초록 ▼

우리 나라에서 재배되는 호프에서 호프 왜화 바이로이드와 호프잠복 바이로이드가 발견되고 있다. 호프 왜화 바이로이드는 1977년 일본에서 처음으로 보고되었고 1988년 연구자에 의해 HSVd 한국계통의 변이주가 확인되었는데, 아직까지 HSVd는 세계적으로 한국과 일본에서 재배되는 호프에서 알려졌다. 바이로이드 분자는 한 가지 기주식물에서만 발생되지 않고 여러 종류의 다른 기주식물에 감염되기도 하는데, 이들기주식물에 따라 조금씩 염기의 차이가 있는 바이로이드의 변이주들이 알려 지고 있다.잘록(stunt) 증상과 잎말림(

우리 나라에서 재배되는 호프에서 호프 왜화 바이로이드와 호프잠복 바이로이드가 발견되고 있다. 호프 왜화 바이로이드는 1977년 일본에서 처음으로 보고되었고 1988년 연구자에 의해 HSVd 한국계통의 변이주가 확인되었는데, 아직까지 HSVd는 세계적으로 한국과 일본에서 재배되는 호프에서 알려졌다. 바이로이드 분자는 한 가지 기주식물에서만 발생되지 않고 여러 종류의 다른 기주식물에 감염되기도 하는데, 이들기주식물에 따라 조금씩 염기의 차이가 있는 바이로이드의 변이주들이 알려 지고 있다.잘록(stunt) 증상과 잎말림(leaf curling) 증상을 보이며 호프 왜화 바이로이드(HSVd)와호프 잠복 바이로이드(HLVd)에 복합감염된 것으로 확인된 호프 식물을 재료로 바이로이드RNA가 포함된 저분자량의 핵산을 분리한 다음, 6% polyacrylamide gel을 이용한 전기영동방법과 진기추출 (electroelution) 방법으로 바이로이드 RNA 분자만을 순수분리하였다.얻어진 바이로이드 RNA 분자는 이미 알려진 HSVd 한국계통과 HLVd 표준계통의 염기서열을 기초로 제작된 primer와 함께 역전사 효소를 이용하여 바이로이드의 first-strandcDNA를 합성하고 이어서 또 다른 primer와 함께 PCR 방법을 이용하여 겹가닥의 cDNA를합성하였다. 제작된 겹가닥의 cDNA는 pT7T318U Vector에 ligation시켜 호프 왜화 바이로이드와 잠복 바이로이드의 클론을 얻었고, 이것을 바탕으로 바이로이드 분자의 염기서열을 분석하여 이미 알려진 HSVd 한국계통 및 HLVd 표준계통의 염기서열과 차이를 발견하였다.호프 왜화 바이로이드 RNA 분자에서는 한국계통과 비교하여 296번째의 Guanine 염기가 없어진 것을 발견하였고, 호프 잠복 바이로이드 RHA 분자에서는 표준계통과 비교하여 9번 10번의 Uracil과 Adenine이 Adenine과 Uracil로 순서가 바꿔 변이현상을 찾아 내었다.한 종류의 바이로이드 분자라도 기주식물에 따라 다른 변이주가 나타날 수 있다는 것은병원체인 바이로이드의 종류와 서로 다른 기주식물의 상관관계에 의한 것이라고 할 수 있다. 이러한 바이 로이드 유전자의 변화를 찾아내는 유전자 분석실험은 새로운 바이로이드 유전자의 확보는 물론이고 바이로이드의 발생 기원을 추정해 볼 수 있으며, 실험실에서합성된 RNA 분자를 시료로 이용하여 효과적인 바이로이드의 검출과 방제 수단으로 이용할수 있을 것이다.

Abstract ▼

Two viroid of Hop stunt viroid (HSVd) and Hop latent viroid(HLVd) are found in korean hop plants. HSVd was discovered in Japan in 1977 and in1988 HSVd korean strain was discovered in Korea. Until now HSVd was reportedonly in Japan and Korea. Viroid has several varients with some nucleotide

Two viroid of Hop stunt viroid (HSVd) and Hop latent viroid(HLVd) are found in korean hop plants. HSVd was discovered in Japan in 1977 and in1988 HSVd korean strain was discovered in Korea. Until now HSVd was reportedonly in Japan and Korea. Viroid has several varients with some nucleotide differncesaccording to the different host plants.The low molecular weight RNAs containg viroid RNA molecules were extractedfrom hop plants with the symptoms of stunting and curling which were coinfected withHSVd and HLVd. Viroid RNA molecules were purified from the extracted lowmolecular weight RNAs by the methods of 6% polyacrylamide gel electrophoresis andthe electroelution. The bands of circular forms of HSVd and HLVd were detected inthe denaturing polyacrylamide gel electropnoresis conditions.Complementary DNAs to HSVd and HLVd were synthesized with theviroid-specific primers according to the reverse transcription and polymerase chainreaction (RT-PCR). The first strand of HSVd and HLVd cDNA was synthesizedwith MMLV reverse transcriptase and HSVd-specific primers of pHS3 andHLVd-specific primers of pHL3, respectively. The second strand of HSVd and HLVdcDNA were synthesized with another HSVd-specific primer of pHS4 and HLVd-specificprimer of pHL4 by PCR reaction. The synthesized HSVd and HLVd cDNAs wereligased to the pT7T318U vector and the clones were selected successively.As the results of the sequence analysis with the clones of HSVd and HLVdcDNAs, HSVd shows one nucleotide deletion of Guanine at the position of 296comparing with the HSVd korean strain, HLVd shows two nucleotides exchange ofUracil and Adenine into Adenine and Uracil at the position of 9 asnd 10.The occurrence of variation in the viroid RNA molecules could be correlated withthe total environmental effects of different host plants. The genomic analysis of thevariants of viroid RNA molecules takes great advantages of the conservation of usefulgenes, and also into the molecular biolological applications for the detection and controlof viroid RNA molecules.

목차 Contents

• 목차...6
• 1. 서론...7
• 2. 연구방법 및 이론...9
• 3. 연구결과...11
• 1) 호프로부터 바이로이드 RNA분자의 분리...11
• 2) 바이로이드 cDNA 제작과 클로닝...11
• 3) 염기서열 결정과 분석...12
• 4. 고찰...14
• 5. 결론...16
• 6. 인용문헌...17