초록 ▼

위장관에서의 분해가 심하고 분자량과 친수성이 커서 경구투여시 체내흡수를 거의 기대할 수 없는 수종의 생리활성 펩타이드류와 위장장애가 큰 비스테로이드성 소염 약물인 플루르비프로펜의 비경구전신 흡수 제제를 설계함을 총괄연구목표로 하였다. Pentapeptide인 생리활성 로이신엔케팔린 (Leu-Enk)과 그 합성 유사체인 [D-알라(2)]-로이신 엔케팔린아미드 (YAGFL)의 비강, 직장 및 질 등을 통한 전신흡수를 증대시키고자 하였다. HPLC법으로 수용액 중에서의 물리화학적 안정성을 검토하여 영향을 고찰하였다. 또한 비강, 직

위장관에서의 분해가 심하고 분자량과 친수성이 커서 경구투여시 체내흡수를 거의 기대할 수 없는 수종의 생리활성 펩타이드류와 위장장애가 큰 비스테로이드성 소염 약물인 플루르비프로펜의 비경구전신 흡수 제제를 설계함을 총괄연구목표로 하였다. Pentapeptide인 생리활성 로이신엔케팔린 (Leu-Enk)과 그 합성 유사체인 [D-알라(2)]-로이신 엔케팔린아미드 (YAGFL)의 비강, 직장 및 질 등을 통한 전신흡수를 증대시키고자 하였다. HPLC법으로 수용액 중에서의 물리화학적 안정성을 검토하여 영향을 고찰하였다. 또한 비강, 직장, 질 등의 점막 추출액 중에서의 Leu-Enk는 6시간 이내에 비강<질<직장 점막순으로 모두 분해되었으며, YAGFL은 24시간후 50％이하로 분해되었다. 경시 잔존량과 그 분해산물을 추적함으로써 그 분해기구는 Leu-Enk의 경우 aminopeptidase류에 의해 주로 분해되었으며 enkephalinase A와 B가 분해에 다소 관여하였으며 YAGFL은 Gly-Phe bond를 절단하는 endopeptidase류에 의해 주로 분해되었다. 이를 바탕으로 아마스타틴(AM), 퓨로마이신, 치오르판, 치메로살(TM), 에테르산(EDTA)등의 효소억제제류의 분해억제 효과를 검토하여 AM/TM/EDTA 또는 TM/EDTA의 2종 및 3종의 혼합효소억제제의 첨가에 의해 각 점막 추출액에서 Leu-ENK와 YAGFL을 24시간 걸쳐 85％이상 안정화시킬 수 있었다. 따라서 혼합 효소억제제와 투과촉진제가 첨가된 조건에서 엔케팔린류의 비강, 직장 및 질 점막 투과시험을 행하였다. 그 결과 Leu-Enk는 효소억제제가 첨가되지 않은 경우 모든 점막에서 투과가 전혀 일어나지 않았으며 혼합 효소억제제(5mM TM/10mM EDTA)의 첨가에 의해 현저한 투과가 일어났으며 그 투과 flux의 크기는 비강>질>직장 순이었다. 더욱 검토된 6종의 투과촉진제중 L-α-리소포스파디딜콜린(LPC)이 첨가된 경우 비강에서 가장 현저한 투과증진(4.5배)을 보였다. 한편 토끼의 혈청 중 Leu-Enk의 분해반감기는 약 2분이었으며 YAGFL은 약 3-4시간이었다. 따라서 YAGFL에 혼합 효소억제제와 LPC를 첨가한 용액을 마우스에 경비투여하고 초산 writhing법에 따라 진통시험을 행하여 YAGFL의 ED(50) 값을 구한 결과 12.59㎍/㎏(mouse)이었다. 이는 몰핀을 피하주사한 경우보다 약 64배 강한 것으로 비교되었다. 