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탄수화물 전이효소의 생화학적 연구
Biochemical Study on Carbohydrate Transferases 원문보기

보고서 정보
주관연구기관 한국생명공학연구원
Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology
연구책임자 이대실
참여연구자 박병철 , 고석훈 , 김중수 , 고정현
발행국가대한민국
언어 한국어
발행년월1995-00
주관부처 과학기술부
사업 관리 기관 한국생명공학연구원
Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology
등록번호 TRKO200200007856
DB 구축일자 2013-04-18

초록 ▼

대장균의 N-acetylglucosaminytransferase gene을 확보함에 따라 다른 유용한 균주에서 N-glucosaminyltransferase gene 및 이 gene의 product를 연구하기 위한 기초를 마련하였다. 또한 Thermus caldophilus GK24로부터 glucosytransferase의 존재를 확인 하였으며, 이와 아울러 당 전이효소의 활성을 정밀하게 측정할 수 있는 Assay방법이 구축 됨으로서 다당류합성에 관여하는 효소를 확보하기 위한 기초가 마련되었다. 그리고 ADP-Glucose py

목차 Contents

  • 제1장 서론...8
  • 가) N-acetylglucosaminyltransferase...8
  • 나) Maltose;ADP-Glucose Glucosyltransferase...8
  • 다) ADP-Glucose pyrophosphorylase...8
  • 제2장 실험 재료 기기 및 방법...10
  • 제1절 실험 기기 및 재료...10
  • 1. 균주 및 배양 조건...10
  • 2. 실험 기기...10
  • 3. 각종 시약 및 생화합물...10
  • 제2절 실험 방법...12
  • 가) N-acetylglucosaminyltransferase...12
  • 1. Chromosomal DNA isolation...12
  • 2. PCR...12
  • 3. DNA isolation in Low melting agarose...12
  • 4. PCR product의 Kination...13
  • 5. Cloning Vector preparation...13
  • 가. Cell culture and pUC18 plasmid isolation...13
  • 나. Sma I restriction Enzyme treatment...14
  • 다. Bacterial alkaline phosphatase treatment...14
  • 6. Ligation...15
  • 7. Transformation...15
  • 8. Dideoxy termination method에 의한 sequence 확인...15
  • 가. Plasmid DNA의 알칼리 변성...15
  • 나. Termination 반응...16
  • 다. 전기영동...17
  • 나) Maltose;AD-Glucose Glucosyltransferase...17
  • 1. Glucosyltransferase 반응 산물 분석...17
  • 2. (NH₄)₂SO₄분획...17
  • 3. 효소 단백질의 정제...18
  • 다) ADP-Glucose pyrophosphorylase...18
  • 1. T. Caldophilus GK24로 부터 AGPase의 정제...18
  • 2. 분자량의 결정...18
  • 3. N-말단과 내부 아미노산의 염기서열 결정...19
  • 제3장 연구 결과 및 고찰...20
  • 제1절 N-acetylglucosaminyltransferase...20
  • 1. Primer design for cloning of N-acetylglucosaminyltransferase gene from E. coli...20
  • 2. PCR and cloning...20
  • 제2절 Glucosyltransferase...23
  • 1. Glucosyltransferase 활성 확인 방법 정립...23
  • 2. (NH₄)₂SO₄분획에서 Glucosyltransferase activity 확인...23
  • 3. 효소 단백질의 정제...25
  • 제3절 ADP-glucose pyrophosphorylase...26
  • 1. 내열성 AGPase의 정제...26
  • 2. N-말단과 내부의 아미노산 서열의 결정...29
  • 3. oligonucleotide의 합성과 PCR...30
  • 제4절 결론...32
  • 제4장 참고문헌...33

연구자의 다른 보고서 :

참고문헌 (25)

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