초록 ▼

pseudomonas syringae pv. tavaci 는 tabtoxin 을 생성하며 숙죽식물인 담배와 콩잎에 야화병을 유발시킨다. Host 는 phage 에 감염되었을때 온도에 의해 phage 의 life cycle 을 조절할 능력이 있으며, 또한, 균주가 용원화 되었을때 더 심각한 야화병을 유발한다는 것을 근거로 본 연구는 자연계에서 phage를 분리하여 phage 의 특성을 검토하고 phage 가 host에 미치는 유전적 기능에 대해 검토 하였다. 분리된 phage 는 직경이 0.1-0.2㎛의 turbid 한 phage

pseudomonas syringae pv. tavaci 는 tabtoxin 을 생성하며 숙죽식물인 담배와 콩잎에 야화병을 유발시킨다. Host 는 phage 에 감염되었을때 온도에 의해 phage 의 life cycle 을 조절할 능력이 있으며, 또한, 균주가 용원화 되었을때 더 심각한 야화병을 유발한다는 것을 근거로 본 연구는 자연계에서 phage를 분리하여 phage 의 특성을 검토하고 phage 가 host에 미치는 유전적 기능에 대해 검토 하였다. 분리된 phage 는 직경이 0.1-0.2㎛의 turbid 한 phage 로서 pH에 대한 안정성은 pH 6-9의 조건에서 비교적 안정 하였다. 본 phage 는 배양온도에 따라서 morphology 가 다르게 나타났는데 20℃, 30℃의 온도에서는 turbid plaque 를 나타내는 반면 0℃, 10℃에서 배양한 결과는 clear plaque 를 나타 내었다. 이들 plaque 내의 phage 를 숙죽균과 함께 숙주 식물인 콩의 잎에 접종해 본 결과 turbid plaque 의 phage 는 숙주균 자체만의 toxin 작용보다 더 큰 감염 halo를 나타내었으나 clear plaque 에서의 접종은 숙주균의 작용보다 작고 희미한 halo를 보였다. Tox?균쥬는 phage 가 감염되어 lysogen 상태에 있을때 병원성을 유발 하였다. 이 결과로 phage의 감염이 p.syringae pv. tabaci가 숙주 식물인 콩에서의 toxin 생성에 관계됨을 알 수 있었다. Southern hyㅠbrization을 통해 EcoRI digested Tox? plasmid와 EcoRI digested Tox? genomic DNA 중 동일위치의 4개의 fragment 가 phage DNA와 관련이 있음을 알 수 있었다. Tox? strain 에서만 phage 가 induction 되는 것으로 보아 Tox?균주에는 phage genome 이 포함 되어 있는 것 같았다. 그러나 induction 된 phage 의 모양과 구조 단백질 양상은 Ps90과는 차이가 있었다.

Abstract ▼

Pseudomonas syringae pv. tabaci produses tabtoxin and causes wildfire disease on tabacco and bean plant. Being infected by this strain can regulate life cycle of phage according to environmental temperature. Bacteriophage of p. syringae pv. tabaci were isolated from soil and sweage by top agar overl

Pseudomonas syringae pv. tabaci produses tabtoxin and causes wildfire disease on tabacco and bean plant. Being infected by this strain can regulate life cycle of phage according to environmental temperature. Bacteriophage of p. syringae pv. tabaci were isolated from soil and sweage by top agar overlay method. plaque of isolated phage were turbid and its diameter was 0.1-0.2 cm. The stabilitiy range of pH was betweem 6.0 and 9.0 and stability of temperature was upto 30℃ and inactivated at 70℃. Genetic material of isolated phage was DNA which its size was about 30 kilobase pairs. Whem the host strain that contained phage were inoculated on the bean plants, the turbid plaque increased virulence of host strain on bean plants. But clear plaque from incubated at 0℃ and 10℃ inhibited tabtoxin production in p. syringae pv. tabaci. AS a result, phage infection related to the ability of its host strain to produce tabtoxin in p. syringae pv. tabci. By lysogenization this strain cause more serious wildfire disease, and lysogenizarion in Tox?strain restore toxin production and pathogenesis, therefore we found phage DNA involve with pathogenecity. By southern hybridiation 4 fragment of EcoRI digested Tox? plasmid and EcoRI digested Tox? genomic DNA is related with phage DNA. And onloy in Tox? strain, phage was induced by mitomycin C. Thus, we strongly suggest that hybridized fragment is a part of phage DNA.

목차 Contents

• I.서론...11
• II.연구내용 및 방법...17
• 1. 사용 균주 및 phage...17
• 2. 사용배지와 완충 용액...17
• 3. 시약 및 제한효소...18
• 4. Phage의 분리...20
• 5. Phage의 특성조사...20
• 5.1 생리적 특징...20
• 5.1.1 pH 안정성...20
• 5.1.2 온도 안정성...20
• 5.1.3 흡착률...22
• 5.1.4 흡착조건...22
• 5.2 유전적 특성...22
• 5.2.1 Phage DNA 의 분리...23
• 5.2.2 Phag chromosome의 특성...23
• 6. Phage purification...25
• 7. Plasmid 의 분리와 정제...26
• 8. Restriction analysis...27
• 9. Phage gene cloning...27
• 10. Transformation...27
• 11. Phage의 감염과 숙주균의 toxin생성관계 검토...28
• 11.1 숙주균의 toxin 생성능 검토...28
• 11.2 Phage의 감염과 toxin 생성관계...28
• 12. Plant assay...28
• 13. Toxicity Test...29
• 14. Genomic DNA의 분리...29
• 15. Agarose gel electrophoresis...30
• 16. Southern hybridization...31
• 16.1 Transfer of DNA to nitrocellulose filter...31
• 16.2 Photobiotin labeling method...31
• 16.3 Hybridization...31
• 16.4 Detection methud...33
• 17. Phage induction...34
• 17.1 자외선과 열충격에 의한 방법...34
• 17.2 Mitomycin C 에 의한 방법...34
• 18. Electron microscopy...34
• 19. Phage 의 구조 단백질의 분석...35
• III. 결과 및 고찰...36
• 1.Phage의 분리...36
• 2. Phage의 특성...36
• 2.1 형태적 특성...36
• 2.2 생리적 특성...36
• 2.2.1 pH안정성...36
• 2.2.2 온도안정성...36
• 2.2.3 흡착률...40
• 2.2.4 흡착조건...40
• 2.2.5 배양온도의 영향...42
• 2.3 유전적 특성...43
• 3. Phage의 감염과 숙주균의 toxin 생성관계...43
• 3.1 숙주균의 toxin 생성능 검토...43
• 3.2 Phage의 감염과 toxin 생성관계 검토...45
• 4. Phage gene cloning과 toxicity test...45
• 5. $Tox^-$ Lysogen의 성질 검토...47
• 6. $Tox^+$와 $Tox^-$균주의 plasmid 간의 유전적 연관성...47
• 6.1 Restriction pattern 의 비교...47
• 6.2 Southern hybridization에 의한 방법...47
• 6.2.1 Phage DNA를 probe로 하였을 경우...47
• 6.2.2 $Tox^+$ plasmid와 $Tox^-$plasmid를 probe로 한 southern hybridization...51
• 7. Phage chromosome과 $Tox^+$, $Tox^-$ genomic DNA 사이의 유전적 상관관계...51
• 8. $Tox^+$와 $Tox^-$ 균주에서의 phage induction...51
• IV . 참고문헌...56