초록 ▼

▷ 글루코콜티코아드 및 레티노이드와 같은 그테로이드 호르몬은 염증성 질환의 치료에 광범위하게 쓰이고 있으며 매우 강력한 치료효과가 있지만 많은 부작용을 나타낸다.
부작용이 적은 스테로이드계 신물질을 개발하기 위하여는 염증의 신호전달 기작에 대한 이해가 필수적이다.
부작용이 적은 스테로이드계 신물질을 개발하기 위하여는 염증의 신호전달 기작에 대한 이해가 필수적이다.
염증의 신호전달의 조절에 관여하는 신규물질을 탐색하고 그 작용기작을 밝혀서 새로운 소염제 개발에 이용하고자 하는 노력의 일환

▷ 글루코콜티코아드 및 레티노이드와 같은 그테로이드 호르몬은 염증성 질환의 치료에 광범위하게 쓰이고 있으며 매우 강력한 치료효과가 있지만 많은 부작용을 나타낸다.
부작용이 적은 스테로이드계 신물질을 개발하기 위하여는 염증의 신호전달 기작에 대한 이해가 필수적이다.
부작용이 적은 스테로이드계 신물질을 개발하기 위하여는 염증의 신호전달 기작에 대한 이해가 필수적이다.
염증의 신호전달의 조절에 관여하는 신규물질을 탐색하고 그 작용기작을 밝혀서 새로운 소염제 개발에 이용하고자 하는 노력의 일환으로 본 연구를 수행하였다. 특히
(1) 염증의 신호전달에서 리포코틴-1의 역할 연구,
(2) 리포코틴-1 결합단백질 탐색 및 기전 연구,
(3) IkBβ결합단백질 탐색 및 기전 연구,
(4) 소의 뇌조직으로부터 PLA2 활성을 증가시키는 활성화 인자의 정제 및 기전 연구,
(5) 소의 뇌조직으로 부터 Sphingomyelinase 정제 및 특성 규명 등을 목표로 하여 연구를 수행하였다.
본 연구결과 염증의 신호전달에 관여하는 여러가지 신물질이 동정, 정제, 클로닝되었다. 이 물질들은 신약 개발에 있어 새로운 검색계로 이용될 수 있다.
이는 중간 기술의 도입이 아니라 순수 원천기술이라는 의의가 있으며 이를 통하여 획기적인 신약개발 가능성이 있다.
이들 물질은 그 작용기작에 비추어 볼 때 새로운 소염제, 항암제, 면역조절제 등의 lead 역할을 할 수 있을 것이다.

목차 Contents

• 제 1 장 서 론...20
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...22
• 제 3 장 연구개발 수행 내용 및 결과...28
• 제 1 절 리포코틴-1 생리활성 연구...28
• 1. 개요...28
• 2. 방법...28
• 가. 백혈구의 리포코틴-1 결합 부위...28
• 나. 덱사메타손의 NO 생산억제 효과에서 리포코틴-1의 역할...29
• 다. 인간 신장세포 배양시 리포코틴-1의 역할...30
• 라. 포스포리파제 A2를 통한 신호전달에서 리포코틴-1의 역할...30
• 마. 리포코틴-1 chaperone 기능에 대한 연구...31
• 3. 결과...32
• 가. 백혈구의 리포코틴-1 결합 부위...32
• 나. 덱사메타손의 NO 생산억제 효과에서 리포코틴-1의 역할...32
• 다. 인간 신장세포 배양시 리포코틴-1의 역할...33
• 라. 포스포리파제 A2를 통한 신호전달에서 리포코틴-1의 역할...33
• 마. 리포코틴-1의 chaperone 기능에 대한 연구...34
• 제 2 절 리포코틴-1의 수용체를 통한 신호전달 물질 탐색...47
• 1. 개요...47
• 2. 방법...47
• 3. 결과...48
• 제 3 절 리포코틴-1 결합단백질 탐색 및 작용 연구...50
• 1. 개요...50
• 2. 방법...50
• 가. 리포코틴-1 포함 plasmid 조제 및 yeast transformation...50
• 나. 대량의 yeast transformation 조건검토...51
• 다. yeast two hybrid assay 를 위한 cDNA library 구축...52
• 라. yeast two hybrid system 을 이용한 screening...52
• 마. 후보 단백질 유전자 염기배열 결정 및 gene bank 조사...54
• 바. 후보 단백질 전체 유전자 찾기 및 염기배열 결정...55
• 사. 얻어진 후보 단백질과 리포코틴-1의 상호작용 부위 조사...55
• 아. In vitro에서 단백질-단백질 상호작용 조사...57
• 자. 얻어진 새로운 단백질 유전자의 Northern Blot Analysis...59
• 차. 얻어진 새로운 단백질의 기능 조사...59
• 3. 결과...59
• 가. 리포코틴-1 포함 plasmid 조제 및 yeast transformation...59
• 나. yeast two hybrid system 을 이용한 screening...60
• 다. 후보 단백질 유전자 염기배열 결정 및 gene bank 조사...60
• 라. 얻어진 후보 단백질과 리포코틴-1의 상호작용 부위 조사...60
• 마. In vitro에서 단백질-단백질 상호작용 조사...61
• 바. 새로운 단백질 전체 유전자의 및 Northern Blot Analysis...62
• 사. 새로운 단백질의 기능 조사...62
• 제 4 절 IkB 결합 단백질 탐색 및 특성 연구...79
• 1. 개요...79
• 2. 방법...79
• 가. Yeast two hybrid system...79
• 나. Transient transfection assay...79
• 다. Yeast transcreiption assays...79
• 라. GST-pull down assay...80
• 마. Transfection assay...80
• 바. Yeast에서 NF$\kappa$B 및 retinoid의 전사조절 시스템 확립...80
• 사. 동물세포에서 NF$\kappa$B 및 retinoid의 전사조절 시스템 확립...81
• 3. 결과...82
• 가. i$\kappa$B$\beta$ 결합 단백질 클로닝...82
• 나. $\kappa$ B-Ras의 특성연구...82
• 다. RXR과 I $\kappa$ B $\beta$의 상호작용...91
• 라. RXR과 Bc1-3...94
• 마. I $\kappa$ B $\beta$와 Bc1-3의 receptor-interaction domain mapping...94
• 바. RXR 결합에 있어서의 I $\kappa$ B $\beta$와 Bc1-3의 차이점...94
• 사. RNA Pol II Complex와의 결합에서 I $\kappa$ B $\beta$와 Bc1-3의 차이점...95
• 아. Bc13와 SRC1의 상승작용에 의한 RXR의 활성화...95
• 제 5 절 $cPLA_2$의 활성화 인자 발견 및 특성규명...100
• 1. 개요...100
• 2. 방법...100
• 가. 재료...100
• 나. $PLA_2$ 활성의 측정...100
• 다. 돼지 비장으로부터 세포질 $PLA_2$($cPLA_2$)의 정제...101
• 라. $cPLA_2$-활성화 단백질 (cPLA) 의 정제...101
• 마. 구아닌 누클레오티드 존재 시의 cPLAP 활성의 측정...102
• 3. 결과...102
• 가. $cPLA_2$-활성화 단백질 (cPLAP)의 검출...102
• 나. $cPLA_2$-활성화 단백변성시험...102
• 다. $cPLA_2$-활성화 단백질의 특성 규명...103
• 제 4 장 연구개발목표 달성도 및 대외 기여도...117
• 제 5 장 연구개박결과의 활용계획...120
• 제 6 장 참고문헌...122
• 제 7 장 소의 뇌조직으로부터 중성형 스핑고미엘리나아제의 분리정제 및 특성 규명...127