초록 ▼

포유동물의 난자성숙과정에서 배란전 여포(preovulatory follicle)에서 난구세포-난자복합체를 LH(luteinizing hormone) surge 전에 여포로부터 분리하여 in vitro system에서 배양하면 감수분열 I 의 전기중의 복사기(diplotene stage)에 머물고 있는 난자가 감수분열을 재개 (resumption)하여 난자의 성숙이 시작되어 수정전 상태인 김수분열 II 의 중기 (Metaphase II, M II)에 도달한다. 한편 in vivo system 에서는 LH surge 로 이해 난자의 성

포유동물의 난자성숙과정에서 배란전 여포(preovulatory follicle)에서 난구세포-난자복합체를 LH(luteinizing hormone) surge 전에 여포로부터 분리하여 in vitro system에서 배양하면 감수분열 I 의 전기중의 복사기(diplotene stage)에 머물고 있는 난자가 감수분열을 재개 (resumption)하여 난자의 성숙이 시작되어 수정전 상태인 김수분열 II 의 중기 (Metaphase II, M II)에 도달한다. 한편 in vivo system 에서는 LH surge 로 이해 난자의 성숙이 시작되어 역시 감수분열 I 을 끝내고 감수분열 II 의 중기에서 더 진전되지 않고 정자와의 수정을 기다리게 된다. 물론 일정 시간내에 성숙된 난자가 정자와 수정하지 않으면 이때 배란된 난자이거나 체외에서 성숙된 난자는 퇴화가 일어나 난자는 소멸하고 만다. 이런 난자의 성숙과정에서 일어나는 기작을 설명하는데 있어
1) cAMP의 난자내 증가
2) Steroid hormone의 영향
3) Ca??의 난자내의 증가현상등 여러가지를 들고 있으나 본 연구에서는 Ca??의 역할에 대한 규명을 하고저하는데 이 연구의 목적이 있다. 난자의 성숙과정에서 Ca??의 역할을 규명하는 방법으로 난자의 핵막붕괴를 억제시킨 난자에서 free Ca??의 농도를 증가 시키거나 EDTA 등으로 free-Ca??의 농도를 체외 배양액에서 줄여줌으로써 난자예외의 free-Ca??의 유입을 막아주거나 하여 난자의 성숙과 난자내의 ??Ca?? 축적을 검정하는 방법으로 Ca??의 난자성숙에의 기여도를 검정하였다.
여포배양방법으로 더 시행하였는데 배란전 여포를 분리하여 체외배양방법으로 검정하였다. 여포를 LH 홀몬 처리없이 생체외 배양하면 여포내의 난자의 성숙은 일어나지 않는다. 난자의 성숙을 유도하기 위해서는 HCG or LH 를 처리하여야만 난자성숙이 일어난다. 이와 같이 여포배양으로 난자의 Ca??의 uptake를 검정하였다.
상기의 양 system에서 난자성숙과 난자에의 ??Ca?? uptake은 항상 비례적인 상관관계를 나타내고 있었다. 그러나 난자성숙에 있어 자동적인 성숙이든, HCG 투여에 의한 성숙이든 난자의 세포막에서의 변화로 인한 ??Ca??의 uptake가 일어나는 것인지 아니면 난자 세포막에서의 Ca??의 수용체(receptor)의 증가에 의한 것인지 또는 Ca-channel이 어떤 기작에 의해서 open 됨으로서 Ca??uptake가 일어나는 지는 현재로서는 명확히 밝혀지지 않고 있다. HCG 처리나 LH surge로 세포막의 투과력이 증진되는 기작에 대해서는 좀 더 깊은 연구와 계속적인 추구가 있어야겠다.

Abstract ▼

Spontaneous meiotic resumption of the oocytes take place if the oocytes are released from the follicles of most mammals before LH surge, reach to the metaphase of 2nd meiosis and remain in this state for short time until fertili2ation.
On the other hand, in vivo system, oocyte maturation resump

Spontaneous meiotic resumption of the oocytes take place if the oocytes are released from the follicles of most mammals before LH surge, reach to the metaphase of 2nd meiosis and remain in this state for short time until fertili2ation.
On the other hand, in vivo system, oocyte maturation resumption begins from diplotene stage of 1st meiosis prophase after LH surge, and complete meiosis I and reach to the metaphase of 2nd meiosis and ovulations take place at the constant time depending on the species.
In order to know the mechanism of oocyte maturation in both in vitro and in vivo system, many investigators have tried many different ways and have applied various techniques.
Various hypothesis have come from such studies.
1) cAMP increase on the oocyte may block the meiotic resumption.
2) Steroid hormones (estrogen, progesterone, testosterone) may inhibit maturation.
3) The increase of free-Ca?? in the oocyte may trigger oocyte maturation.
However, any definite mechanism has not come from these studies, which explain clearly the maturation of the mammalian oocyte.
In the present study, it was attempted to explain the role of calcium in the maturation of mammalian oocyte. To explain the role of calcium, various maturation inhibitors were treated to the culture of the mouse follicular oocytes, ie, dbcAMP, progesterone and their combination, and calcium chelating agent EDTA(ethylene diamine tetracetic acid) which blocks the flow of free-Ca?? into the oocytes.
Isolated mouse follicles were also cultured in vitro system in order to investigate the role of calcium on the maturation of oocytes. Oocyte maturation of the follicle does not take place without treatment of HCG(human chorionic gonadotropin) or LH(luteinizing hormone).
In the present sutdy it was observed that oocyte maturation and Ca?? uptake are in proportion, whatever the maturation is spontaneous or induced by the HCG treatment. That is, when oocyte maturation inhibitors were treated the uptake of ??Ca?? decreases depending on the dosage treated. In the follicle, ??Ca?? uptake increase depending on the dosage of HCG. However, there is no difference between HCG 0.4 iu and 0.8 iu in the follicle culture system. This is the first time that in the present study HCG stimulate the Ca?? flow into the oocyte and this Ca?? influx may trigger the resumption of oocyte maturation. This is a very valuable observation on the present study.

목차 Contents

• 1. 연구배경...8
• 2. 재료 및 방법...9
• 2.1 난자수집...10
• 2.2 이포수집...10
• 2.3 난자 및 이포의 배양...10
• 2.4 난자의 핵상...11
• 2.5 이포배양...12
• 2.5.1 $^{45}Ca^{++}$ uptake...12
• 2.5.2 HCC 처리...12
• 3. 결과...13
• 4. 고찰...17
• 5. 도표...20