본 출원은 만능 줄기 세포로부터 인공 골격근 조직을 생성하는 방법을 설명한다. 만능 줄기 세포로부터 골격 근모세포, 골격 근관 및 위성 세포를 생성하는 방법이 또한 개시된다. 설명된 방법 동안 만능 줄기 세포가 골격 근관 및 위성 세포로 분화 및 성숙된다. 본 출원은 또한 위성 세포가 있는 다핵 골격근 섬유를 가진 인공 골격근 조직을 설명한다. 또한, 본 발명은 개시된 방법에 의해 생성될 수 있는, 중배엽적으로 분화된 골격 근모세포 전구 세포, 근원적으로 특이화된 골격 근모세포 전구 세포, 골격 근모세포, 위성 세포 및 골격 근관에
본 출원은 만능 줄기 세포로부터 인공 골격근 조직을 생성하는 방법을 설명한다. 만능 줄기 세포로부터 골격 근모세포, 골격 근관 및 위성 세포를 생성하는 방법이 또한 개시된다. 설명된 방법 동안 만능 줄기 세포가 골격 근관 및 위성 세포로 분화 및 성숙된다. 본 출원은 또한 위성 세포가 있는 다핵 골격근 섬유를 가진 인공 골격근 조직을 설명한다. 또한, 본 발명은 개시된 방법에 의해 생성될 수 있는, 중배엽적으로 분화된 골격 근모세포 전구 세포, 근원적으로 특이화된 골격 근모세포 전구 세포, 골격 근모세포, 위성 세포 및 골격 근관에 관한 것이다. 본 출원은 또한 약물 시험 또는 의약에서의 골격근 조직 또는 개시된 세포의 용도를 기술한다. 마지막으로, 본 출원은 골격근 조직 또는 개시된 세포가 사용되는 시험관내 방법에 관한 것이다.
대표청구항▼
만능 줄기 세포로부터 조작된 골격근 조직을 생성하는 방법으로서,(i) 유효량의 (a) FGF2, (b) GSK3 억제제, (c) SMAD 억제제, 및 (d) 트랜스페린, 인슐린, 프로게스테론, 퓨트레신, 및 셀레늄 또는 이의 생체이용가능한 염을 포함하는 무혈청 첨가제를 포함하는 기본 배지에서 만능 줄기 세포를 배양하여 만능 줄기 세포의 중배엽 분화를 유도하는 단계;(ii) 유효량의 (a) 감마-세크레타제/NOTCH 억제제, (b) FGF2, 및 (c) 단계 (i)에서와 같은 무혈청 첨가제를 포함하는 기본 배지에서 단계 (i)에서 얻
만능 줄기 세포로부터 조작된 골격근 조직을 생성하는 방법으로서,(i) 유효량의 (a) FGF2, (b) GSK3 억제제, (c) SMAD 억제제, 및 (d) 트랜스페린, 인슐린, 프로게스테론, 퓨트레신, 및 셀레늄 또는 이의 생체이용가능한 염을 포함하는 무혈청 첨가제를 포함하는 기본 배지에서 만능 줄기 세포를 배양하여 만능 줄기 세포의 중배엽 분화를 유도하는 단계;(ii) 유효량의 (a) 감마-세크레타제/NOTCH 억제제, (b) FGF2, 및 (c) 단계 (i)에서와 같은 무혈청 첨가제를 포함하는 기본 배지에서 단계 (i)에서 얻은 세포를 배양하고, 이어 유효량의 (d) HGF를 첨가하여 배지에서 배양을 계속한 후, 유효량의 (a) 감마 세크레타제/NOTCH 억제제, (b) HGF, (c) (i)에서와 같은 무혈청 첨가제, 및 (d) 녹아웃 혈청 대체물(KSR)을 포함하는 기본 배지에서 세포를 배양하여 근원성 특이성(myogenic specification)을 유도하는 단계;(iii) 단계 (ii)에서 얻은 세포를 유효량의 (a) HGF, (b) (i)에서와 같은 무혈청 첨가제 및 (c) 녹아웃 혈청 대체물(KSR)를 포함하는 기본 배지에서 배양하여 세포를 골격 근모세포 및 위성 세포로 확장 및 성숙시키는 단계;(iv) 세포외 기질에 분산된 단계 (iii)에서 얻은 세포를 유효량의 (a) 단계 (i)에서와 같은 무혈청 첨가제 및 (b) 알부민, 트랜스페린, 에탄올아민, 셀레늄 또는 이의 생체이용가능한 염, L-카르니틴, 지방산 첨가제 및 트리요오도-L-티로닌(T3)을 포함하는 추가 무혈청 첨가제를 포함하는 기본 배지에서 기계적 자극하에 배양하여 세포를 골격 근관 및 위성 세포로 성숙시켜 조작된 골격근 조직을 생성하는 단계를 포함하는 방법.
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