또한 decapeptide인 황체호르몬 유리호르몬(LHRH) 및 유사체 ([D-Ala(6)] LHRH)에 대해서 전신흡수를 도모하고자 대체투여경로로 비경구 점막경로에 관해 검토하였다. 점막 균등질액에서 분해속도를 측정한 결과 합성 유사체가 LHRH에 비해 분해에 대해 훨씬 저항성이 컸으며 직장이나 비강 점막에 비해 질 점막에서 분해가 완만하였다. 주 분해산물의 검토로 분해효소는 LHRH의 경우 EP 24.15, EP 24.11 및 ACE 등이 관여하는 것으로 밝혀졌으며 [D-Ala(6)] LHRH의 주 분해효소는 EP 24.11와 EP 24.15이었다. 이러한 효소적 분해는 중쇄지방산염의 첨가로 안정화가 가능하였으며 sodium laurate(0.5％), sodium caprate (1.0％) 및 sodium taurodihydrofusidate(STDHF)가 효과적이었다. 따라서 이러한 첨가제들을 넣고 각 점막에 대해 투과시험을 행한 결과 [D-Ala(6)] LHRH의 점막투과율은 질점막(7％)에서 가장 높았으며 EDTA의 첨가로 투과율이 현저히 증대되어 질 점막이 LHRH류의 투여부위로 적합하였다. LHRH류에 의한 흰쥐의 배란유도 효과를 측정한 결과 STDHF와 EDTA를 병용하여 질 점막으로 투여하였을 때 배란유도효과가 현저히 향상되었다. 더욱 점막 부착성 hydrogel에 sodium laurate(0.5％)를 첨가하여 질투여하였을 때 피하주사시와 동등이상의 배란유도효과를 나타내었다. 한편 소염진통 약물인 플루르비프로펜은 부작용을 경감시키고 치료적 유효성을 증대시키고자 새로운 경피 치료시스템을 설계하고자 하였다. 이의 연구에 필요한 HPLC에 의한 방출액과 혈중 약물 분석법을 확립하였으며, 이의 처방화에 있어서 겔제제로부터 약물방출에 미치는 약물농도, 온도, pH, 기타 첨가제의 영향을 검토하였다. 더욱 겔로부터 경피 피부 투과에 미치는 처방인자를 검토하여 최적처방을 설정하였다. 그 결과 최적 투과율을 갖는 처방조성은 겔의 pH가 4.0, pluronic의 함유량이 17.5％, 에탄올 함량이 20％인 것으로 결정되었다. 이 처방의 겔제제를 가지고 항염증효과를 평가한 결과 50㎎을 경피투여하면 24시간 동안 항염증작용이 지속되었으며 이 제제의 경구투여시에 대한 relative equiponderal availibility는 160％이었다. 더욱 FP 겔의 약물동태학적 특성을 검토하기 위해 흰쥐를 사용하여 1％ FP 겔을 약물로서 약 2㎎/㎏의 용량으로 흰쥐의 등부에 경피투여하엿으며 대조군으로 동일량을 정맥투여 및 경구투여하였다. 그 결과 FP의 최고 혈중농도와 최고 혈중농도 도달시간이 경구투여시 9.9㎍/㎖와 0.25시간이었는데 비하여 겔의경피투여시 2.1㎍/㎖와 2시간으로서 겔 제제의 경피투여에 의해 FP가 서서히 흡수되었다. FP 겔의 이 약물의 경구투여시에 대한 상대적 생체이용률은 48.5％이었다. 또한 FP gel의 궤양 야기 정도를 검토한 결과 겔의 형태로 경피투여함으로서 경구투여시의 위자극이 훨씬 적어졌다.

