[특허]In vitro scanning saturation mutagenesis of proteins

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IPC분류정보
국가/구분	United States(US) Patent 등록
국제특허분류(IPC7판)	C12Q-001/68
출원번호	US-0070408 (1998-04-30)
발명자 / 주소	Iverson Brent L. Georgiou George Burks Elizabeth A.
출원인 / 주소	Board of Regents, The Universiry of Texas System
대리인 / 주소	Fulbright & Jaworski LLP
인용정보	피인용 횟수 : 4 인용 특허 : 15

초록 ▼

The present invention combines PCR.TM. mutagenesis with in vitro transcription/translation and ELISA for the rapid generation and characterization of protein mutants. The PCR.TM. products are used directly as the template for the in vitro transcription/translation reactions and because no cloning steps are required, the in vitro saturation mutagenesis of one residue can be completed in duplicate within a week by a single investigator. This high throughput enables the saturation mutagenesis of numerous residues of interest, a process that can be described as in vitro scanning saturation mutagenesis. Compositions and methods of use of such a process are described herein.

대표청구항 ▼

[ What is claimed:] [1.] A method of identifying an antibody variant comprising the steps of:a) providing a DNA segment encoding a antibody, or antigen-binding fragment thereof;b) providing a set of primers that encode all nineteen naturally-occurring amino acid variants at a single residue of said antibody or antigen-binding fragment thereof;c) performing PCR reactions on said DNA segment, using said set of primers, to generate a set of variant DNA segments encoding nineteen amino acid substitution variants at said single residue of said antibody or antigen binding fragment thereof;d) expressing each of said substitution variants using in vitro transcription/translation;e) identifying said antibody variant by increased antigen binding specificity.

이 특허에 인용된 특허 (15) 인용/피인용 타임라인 분석

Ladner Robert C. (Ijamsville MD) Guterman Sonia K. (Belmont MA) Roberts Bruce L. (Milford MA) Markland William (Milford MA) Ley Arthur C. (Newton MA) Kent Rachel B. (Boxborough MA), Directed evolution of novel binding proteins.
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Georgiou George (11501 Juniper Ridge Dr. Austin TX 78759) Francisco Joseph A. (Austin TX) Earhart Charles F. (Austin TX), Expression of proteins on bacterial surface.
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Sirotkin Karl M. (Knoxville TN), Full spectrum mutagenesis.
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Taichman Russell S. ; Emerson Stephen G., Hematopoietic cells: compositions and methods.
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Kurooka Shigeru (Fujiidera JPX) Sunahara Noriyuki (Kyoto JPX), Insolubilized antibody.
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Kondo Koichi (Osaka JPX) Iwasa Susumu (Tsuzuki JPX) Yoshida Isamu (Hirakata JPX), Method for enzyme immunoassay and production of antibody.
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Estell David A. (Mountain View CA) Wells James A. (San Mateo CA) Bott Richard R. (Burlingame CA), Method for preparing modified subtilisins.
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Kauffman Stuart Alan ; Ballivet Marc,CHX, Method of identifying a stochastically-generated peptide, polypeptide, or protein having ligand binding property and co.
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Estell David A. (Mountain View CA) Wells James A. (San Mateo CA), Modified enzymes and methods for making same.
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Estell David A. (San Mateo CA) Wells James A. (Burlingame CA) Bott Richard R. (Burlingame CA), Modified enzymes and methods for making same.
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Rich Alexander (2 Walnut Ave. Cambridge MA 02140) Nordheim Alfred E. (70 Revere St. Boston MA 02114), Process for altering and regulating gene expression.
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Kauffman Stuart Alan ; Ballivet Marc,CHX, Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique.
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Kunkel Thomas A. (Durham NC), Process for site specific mutagenesis without phenotypic selection.
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Miles Laughton E. M. (Stanford CA), Universal reagent 2-site immunoradiometric assay using labelled anti (IgG).
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Inouye Satoshi (Yokohamashi JPX) Kurose Kouichi (Munakatashi JPX) Sakaki Yoshiyuki (Fukuokashi JPX), Variant aequorin genes and process for producing variant aequorin proteins.
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이 특허를 인용한 특허 (4) 인용/피인용 타임라인 분석

Bass,Steven H.; Davis,S. Christopher; Patten,Phillip A.; Tobin,Matthew; Minshull,Jeremy; Welch,Mark; Gustafsson,Claes; Carr,Brian; Jenne,Stephane; Raillard,Sun Ai; Crameri,Andreas; Stemmer,Willem P. C.; Emig,Robin; Longchamp,Pascal; Goldman,Stanley; Giver,Lorraine J.; Affholter,Joseph A., Integrated system for diversity generation and screening.
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Bass, Steven H.; Davis, Simon Christopher; Patten, Phillip A.; Tobin, Matthew; Minshull, Jeremy S.; Welch, Mark; Gustafsson, Claus; Carr, Brian; Jenne, Stephan J.; Raillard, Sun Ai; Crameri, Andreas; Stemmer, Willem P. C.; Emig, Robin; Longchamp, Pascal; Goldman, Stanley; Giver, Lorraine J.; Affholter, Joseph A., Integrated systems and methods for diversity generation and screening.
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Yamakawa, Mineo; Kosmoski, Joseph V.; Little, Deane C., Methods for isolating a peptide methods for identifying a peptide.
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Koide, Shohei; Koide, Akiko; Huang, Jin, Molecular affinity clamp technology and uses thereof.
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A	생활필수품
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