초록 ▼

본 발명은 자가 프라이머 구조를 가진 헤어핀 프로브를 활용한 등온 증폭기술 (Self-priming hairpin-utilized isothermal amplification, SPHIA)을 이용하여 표적핵산을 검출하는 방법에 관한 것으로, 본 발명의 SPHIA 기술을 이용한 표적핵산 검출방법은 기존의 EXPAR 기술의 증폭방법이 표적핵산으로 길이가 짧고 3'-OH 말단을 갖는 표적핵산만을 검출가능했던 단점을 해결하여, 증폭 산물의 양성 피드백 시스템을 통해 500mer 이상의 길이를 가지는 표적핵산도 높은 검출효율로 검출할 수 있

본 발명은 자가 프라이머 구조를 가진 헤어핀 프로브를 활용한 등온 증폭기술 (Self-priming hairpin-utilized isothermal amplification, SPHIA)을 이용하여 표적핵산을 검출하는 방법에 관한 것으로, 본 발명의 SPHIA 기술을 이용한 표적핵산 검출방법은 기존의 EXPAR 기술의 증폭방법이 표적핵산으로 길이가 짧고 3'-OH 말단을 갖는 표적핵산만을 검출가능했던 단점을 해결하여, 증폭 산물의 양성 피드백 시스템을 통해 500mer 이상의 길이를 가지는 표적핵산도 높은 검출효율로 검출할 수 있는 장점이 있다.

대표청구항 ▼

다음 구성요소를 포함하고, 표적핵산 검출을 위한 자가 프라이머 구조를 가지는 제1 헤어핀 프로브:(i) 표적핵산과 상보적인 서열을 포함하는 헤어핀 프로브의 스템(stem)에 위치하는 X 부위;(ii) 상기 X 부위와 연결되고, 표적핵산과 상보적인 서열을 가지고 헤어핀 프로브의 루프(loop)에 위치하는 L 부위;(iii) 상기 L 부위에 연결되고, 상기 X 부위의 3' 말단쪽 일부와 상보적인 서열로 구성되며 헤어핀 프로브의 스템을 형성하는 헤어핀의 자가 헤어핀 프라이머의 a 부위;(iv) 상기 자가 헤어핀 프라이머의 a 부위와 연결

다음 구성요소를 포함하고, 표적핵산 검출을 위한 자가 프라이머 구조를 가지는 제1 헤어핀 프로브:(i) 표적핵산과 상보적인 서열을 포함하는 헤어핀 프로브의 스템(stem)에 위치하는 X 부위;(ii) 상기 X 부위와 연결되고, 표적핵산과 상보적인 서열을 가지고 헤어핀 프로브의 루프(loop)에 위치하는 L 부위;(iii) 상기 L 부위에 연결되고, 상기 X 부위의 3' 말단쪽 일부와 상보적인 서열로 구성되며 헤어핀 프로브의 스템을 형성하는 헤어핀의 자가 헤어핀 프라이머의 a 부위;(iv) 상기 자가 헤어핀 프라이머의 a 부위와 연결되고 상기 X 부위의 5' 말단쪽 일부와 상보적인 서열로 구성되며 헤어핀 프로브의 스템을 형성하는 자가 헤어핀 프라이머의 b 부위; (v) 헤어핀 프로브의 3' 말단에 위치하고, 자가 헤어핀 프라이머의 b 부위에 연결되고, 상기 자가 헤어핀 프라이머의 a 부위와 상보적인 서열을 포함하는 자가 헤어핀 프라이머의 a' 부위; 및(vi) 상기 X 부위와 연결되고, 절단효소 인식서열을 가지는 N 부위; 및(vii) 헤어핀 브로브의 5' 말단에 위치하고, 상기 절단효소 인식 서열을 가지는 N 부위와 연결되고, 트리거와 상보적인 서열을 포함하는 T' 부위.여기서, 상기 a부위와 b 부위가 연결된 서열은 상기 X 부위 전체와 상보적 서열인 것을 특징으로 함.