초록 ▼

본 연구과제에 참여한 세부과제는 항혈전성 재조합 히루딘의 생산 및 분리정제 기술개발(연구책임자: 이상기, 생명공학연구소, 참여기업 : 동국제약), 항염증성 재조합 리포코틴의 생산 및 분리정제 기술 개발(연구책임자: 정봉현, 생명공학연구소, 참여기업 : 양지화학), 순환기질환 진단용 재조합항체 단백질의 생산 및 분리정제 기술개발(연구책임자 : 곽주원, 생명공학연구소, 참여기업 : 삼일제약), 재조합 인슐린 유사성장인자-I의 생산 및 분리정제 기술개발(연구책임자 : 이영익, 생명공학연구소, 참여기업 : 동아제약) 및 메타놀 자화효모를

본 연구과제에 참여한 세부과제는 항혈전성 재조합 히루딘의 생산 및 분리정제 기술개발(연구책임자: 이상기, 생명공학연구소, 참여기업 : 동국제약), 항염증성 재조합 리포코틴의 생산 및 분리정제 기술 개발(연구책임자: 정봉현, 생명공학연구소, 참여기업 : 양지화학), 순환기질환 진단용 재조합항체 단백질의 생산 및 분리정제 기술개발(연구책임자 : 곽주원, 생명공학연구소, 참여기업 : 삼일제약), 재조합 인슐린 유사성장인자-I의 생산 및 분리정제 기술개발(연구책임자 : 이영익, 생명공학연구소, 참여기업 : 동아제약) 및 메타놀 자화효모를 이용한 재조합 단백질의 최적 발현시스템 개발(연구책임자 : 이상기, 생명공학연구소, 참여기업 : 녹십자)의 5개 과제이다. 연구개발의 3차년도인 금년에는 재조합 단백질의 산업적 생산을 위한 재조합 균주 배양 및 단백질 분리정제 분야의 기반 기술 확보를 연구개발의 주요내용 및 범위로 설정하였다.

Abstract ▼

The INU genes of Kluyverornyces marxianus encode inulinases which are readily secreted from Saccharornyces cerevisiae into the culture medium. To evaluate the utility of the INU signal peptides for the secretion of heterologous proteins from S, cerevisiae, a variety of expression and secretion vecto

The INU genes of Kluyverornyces marxianus encode inulinases which are readily secreted from Saccharornyces cerevisiae into the culture medium. To evaluate the utility of the INU signal peptides for the secretion of heterologous proteins from S, cerevisiae, a variety of expression and secretion vectors were constructed with GAL10 promoter and GAL7 terminator. TIE coding sequence for human lipocortin-1 was inserted in-frame with the INU signal sequences, and then the secretion efficiency and localization of LC1 were investigated in more detail and compared with those when being expressed by the vector with the MF a1 leader peptide. The vector system with INU signal peptide:s secreted ca. 95% of the total lipocortin-I expressed into the extracellular medium, while the MFal leader-peptide containing vector resulted in very low secretion efficiency below 10%.
To overproduce lipocortin-I as a secretory product, the YaGILP-10 cell was cultivated by the fed-batch technique in which the cell growth and gene expression phases were separated. For cell growth, glucose vias initially fed to the fermentor, and then the carbon mixture of glucose and galactose was fed to achieve gene expression inparallel with further cell growth. A. high cell density of 100 g DCWL was obtained at the end of culture, and th'e plasmid stability was stably maintained even in the prolonged culture period under the expression of lipocortin-I gene. The amount of lipocortin-I secreted into the culture medium reached about 2.5 g/L which accounted for ca. 80% of the total extracellular proteins.

목차 Contents

• 제 1 장 서 론...29
• 제 2 장 과제구성...33
• 제 3 장 세부과제별 연구결과...35
• 제 1 절 향혈전성 재조합 히루딘의 생산 및 분리 정제 기술개발...35
• 제 2 절 향염증성 재조합 리포코틴의 생산 및 분리 정제 기술개발...43
• 제 3 절 순환기질환 진단용 재조합항체 단백질의 생산 및 분리정제 기술 개발...49
• 제 4 절 재조합 인슐린 유사성장인자-Ⅰ의 생산 및 분리정제 기술 개발...53
• 제 5절 메타놀 자화효모를 이용한 재조합 단백질의 최적 발현 시스템 개발...56
• 제 4 장 결론...63
• 제 5 장 향후 연구계획...67