초록 ▼

말론산을 유일한 단소원으로하는 배지에서 배양한 Pscudomonas fluorescens 에서 malobyl-CoA synthetase의 두 subunit는 동시에 유도되었다. 이것은 만론산대사와 이 효소의 두 subunit들이 직접적으로 관계되어 있다는 것을 뜻한다. Kinetic experiment를 통하여 이 효소의 촉매반응은 Bi Uni Uni Bi Ping Pong Ter Ter Mechanism에 의하여 진행됨을 알수 있었다. 이 효소는 diethylpyrocnrbonate 에 의하여 환성지해를 받게됨을 알수 있었으며 i

말론산을 유일한 단소원으로하는 배지에서 배양한 Pscudomonas fluorescens 에서 malobyl-CoA synthetase의 두 subunit는 동시에 유도되었다. 이것은 만론산대사와 이 효소의 두 subunit들이 직접적으로 관계되어 있다는 것을 뜻한다. Kinetic experiment를 통하여 이 효소의 촉매반응은 Bi Uni Uni Bi Ping Pong Ter Ter Mechanism에 의하여 진행됨을 알수 있었다. 이 효소는 diethylpyrocnrbonate 에 의하여 환성지해를 받게됨을 알수 있었으며 inactivation kinetics를 통하여 활성자리의 한 histidine의 imidazole gruop이 활성에 중요한 영향을 나타낸다는 것을 확인 하였다. 또 pyridoxal-5'-phosphate에 의하여서도 활성저해를 나타내는 것을 확인하고 같은 방법으로 활성자리의 필수 amine group의 존재를 측정하였다. 말론산대사에 관련된 유전자들이 새로운 plasmid에 존재한다는 사실도 밝혔다.
말론산을 유일한 탄소원으로 하여 배양한 Acinetobacter calcoaceticus에서는 malonate decarboxylase라고하는 새로운 효소를 발견하여 이를 정재하고 그 특성을 조사하였다.
공생질소고정과정을 가지고 있는 콩과식물에 만론산이 많이 있으며 이들이 어떠한 생리적 역할을 할것이라는 보고를 토대로 하여 bacteroids 내에서의 malonate specific enzyme들을 조사하였다. 콩 뿌리혹속의 bacteroids 인 Rhizobium japonicum에는 malonyl-CoA synthetase와 malonamidase라고 명명한 새로운 효소가 있음을 발견하였다. 그리고 이 효소들은 malonamate shuttle이라고 명명한 새로운 과정을 거쳐서 고정된 공중질소를 식물체내로 이송시키는 데에 중요한 기능을 할것이라는 이론을 제시하였다. 이 효소들은 정제되고 그 특성이 조사되었다. 또한 Rhizobium mgliloti에서는 malonamidase가 Rhizobium trifolii에서는 malonyl-CoA synthetase가 발견하였다.
한국산 살모사(Agkistrodon halys)의 독으로 부터 phosphodiesterase를 순수 정제하여 그 특성을 규명하였다. monomeric glycoprotein인 효소는 exonuclease 활성은 물론 endonuclease 기능도 함께 보유하고 있는 이중성 효소임을 증명하였다. N-bromoxuccinimide와 diisopropylfluorophosphate에 의한 chemical modification. 5'-fluorosulfonylbenzoyladenosine 에 의한 affinity labeling, subtilisin에 의한 제한적 가수분해 실험을 수행하여, 두 촉매활성은 active site에서 기질의 차이만 있을 뿐 같은 mechanism 인 2 단계의 nucleotidyl-transfer 과정으로 진행됨을 알 수 있었다.
Serratia marcescens ATCC 25419 세포추출물로부터 branched chain 아미노산 생합성에 관하여는 두 종류의 Aeetolactate synthase isozyme을 확인, 정제하여 이리 효소학적 특성을 비교하였다.
Non-donaturing 전기영동시 이동도가 느린 ALS Rf 0.24 isozyme (ALSI)은 이동도가 빠른 ALS Rf 0.83 isozyme (ALS Ⅱ)과 비교해 보았을 때 Km 값, a-ketobutylate에 대한 효소환성 억제 정도에 있어서 현저한 차이점을 보았다. 또한 FID detector를 이용한 gas chromatography에 의하여 두 isozyme의 기질 특성을 조사하였을 때 ALSI은 pyruvate만 기질로 사용하고 ALSⅡ는 pyruvate와 a-ketobutylate 둘 다 기질로 이용하는 것으로 보아, ALSI은 주로 valine 및 Ieucine 생함성에 관여하고 ALSⅡ는 isoleucine 생합성에도 관여한다는 사실를 밝혔다. 한편 이라 chemical modification 방법에 의하여 ALSI의 active site 근처에는 cystein, arginine 및 tryptophane이 존재한다는 사실도 입증되었다. 이와같은 연구는 앞으로 Serratia species에서 branched chain 아미노산의 생합성 조절을 이해하는 데 도움이 될 것이며 앞으로 새로운 berbicide 개발에 있어서도 중요한 기초자료를 제공할 것으로 생각된다.
완두콩 싹으로 부터 Acetohydroxyacid Synthase을 약 2000배 정재하여, 효소학적 특성, 활성자리의 아미노산, 그리고 Val. Leu, He에 의한 Feedback 저해에 관해 조사하였다. Salfonylurea, Imidnzolinone, Pyrimidyl-oxy-benzoate 개 저해제들을 합성하여 식물 AHAS에 대한 저해활성과 지혜 양식(Mode)을 조사하였다.

Abstract ▼

In Pseudomonas fluorescens grown on malonate as a sole source of carbon, the subunits of malonyl-CoA synthetase were induced simultaniously, indicating that all subunits of the enzyme are directly related to the malonate metabolism. Enzyme kientics revealed the enzyme catalyzes the formation of malo

In Pseudomonas fluorescens grown on malonate as a sole source of carbon, the subunits of malonyl-CoA synthetase were induced simultaniously, indicating that all subunits of the enzyme are directly related to the malonate metabolism. Enzyme kientics revealed the enzyme catalyzes the formation of malonyl-CoA in Bi Uni Bi Ping Pong Mechanism. Inactivation kineties of the enzyme by diethylpyrocarbonate and by pyridoxal-5'-phosphate showed that there are essential histidine and may be lysine for its catalysis in its active site. The genes related to the metabolism of malonate were found to be located on a new plasmid. pPSF1. In Acinetobacter calcoaceticus grown on malonate as a sole carbon source, a novel malonate decarboxylase was found and characterized. In symbiotic legumes malonate was determined to be one of major free organic acids. suggesting there may be mdonate specific enzymes. We found novel malonyl-CoA synthetase and malonamidase in bacteroids of soybean nodule and proposed its role as a nitrogen transporter through, so namod, "malonamate shuttle". Malonyl-CoA synthetase and malonamidase were found to also in Rhizobium trifolii and Rhizobium meliloti. respectively.
Phosphodiesterase (EC 3.1.4.1) from the venom of Korean snake Agkistrodon halys has been purified and characterized. Phosphodiesterase is a bifunctional enzyme which retains intrinsic endonuclease funtion as well exonuclease activity in single protein molecule. Results of chemical modicication by N-bromosuccinimide and diisopropylfluorophosphate. affintiy labeling by 5'-fluorosulfonyl- benzoyladenosine and limited proteolysis by subtilisin suggest that two catalytic activities occur in the same active site by two step of nuclcotidyl-transfer reaction.
Two acetolactate synthase (ALS) isozymes from Serratia marcescens ATCC 25419 has been purifiel and partially characterized. Electrophoretically loss migrating. ALS Rf 0.24 isozyme (ALSI) has been purified to homogeneity by utilizing (NH?)?SO? fractionation. ALSⅡ Sephacel column chromatography. hydroxyapatite column chromato-graphy. and Sephadex G200 gel filtration. On the other hand. electrophoretically far migrating ALS Rf 0.83 isozyme (ALS Ⅱ)has been purified by using (NH?)?SO? fractionation, DEAE-Sephacel cohma chromatography, Sephacryl S-400 gel filtration followed by native gel elution.
Various physico-chemical and enzymatic properties of the two isozymes such as native molecular weights,subunit molecular weights. optimal temperature and pH. heat stability. Km for pyruvate have been studied. In addition. N-terminal amino acid sequences for the large and small subunits of ALSI was determined and possible amino acid residues presont near the active site was also proposed. Feedback inhibition studies indicate that ALSI is far more sensitive to inhibition by valine, isoleucine and leucine than ALSⅡ. On the other hand. ALS Ⅱ is far more sensitive to a-ketobutyrate inhibition than ALSI. Analysis of the reaction products produced during the enzymatic reaction of the two isozymes by gas chromatography indicate that ALS I utilizes only pyruvate while ALS Ⅱ utilizes both pyruvate and a-ketobutyrate. These data suggest that ALS I is involved mainly in valine and leucine biosynthesis and ALS Ⅱ is the only enzyme involved in isoleucine biosynthesis. Herbicide ingibition studies indicate that the ALS isozyme from ferratia is rather resistant to sulfonylurea and imidazolinine herbicides when compared with ALS isozymes of plants or other enterobacteria.
Acetohydroxyacid synthase from pease sprout was purified in about 2000 fold and characterized its enzymatic properties. The essential aminoacid residues in active site were identified and the feedback inhibition by Val. Leu, and lle was also monitored. The effect of sulfonylurea, imidazolinone, and pyrimidyl-oxy-benzoate on the enzyme activity were investigated to know the usage of the compounds as herbicides.

목차 Contents

• 1. 서론...12
• 2. 연구방법...14
• 3. 결과...25
• 4. 고찰...36
• 5. 결론...42
• 6. 참고문헌...45
• 제 1 세 부 목 차...47
• 제 2 세부목차...180
• 제 3 세부목차...275
• 제 4 세부목차...359