초록 ▼

Brevibacterium albidum과 Proteus vulgaris의 게놈 DNA로 부터 대장균의 rnpA49 돌연변이를 보완작용할 수 있는 유전자를 포함하고 있는 염색체 부위를 얻었다. 이때 사용된 선택방법은 대장균에서 이종의 유전자선물로 부터 효소활성이 있는 잡종 RNase P 효소를 형성한다는데 기초를 두고 있다. 이중 B. albidum DNA 부위는 대장균의 rnpB 유전자와 달리 세포내에서 많은 수로 존재하는 플라스미드 상에 있을 때 대장균의 rnpB709 돌연변이를 보완작용하는 활성이 2.75 kb DNA 영역에

Brevibacterium albidum과 Proteus vulgaris의 게놈 DNA로 부터 대장균의 rnpA49 돌연변이를 보완작용할 수 있는 유전자를 포함하고 있는 염색체 부위를 얻었다. 이때 사용된 선택방법은 대장균에서 이종의 유전자선물로 부터 효소활성이 있는 잡종 RNase P 효소를 형성한다는데 기초를 두고 있다. 이중 B. albidum DNA 부위는 대장균의 rnpB 유전자와 달리 세포내에서 많은 수로 존재하는 플라스미드 상에 있을 때 대장균의 rnpB709 돌연변이를 보완작용하는 활성이 2.75 kb DNA 영역에 존재한다는 것을 밝혔다. 반면 P. albidum DNA 부위는 E. coli rnpB 유전자와 유사하게 대장균의 rnpA49 및 rnpB709 돌연변이를 보완할 수 있었고 E. coli rnpB 유전자와 cross-hybridization 하였을 뿐 아니라 결정된 DNA 염기결합 순서를 분석하였을 때 E. coli의 rnpB 유사하다는 것을 알 수 있었다. 이 결과는 클로닝된 P. vularis의 유전자는 rnpB 유전자라는 것을 나타낸다.

Abstract ▼

The chromosomal region containing the gene capable of complementing the E. coli rnpA49 mutation was obtained from the genomic DNA of Brevibacteriu alhidum and Proteus vulgaris. The selection procedure was bsed on the formation of an enzymatically functional hybrid RNase P enzyme by heterogous gene p

The chromosomal region containing the gene capable of complementing the E. coli rnpA49 mutation was obtained from the genomic DNA of Brevibacteriu alhidum and Proteus vulgaris. The selection procedure was bsed on the formation of an enzymatically functional hybrid RNase P enzyme by heterogous gene products in E. coli. Unlike the E. coli rnpB gene, the B. albidum DNA region on a multicopy plasmid did not complement the E. coli rnpB709 mutation. The deletion analysis indicates that the rnpA49-complementing activity resides in the 2.75 kb region. On the other hand, the cloned P. vulgaris DNA was cross-hybridized with E. coli rnpB gene, and the determined DNA sequences showed a significant homology with the corresponding sequences of the E. coli rnpB gene. These results indicate that the cloned P. vulgaris gene is the rnpB gene.

목차 Contents

• 목 차 (본문)...5
• 1. 서 론...12
• 2. 재료 및 방법...16
• 2-1. 재료...16
• 2-1-1. 효소 및 시약...17
• 2-1-2. 박테리아 균주, 플라스미드 및 배양...17
• 2-2. 방법...17
• 2-2-1. chromosomal DNA의 분리정제...18
• 2-2-2. bacterial genomic library의 제조...18
• 2-2-3. rnpA49 mutation을 complementation 할 수 있는 clone의 단리...19
• 2-2-4. photobiotin 을 이용한 핵산의 labeling...19
• 2-2-5. dot hybridization...20
• 2-2-6. biotinylated probe의 발색검출...20
• 2-2-7. 플라스미드 DNA의 nick translation...21
• 2-2-8. Southern blot...21
• 2-2-9. DNA sequencing...22
• 3. 결과...22
• 3-1. E. coli rnpa49 mutation을 complementation 할 수 있는 clone들...22
• 3-2. 클로닝된 유전자의 bacterial source...23
• 3-2-1. 플라스미드 p7A 의 bacterial source...23
• 3-2-2. 플라스미드 p22A 의 bacterial source...23
• 3.3. 제조합 DNA의 제조 및 제한지도의 작성...25
• 3-3-1. p7A에 존재하는 insert DNA의 subcloning...25
• 3-3-2. p22A의 제한지도 작성 및 deletion 플라스미드의 제조...27
• 3-4. 클로닝된 유전자에 의한 E.coli rnp mutant strain 들의 complementation...35
• 3-5. 박테리아에서 클로닝된 rnp 유전자와 E. coli rnp 유전자 사이의 DNA sequence homology...35
• 3-6. DNA sequence 의 결정...37
• 4. 고찰...39
• 5. 인용문헌...46
• 6. 논문발표실적...51
• 7. 배출실적...57