정보 중 부족분을 보충하여 10 내지 22 g/L의 단백질, 15 내지 52 g/L의 지질, 55 내지 80 g/L의 탄수화물, 4.0 내지 5.5 mg/mL의 칼슘(Ca), 0.0005 내지 0.0021 mg/mL의 구리(Cu), 0.001 내지 0.007 mg/mL의 철(Fe), 0.18 내지 0.3 mg/mL의 마그네슘(Mg), 0.01 내지 0.1 mg/mL의 망간(Mn), 2 내지 3 mg/mL의 인(P), 1 내지 2 mg/mL의 칼륨(K), 0.5 내지 1 mg/mL의 나트륨(Na) 및 0.3 내지 0.7 mg/mL의 아연(Zn)을 포함하는 표준화된 모유를 제공하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 다차원 모유 분석방법.
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