초록

본 발명은 어류의 정액 및 정소에서의 PDRN 추출하는 방법으로 우리나라에서 일반적으로 양식되고 있는 넙치 정소 조직을 분리하여 고순도의 PDRN을 추출하는 방법으로 1) 넙치 정소 조직으로부터 DNA를 추출하는 단계; 2) Endotoxin을 제거하는 단계; 3) 투석을 통해 PDRN을 제외한 기타 물질을 제거하는 단계; 4) PDRN을 저분자화하는 단계;를 포함하여 이루어진 것을 특징으로 하는 넙치 정소 조직으로부터 고순도의 PDRN을 추출하는 방법을 제공함으로서 경제적으로 PDRN을 생산할 수 있다.

대표청구항 ▼

1) 넙치 정소 조직에 cell lysis solution를 첨가하여 조직을 분쇄한 뒤 Rnase A를 첨가하여 반응시키는 단계; 상기 혼합액에 Protein precipitation solution (high salt solution) 을 첨가 및 교반하여 반응시킨 뒤 원심분리하여 상층액을 추출하는 단계;상기 상층액에 3M sodium acetate을 첨가하여 교반한 혼합액에 혼합액 동량의 Phenol : Chloroform : Isoamyl alcohol (25:24:1)을 첨가 및 교반한 후, 원심분리하여 상층액을 추출하고,상

1) 넙치 정소 조직에 cell lysis solution를 첨가하여 조직을 분쇄한 뒤 Rnase A를 첨가하여 반응시키는 단계; 상기 혼합액에 Protein precipitation solution (high salt solution) 을 첨가 및 교반하여 반응시킨 뒤 원심분리하여 상층액을 추출하는 단계;상기 상층액에 3M sodium acetate을 첨가하여 교반한 혼합액에 혼합액 동량의 Phenol : Chloroform : Isoamyl alcohol (25:24:1)을 첨가 및 교반한 후, 원심분리하여 상층액을 추출하고,상기 추출된 상층액에 동량의 Ethanol 첨가하여 5분 이상 반응시켜 원심분리한 후, 상층액을 제거하고 DNA 펠렛을 확인하고, 70~75% Ethanol을 첨가하여 원심분리하여, 상층액을 제거하고, DNA 펠렛을 건조한 후 멸균 증류수로 용해시키는 단계로 이루어지는 DNA를 추출하는 단계;2) 상기 추출된 DNA에 3M sodium acetate를 첨가하여 얼음물에서 반응시키고 endotoxin remova 용액을 첨가 후 교반하여 반응시킨 후 원심분리하여 Upper phase 용액을 추출하는 Endotoxin을 제거하는 단계;3) Endotoxin을 제거하는 단계에서 얻어진 샘플을 주사기를 이용하여 membrane에 주입한 후 버퍼(H2O)에 반응시키는 투석을 통해 PDRN을 제외한 기타 물질을 제거하는 단계 및 PDRN을 저분자화시킴으로써 5kda 이하의 PDRN을 수득하는 단계;를 포함하여 이루어진 것을 특징으로 하는 넙치 정소 조직 유래 고순도 PDRN 추출방법