수입 동물성식품에서 Listeria monocytogenes의 신속검색을 위한 중합효소연쇄반응 기법의 개발 및 적용 Use and Development of Polymerase Chain Reaction for Rapid Detection of Listeria monocytogenes in the Import Animal Foods원문보기
L. monocytogenes는 50년 이상동안 사람 및 동물에서 질병의 원인균으로 알려져 왔으나, 지난 세기에 식품매개를 통한 질병발생으로 공중위생에서 중요한리스테리아증으로 인정되었다. