초록 ▼

항산화성 물질을 생산하여 균체외로 분비하는 Streptomyces속 균주 YS-88-1을 토양으로 부터 분리 선별하였으며 물질의 생산조건, 정제 및 성질, 그리고 균의 동정을 연구한 결과는 다음과 같다.
물질생산에 있어서 탄소원으로는 xylose와 glucose가 가장 우수하였으며 질소원으로서는 beef extract와 peptone의 동량 혼합물이 가장 우수하였고 tryptone도 물질생성이 우수하였다. 그러나 무기태 질소의 경우에는 균의 증식과 물질생성이 거의 이루어지지 않았다. 그리고 아미노산 중 tyrosine,

항산화성 물질을 생산하여 균체외로 분비하는 Streptomyces속 균주 YS-88-1을 토양으로 부터 분리 선별하였으며 물질의 생산조건, 정제 및 성질, 그리고 균의 동정을 연구한 결과는 다음과 같다.
물질생산에 있어서 탄소원으로는 xylose와 glucose가 가장 우수하였으며 질소원으로서는 beef extract와 peptone의 동량 혼합물이 가장 우수하였고 tryptone도 물질생성이 우수하였다. 그러나 무기태 질소의 경우에는 균의 증식과 물질생성이 거의 이루어지지 않았다. 그리고 아미노산 중 tyrosine, histidine, valine, proline 등을 0.01% 정도 첨가하였을 때 생산량이 약 20% 증가하였으나 methionine을 첨가하였을 경우에는 생산량이 약 35%나 감소하였다. 금속이온 중에서 Mn??, Al?? 등을 첨가한 경우에는 물질 생성이 촉진되었고, 물질생산을 위한 최적 pH와 온도는 각각 pH10과 35℃였다. Glucose 3%, beef extract-peptone mixture (1:1) 1%, K?HPO? 0.1%, MgSO?·7H?O 0.05, MnSO ? 0.01, AlCl?·6H?O 0.01 조성이 배지 (pH 10)로 35에서 5일간 배양하였을 때 물질생산이 최대에 달하였다.
배양원심액을 DEAE-cellulose column chromatography, butanol과 methanol 추출, silica gel column chromatography (1, 2차)로 수율 약 35%로 정제하였는데 silica gel상에서의 RF치는 pyridine-acetic acid-water (1:1:1), butanol-acetic acid-water (12:3:5), chloroform-butanol-ethanol (1:1:1)계의 전개용매에서 각각 0.6, 0.25, 0.1 이었고 극성이 큰 용액에서는 쉽게 용해하였으며 209와 241nm에서 최대흡광을 나타내었다. 그리고 본 물질은 안정성이 커서 pH 2-21에서 50℃, 1시간 처리하여도 거의 안정하였으며, 121℃에서 30분간 처리한 경우에도 잔존활성도는 약 70%였다.
그리고 본 균주를 동정한 결과 Streptomyces clavier 또는 그 근연균으로 판명되었다.

Abstract ▼

A strain of Streptomyces sp. (YS-88-1), isolated from soil, was able to produce a antioxidative subatance. And the conditions for production, purification procedure and properties of the antioxidant were investigated.
For the production of the antioxidant, xylose and glucose, and same mixture of

A strain of Streptomyces sp. (YS-88-1), isolated from soil, was able to produce a antioxidative subatance. And the conditions for production, purification procedure and properties of the antioxidant were investigated.
For the production of the antioxidant, xylose and glucose, and same mixture of beef extract and peptone was favorable as carbon and nitrogen source, respectively. And the antioxidant synthesis was promoted by the addition of tyrosine, histidine, valine, proline, Mn?? and Al?? , but depressed severely by Ag?, Hg?? and methionine. Optimal initial pH and temperature for the antioxidant production was pH 10 and 35?, respectively. The production of the antioxidant reached at maximal level after 5 days cultivation in the medium containing 3% glucose, 0.5% beef extract, 0.5% peptone, 0.1% K?HPO?, 0.05% MgSO?·7H?O, 0.01% MnSO? and 0.01% AlCl?·6H?O.
The antioxidant was purified from cultured broth by DEAE-cellulose column chromatography, butanol and methanol extraction, 1st and 2nd silica gel column chromatography with yield of about 35%.
The subatance gave a single spot at Rf value 0.6 with pyridine-acetic acid-water (1:1:1,v/v/v),0.25 with n-butanol-acetic acid-water (12:3:5, v/v/v), 0.1 with n-butanol-chloroform-ethanol (1:1:1, v/v/v) on silica gel thin layer chromatography, and had maximum absorption at 209 and 241nm.
The antioxidant was stable in wide pH range from 2 to 12 at 50?, and the activity was decreased about 30% only by the heat treatment at 121? for 30 minutes. The strain used was identified to be Streptomyces clavifer or similar strain by the morphological, cultural, and physiological characteristics.

목차 Contents

• 1. 서 론...9
• 2. 재료 및 방법...11
• 2.1 미생물 균주 및 배양...11
• 2.2 시약...11
• 2.3 항산화력의 측정...11
• 2.4 균체량 측정...12
• 2.5 물질의 정제...12
• 2.6 균의 동정...12
• 3. 결과 및 고찰...13
• 3.1 유용균주의 선별 및 배양...13
• 3.2 항산화성 물질의 생산 조건의 검토...13
• 3.2.1 물질 생산에 미치는 pH의 영향...13
• 3.2.2 배양온도의 영향...14
• 3.2.3 물질생산에 미치는 탄소원의 영향...14
• 3.2.4 물질생산에 미치는 질소원의 영향...15
• 3.2.5 물질생산에 미치는 glucose 와 beef extract-peptone mixture (1:1) 의 농도의 영향...16
• 3.2.6 아미노산 첨가의 영향...16
• 3.2.7 금속이온의 영향...17
• 3.2.8 배양시간에 따른 물질생산...17
• 3.3 항산화성 물질의 정제...18
• 3.3.1 DEAE- cellulose column chromatohraphy...18
• 3.3.2 유기용제 추출...18
• 3.3.3 1차 silica gel column chromatography...19
• 3.3.4 2차 silica gel column chromatography...19
• 3.4 항산화성 물질의 성질...19
• 3.4.1 TLC에 의한 Rf치...19
• 3.4.2 각종 용매에 대한 용해성...20
• 3.4.3 U.V. spectrum...20
• 3.4.4 항산화성 물질의 안정성...21
• 3.5 균의 동정...22