Abstract ▼

To improve the transmucosal delivery of leucine enkephalin (Leu-Enk), [D-ala(2)]-leucine enkephalinamide (YAGFL)luteininzing hormone releasing hormone (LHRH) [D-ala(6)]-LHRH through nonparneteral nasal, rectal and vaginal mucosae of rabbits, degradation, stabilization and permeation studies were car

To improve the transmucosal delivery of leucine enkephalin (Leu-Enk), [D-ala(2)]-leucine enkephalinamide (YAGFL)luteininzing hormone releasing hormone (LHRH) [D-ala(6)]-LHRH through nonparneteral nasal, rectal and vaginal mucosae of rabbits, degradation, stabilization and permeation studies were carried out by HPLC method. And also transdermal gel system of flurbiprofen (FP), an nonsteroidal antiinflammatory drug, was designed, formulated and evaluated biophamaceurically. The degradation of Leu-Enk and YAGFL was observed tofollow the first order kinetics. The degradation half-lives of Leu-Enk in the nasal, rectal and vaginal mucosal extracts were 1.62, 0.37 ad 1.12 hrs and those of YAGFL were 30.55, 9.70 and 6.82 hrs, respectively, indicating Leu-Enk was degraded in a more extensive and rapid manner than YAGFL. But the mucosal and serosal extracts of the same mucosa showed the similar degradation rates for both pentapeptides. The degradation was most rapid in the neutral pH and increasing concentrations of substrates retarded the degradation rates. The major hydrolytic fragments of Leu-Enk were Des-Tyr-Leu-Enk and tyrosine, indicating the enzymatic hydrolysis by aminopeptidases. However, the data also suggested endopeptidases such as dipeptidyl carboxypeptidase and dipeptidyl aminopeptidase could play some role in the degradation of Leu-Enk. On the other hand, the hydrolytic fragments of YAGFL in all the mucosa extracts were mainly Tyr-D-Ala-Gly and Phe-Leu-Amide, demonstrating the hydrolytic break-down by endopeptidases. The degradation pathways were further explored by concomitantly determining the formation of smaller metabolites of primary hydrolytic fragments of Leu-Enk and YAGFL in the mucosa extracts. To inhibit the degradation of Leu-Enk and YAGFL in various mucosa extracts, effects of enzyme inhibitors such as amastatin(AM), puromycin, thiorphan, thimerosal(TM) and EDTA, alone or in combination, and modified cyclodextrins were observed by assaying the pentapeptides staying intact during 24-hr incubation. It was found from the results that mixed inhibitors such as Am(100μM)/TM(0.5mM)/EDTA(10mM) or TM(0.5mM)/EDTA(10mM) provided very useful means for the stabilization in various mucosal extracts. The permeation of Leu-Enk and YAGFL through various mucosae was enhanced in the presence of mixed inhibitors in both donor and receptor cells, showing the rank order of nasal>>vaginal>rectal mucosa. Nasal adminstration of YAGFL with TM/EDTA/LPC exhibited strong analgesic effectin mice. ED?? was found to be 12.59 12.59㎍/㎏ from nonparenteral transmucosal routes, the effects of several protease inhibitors and/or permeation enhancers on their degradation and permeation using hasal, rectal and vaginal mucosae of rabbits. The vaginal membrane showed lowerdegradation and higher permeability of LHRH and ([D-Ala(6)] LHRH than therectal and nasal mucosa. Medium chain fatty acid salts and sodium tauro-24.25-dihydrofusidate (STDHF) significantly inhibited the proteolysis of LHRH. Polyoxyethylene 9-lauryl ether (POE) and β-cyclodextrin showed a small promoting effect on the membrane permeability of [D-Ala(6)]-LHRH, but EDTA showed a significant enhancement. As a reliable bioassay method for [D-Ala(6)]-LHRH, ovulation-inducing effect was measured after vaginal administration in the rat. Ovulation was enhanced by the addition of sodium laurate(0.5％), or STDHF (1％), a protease inhibitor, but was not enhanced by EDTA, a penetration enhancer. On the other hand, coadministration of sodium laurate (0.5％) or STDHF (1％) and EDTA (2％)enhanced the ovulation-inducing effect. These reuslts suggest that the vaginal administration of LHRH and [D-Ala(6)]-LHRH with sodium laurate orSTDHF and EDTA may become an effective method for the transmucosal delivery of [D-Ala(6)]-LHRH. To develop a transdermal delivery system ofFP, gel formulation containing Pluronic F-127 was optimized by evaluating the release and skin permeation properties. The pH of the formula has 4.0, the contents of Pluronic F-127 and ethanol were 17.5 and 20％, respectively. Dorsal application of 50㎎ of 1％ FP gels in rats showedantiinflammatory effect for 24 hr, and the relative equiponderal availibility of FP gels was found to be 160％, compared with oral administration. From the pharmacokinetic study, it was found that the maximum blood level (Cmax) and the time (Tmax) reaching the Cmax was 2.1㎍/㎖ and 2 hr, respectively. The ulcer-inducting effect of FP gelswas very low, comparing with oral administration. These results suggestthat FP gels will be a new and useful dosage form for the long-term therapy of arthritis.

