초록 ▼

Opioid 수용체에는 μ, δ, κ의 세가지 주요한 형태가 있는 것으로 알려져 있으며, 수용체 동정기법의 발달과 선택적인 약물의 개발로 각 opioid 수용체의 subtypes이 존재를 시사하는 많은 실험적 근거가 제시되어 opioid 수용체의 multiplicity 개념이 굳어져 왔던 바, κ 수용체에 있어서도 그 subtypes, κ? 및 κ?의 존재에 대한 많은 증거가 제시되고 있다. 그런데 κ? 수용체에 대한 선택적인 agonist 또는 antagonist가 밝혀지지 않고 있다. 따라서 본 연구에서는 이 수용체에 대한

Opioid 수용체에는 μ, δ, κ의 세가지 주요한 형태가 있는 것으로 알려져 있으며, 수용체 동정기법의 발달과 선택적인 약물의 개발로 각 opioid 수용체의 subtypes이 존재를 시사하는 많은 실험적 근거가 제시되어 opioid 수용체의 multiplicity 개념이 굳어져 왔던 바, κ 수용체에 있어서도 그 subtypes, κ? 및 κ?의 존재에 대한 많은 증거가 제시되고 있다. 그런데 κ? 수용체에 대한 선택적인 agonist 또는 antagonist가 밝혀지지 않고 있다. 따라서 본 연구에서는 이 수용체에 대한 선택적인 결합자를 모색하고, opioid κ?과 κ? 수용체에서의 신호전달에 관한 지견을 얻고자 하였다. Opioid μ와 δ수용체를 각 수용체의 선택적 작용약물인 DAMGO와 DPDPE로 봉쇄한 상태에서 [?H]diprenorphine은 백서와 기니픽의 대뇌피질 세포막표본에서 opioid κ 수용체를 표지하였다. 경쟁적 수용체 결합실험에서 [?H]diprenorphine은 백서와 기니픽의 대뇌피질에서 각 한 종류의 결합부위를 나타내었고, 그 Ki치는 서로 다르므로써 κ? 그리고 κ? 수용체를 각각 표지하였다. 두 종의 표본에서 WIN4441의 (-)와 (+)이성질체의 Ki치가 유의한 차이를 보였다. Bremazocine, (-)ethylketocyclacine, (-)cyclazocine, 그리고 nor-binaltorphimine 등은 백서와 기니픽 대뇌피질에서 [3H]diprenorphine의 결합을 효과적으로 억제하였으며, 그 억제 정도는 기니픽에서 더욱 현저하였다. U-69,593, U-50,488H 그리고 dynorphine A(1-8)의 [?H]diprenorphine 결합을 기니픽에서는 효과적으로 억제하였으나, 백서에서는 억제치 못하였다. Nor-binaltorphimine과 dynorphin A(1-8)의 Ki치는 백서와 기니픽에서 시험한 약물중 가장 현저한 차이를 보였다. 또한 본 연구에서 diprenorphine, (-)ethylketo-cyclazocine, bremazocine 그리고 U-69,593의 [?H]diprenorphine 결합억제에 대한 Na ion과 GTPγS의 영향을 검토하였다. 두 종의 대뇌피질표본에서 diprenorphine의 Ki치는 반응액내 Na ion의 제거 또는 GTPγS의 투여에 의해 영향받지 않았으나, κ?과 κ? 수용체의 효현제인 (-)thylketocyclazocine 또는 U-69,593의 Ki치는 유의한 변동을 보였다. 그런데, bremazocine의 효과는 백서표본에서 Na ion 제거와 GTPγS에 의해 영향받지 않았으나, 기니픽 표본에서는 Na ion 제거에 의해 강화되었고 GTPγS에 억제되었다. 본 연구에서 얻은 성적은 백서와 기니픽의 대뇌피질에는 각각 κ?과 κ?의 서로 다른 κ? opioid 수용체의 subtype이 존재하며, bremazocine은 백서 표본의 κ? 수용체의 길항제로써의 특성을 갖고 있음을 시사한다.

Abstract ▼

It has been widely accepted that there are at least 3 major types of opioid receptors in mammalian brain, namely μ, δ and κ. Recently, multiplicity of each type of receptor was established owing to advance of receptor identification technology and development of more selective ligands. Even though

It has been widely accepted that there are at least 3 major types of opioid receptors in mammalian brain, namely μ, δ and κ. Recently, multiplicity of each type of receptor was established owing to advance of receptor identification technology and development of more selective ligands. Even though the presence of subtypes of κ opioid receptor was reported repeatedly, selective agonist or antagonist for κ? site has not been found yet. In this study, we tested the influences of several κ opioid lignads on the [?H]diprenorphine binding in rat and guinea pig cortex mambrane preparations. Using paradigm to block μ and δ opioid receptors with DAMGO (1μM), [?H]diprenorphine labeled κ sites. Competition analysis in both rat and guinea pig cortex has shown a single population of [?H]diprenorphine binding site with different Kd values. There is significant difference in Ki values of WIN44441-3 and WIN44441-2 in both rat and guinea pig cortex. Bremazocine, (-)ethylketocyclacine, (-)cyclazocine, nor-binaltorphimine effectively inhibited the [3H]diprenorphine binding with different Ki values in rat and guinea pig cortex. U-69,593, U-50,488H and dynorphine-A(1-8) did not inhibit the [?H]diprenorphine binding in rat but in guinea pig cortex. These data suggests the existence of receptor heterogeneity in rat and guinea pig cortex. Nor-binaltorphimine was a ligand discriminate the κ? and κ? receptor most effectively. We, also examined the influences of Na ion and GTPγS, a nonhydrolyzable guanine nucleotide analog, on the inhibition of [?H]diprenorphine binding by diprenorphine, (-)ethylketocyclazocine, U-69,593 and bremazocine. By the replacement of NaCl with N-metyl-D-glucamine or addition of GTPγS, Ki values of diprenorphine were not changed and that of etylketocyclazocine were chagned significantly in both rat and guinea pig cortex. The Ki value of bremazocine was decreased by removal of Na ion, and increased by GTPγS, however, was not changed by any one of either. These results suggests that there are 2 kinds of subtypes of κ opioid receptor, κ? and κ?, showing different Ki values for various κ opioid ligands, also, bremazocine possess the antagonistic property at κ? site which is dominant subtype of κ receptor in rat cortex.

목차 Contents

• 표지 ...1
• 요약문 ...3
• SUMMARY ...5
• 목차 ...7
• 1.서론...8
• 2.실험방법...10
• 3.실험 결과...13
• 4.고안...17
• 5.참고 문헌...23
• 6.논문 발표실적 및 계획...41
• 7.학위 배출 실적서...42
• 8.연구비 항목별 집행내역...43