[특허]한국형 중동호흡기증후군 코로나바이러스 감염에 감수성을 가지는 인간 DPP4 유전자를 전신에 발현하는 형질전환마우스와 이의 용도

[한국특허] 한국형 중동호흡기증후군 코로나바이러스 감염에 감수성을 가지는 인간 DPP4 유전자를 전신에 발현하는 형질전환마우스와 이의 용도
Transgenic mouse expressing human DPP4 gene susceptible for South Korean strain Middle East respiratory syndrome coronavirus infection and use thereof 원문보기

IPC분류정보
국가/구분	한국(KR)/등록특허	크게보기
국제특허분류(IPC8판)	A01K-067/027 C12N-015/85
출원번호	10-2020-0024827 (2020-02-28)
등록번호	10-2207249-0000 (2021-01-19)
DOI	http://doi.org/10.8080/1020200024827
발명자 / 주소	이주연 / 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명로 *, 질병관리본부 김성순 / 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명로 **, 질병관리본부 양정선 / 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명로 **, 질병관리본부 최장훈 / 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명로 **, 질병관리본부 이태영 / 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명로 **, 질병관리본부 박우정 / 충청북도 청주시 흥덕구 오송읍 오송생명로 *, 질병관리본부 김성준 / 대전광역시 유성구 가정로 * 한국화학연구원 구근본 / 대전광역시 유성구 김범태 / 대전광역시 유성구 가정로 * 한국화학연구원 안대균 / 대전광역시 유성구 가정로 * 한국화학연구원 김홍석 / 서울특별시 강서구 강서로 * 우장산아이파크이편한세상아파트 동 **호
출원인 / 주소	한국화학연구원 주식회사 마크로젠 / 대전광역시 유성구 가정로 * (장동) 대한민국(관리청: 특허청장, 승계청: 질병관리청장) / 서울특별시 금천구 벚꽃로 , 월드메르디앙벤처센터 *층 (가산동)
대리인 / 주소	특허법인주원
심사청구여부	있음 (2020-02-28)
심사진행상태	등록결정(일반)
법적상태	등록

초록 ▼

본 발명은 중동호흡기증후군 코로나바이러스 감염 수용체인 인간 Dipeptidyl peptidase 4 (human DPP4, hDPP4) 유전자를 전신에 발현하는 형질전환마우스에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 CMV 프로모터; 인간 DPP4 유전자; 및 C 말단 부위에 Flag 펩타이드를 tag시켜 작동가능하게 연결된 인간 DPP4 유전자를 발현하기 위한 재조합 벡터로 형질전환된, 인간 DPP4 유전자를 발현하기 위한 형질전환 마우스, 상기 형질전환마우스를 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 상기 형질전환마우스는 전신에 hDPP4 유전자 발현을 확인하였고, 한국형 및 유럽형 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 특이적 감수성을 확인하였다. 중동호흡기증후군 코로나바이러스가 감염된 hDPP4 형질전환마우스는 감염 말기에 모두 급격한 체중 저하와 더불어 치사가 일어났고, 심각한 폐 손상이 관찰되었다. 또한, 중동호흡기증후군 코로나바이러스가 감염된 hDPP4 형질전환마우스에서 다양한 염증성 사이토카인 분비가 급격히 일어남을 확인하였다. 본 발명에 따른 hDPP4 전신 발현 형질전환마우스는 중동호흡기증후군 코로나바이러스 감염성 질병 발달을 규명하기 위한 in vivo 연구에 중요한 동물모델로 활용 가능하며, 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 제어하기 위한 백신 및 치료제 개발에 매우 유용하게 활용 가능하다.

대표청구항 ▼

(1) 서열번호 1인 인간 DPP4 유전자를 확보하는 단계; (2) CMV 프로모터에 의해 인간 DPP4 유전자가 발현되는 pCMV-hDPP4-2XFlag 재조합 벡터를 제조하는 단계;(3) 상기 재조합 벡터의 서열 및 발현을 형질 도입된 인간 배아 신장 293T 세포의 파쇄용액과 항-Flag 항체를 이용한 웨스턴 브로팅 방법을 이용하여 확인하는 단계;(4) 상기 재조합 벡터를 SpeI과 XmnI 제한효소로 공동 처리 하여 linearized pCMV-hDPP4-2XFlag DNA fragment를 준비하는 단계;(5) 미세주입법(microinjection)을 통하여 linearized pCMV-hDPP4-2XFlag DNA fragment를 C57BL/6 마우스에 삽입시키는 단계;(6) 꼬리 절단(tail-cut) 방법으로 DNA를 확보하여 생산된 마우스를 확인하는 단계; (7) 뇌, 간 및 폐로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 조직을 분리하여 항-hDPP4 항체 또는 항-Flag 항체를 이용한 웨스턴 브로팅 방법으로 유전자 발현을 확인하는 단계; 및(8) Huh7 세포주에서 증식한 한국형 및 유럽형으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 중동호흡기증후군 코로나바이러스를 비강 및 복강으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 경로를 통해 감염시켜 체중, 치사율, 감염경로 및 염증성 사이토카인 분비량을 확인하는 단계; 를 포함하는 인간 DPP4 유전자를 발현하는 형질전환 마우스를 이용하여 중동호흡기 증후군 코로나바이러스 검출 정보 제공 방법

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A	생활필수품
A62	인명구조; 소방(사다리 E06C)
A62B	인명구조용의 기구, 장치 또는 방법(특히 의료용에 사용되는 밸브 A61M 39/00; 특히 물에서 쓰이는 인명구조 장치 또는 방법 B63C 9/00; 잠수장비 B63C 11/00; 특히 항공기에 쓰는 것, 예. 낙하산, 투출좌석 B64D; 특히 광산에서 쓰이는 구조장치 E21F 11/00)
A62B-1/08	.. 윈치 또는 풀리에 제동기구가 있는 것

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