초록 ▼

본 발명은 NK 세포의 배양방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 1) 혈액에서 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)의면역세포의 펠렛(pellet)을 분리하는 단계; 2) 상기 PBMC를 항CD16 항체로 코팅된 배양기에서 RPMI 배양배지에서 배양하는 단계; 3) 상기 PBMC를 계대배양하는 단계; 및 4) 상기 PBMC를 IL-2, IL-15 및 IL-2+IL-15으로 이루어진 사이토카인 군으로부터 선택된 사이토카인을 처리함으로써 NK 세포를 활성화시키는 단계;를 포함하는 NK 세포의 배양방법에

본 발명은 NK 세포의 배양방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 1) 혈액에서 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)의면역세포의 펠렛(pellet)을 분리하는 단계; 2) 상기 PBMC를 항CD16 항체로 코팅된 배양기에서 RPMI 배양배지에서 배양하는 단계; 3) 상기 PBMC를 계대배양하는 단계; 및 4) 상기 PBMC를 IL-2, IL-15 및 IL-2+IL-15으로 이루어진 사이토카인 군으로부터 선택된 사이토카인을 처리함으로써 NK 세포를 활성화시키는 단계;를 포함하는 NK 세포의 배양방법에 관한 것이다. 본 발명은 다양한 사이토카인 중 IL-2, IL-15를 이용하여 NK 세포에 처리하였을 때 효과적으로 세포를 활성화시킬 수 있는 최적의 조합으로서, IL-2+IL-15로 처리시에 NK 세포를 대량 배양이 가능하며, 이를 이용하는 경우, 암세포의 세포사멸 또는 살상능이 촉진될 수 있어, 암의 예방 또는 치료에 효과적인 면역세포 치료제로 사용할 수 있다.

대표청구항 ▼

1) 피콜(ficoll)과 원심분리를 사용하여 혈액으로부터 면역세포를 함유한 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)의 펠렛(pellet)을 분리하고, 상기 펠렛에 RBC 분해용 완충액(lysis buffer)을 처리함으로써 적혈구를 제거하는 단계; 2) 상기 분리된 PBMC 세포수가 3 ×107 이하일 경우 항CD16항체로 코팅된 T25 플라스크에서, 세포수가 3 ×107 이상일 경우 항CD16항체로 코팅된 T75 플라스크에서 RPMI 8ml, 혈장 2ml, IL-2 20ng/ml, IL-15 50n

1) 피콜(ficoll)과 원심분리를 사용하여 혈액으로부터 면역세포를 함유한 PBMC(peripheral blood mononuclear cell)의 펠렛(pellet)을 분리하고, 상기 펠렛에 RBC 분해용 완충액(lysis buffer)을 처리함으로써 적혈구를 제거하는 단계; 2) 상기 분리된 PBMC 세포수가 3 ×107 이하일 경우 항CD16항체로 코팅된 T25 플라스크에서, 세포수가 3 ×107 이상일 경우 항CD16항체로 코팅된 T75 플라스크에서 RPMI 8ml, 혈장 2ml, IL-2 20ng/ml, IL-15 50ng/ml, 항CD56항체 5ng/ml, 항NKp46항체 5ng/ml 및 항NKp30항체 5ng/ml을 넣고 상기 PBMC 펠렛을 RPMI 10ml로 부유하여 추가로 넣어준 후, 37℃, 5% CO2 배양기에서 3-4일 동안 배양하는 단계; 3) 상기 2) 단계의 세포 배양 현탁액 20ml, RPMI 72ml, 알부민 8ml, IL-2 20ng/ml, IL-15 50ng/ml, 항NKp30항체 5ng/ml, 항NKp46항체 5ng/ml 및 항CD56항체 5ng/ml을 넣고 37℃, 5% CO2 배양기에서 3~5일 동안 1차 계대배양과 1차 계대배양 현탁액 50ml, RPMI 180ml, 알부민 20ml, IL-2 20ng/ml 및 IL-15 50ng/ml을 넣고 37℃, 5% CO2 배양기에서 5~7일 동안 2차 계대배양하는 단계; 및 4) 상기 계대배양된 PBMC를 RPMI 및 알부민, 항NKp30항체, 항NKp46항체 및 항CD56항체 첨가를 기본으로 한 배지조성물에 IL-2 20ng/ml과 IL-15 50ng/ml 사이토카인을 처리함으로써 NK 세포를 활성화시키는 단계;를 포함하는 NK 세포의 배양방법.