목차 Contents

• 제 1장 서 론...14
• 제 2장 연구방법...16
• 제 1절 생리활성 로이신엔케팔린 및 유사체의 경점막 수송에 관한 연구...16
• 제 2절 황체호르몬$\cdot$유리호르몬 (LHRH) 동족체들의 새로운 경점막 제제의 개발 및 생물약제학적 평가...16
• 제 3절 플루르비프로펜의 경피치료시스템의 설계 및 평가...16
• 제 3장 결과 및 고찰...17
• 제 1절 생리활성 로이신엔케팔린 및 유사체의 경점막 수송에 관한 연구...17
• 제 2절 황체호르몬-유리호르몬 (LHRH) 동족체들의 새로운 경점막 제제의 개발 및 생물약제학적 평가...24
• 제 4 장 결 론...36
• 제 1절 생리활성 로이신엔케팔린 및 유사체의 경점막 수송에 관한 연구...36
• 제 2절 황체호르몬-유리호르몬 (LHRH) 동족체들의 새로운 경점막 제제의 개발 및 생물약제학적 연구...38
• 제 3절 플루르비프로펜 (FP) 겔제제의 피부투과 특성 및 항염중 효과...40
• 제 5 장 참고문헌...42
• 제1 세부목차...45
• 제1장 완충 수용액중 로이신엔케팔린 및 [D-알라]-로이신엔케팔린아미드의 안정화...50
• 제1절 서론...50
• 제2절 연구방법...50
• 제3절 결과 및 고찰...52
• 제4절 결론...66
• 참고문헌...67
• 제2장 토끼의 수종 점막 추출액중 로이신엔케팔린 및 [D-알라$^2$]-로이신 엔케팔린아미드의 효소적 분해특성...70
• 제1절 서론...70
• 제2절 연구방법...71
• 제3절 결과 및 고찰...73
• 제 4 절 결 론...93
• 참 고 문 헌...95
• 제 3 장 효소 억제제를 이용한 토끼의 점막 추출액중 로이신엔케팔린 및 [D-알라$^2$]-로이신 엔케팔린아미드의 안정화...97
• 제 1 절 서 론...97
• 제 2 절 연구방법...97
• 제 3 절 결과 및 고찰...99
• 제 4 절 결론...120
• 참고문헌...121
• 제 4 장 흔합 효소억제제 및 투과촉진제에 의한 Leu-Enk 및 YAGFL의 점막투과 증진...122
• 제 1 절 서론...122
• 제 2 절 연구방법...122
• 제 3 절 결과 및 고찰...124
• 제 4 절 결 론...145
• 참 고 문 헌...147
• 제 5 장 Leu-Enk 및 YAGFL외 혈중거동 및 비강 투여시의 진통효과...149
• 제 1 절 서 론...149
• 제 2 절 연구방법...149
• 제 3 절 결과 및 고찰...153
• 제 4 절 결 론...163
• 참 고 문 헌...164
• 제2 세부목차...166
• 제 1 장 서 론...168
• 제 1 절 연구배경...168
• 제 2 절 연구목적...168
• 제 2 장 연구방법...170
• 제 1 절 시약...170
• 제 2 절 실험동물...170
• 제 3 절 각 점막 homogenate중에서 LHRH 및 [D-Ala$^6$] LHRH의 안정성 시험...170
• 제 4 절 각 점막 homogenate중에서 LHRH 및 [D-Ala$^6$] LHRH 분해산물의 아미노산 조성의 확인...171
• 제 5 절 점막투과시험...173
• 제 6 절 Polymer를 이용한 점막 부착성 hydrogel의 제조 및 용출시험...174
• 제 7 절 배란 유도효과 시험...174
• 제 3 장 결 과...176
• 제 1 절 LHRH 및 [D-Ala$^6$] LHRH 분해산물의 아미노산 조성 확인 결과...176
• 제 2 절 각 점막 homogenate에서 LHRH 및 [D-Ala$^6$] LHRH의 안정성 시험 결과...180
• 제 3 절 [D-Al_a$^6$] LHRH의 점 막 투과촉진...183
• 제 4 절 LHRH/[D-Ala$^6$] LHRH의 배란유도효과 촉진...184
• 제 5 절 질점막부착성 hydrogel 제제의 개발...188
• 제 4장 고찰...191
• 제 5장 결 론...194
• 제 6 장 참고문헌...196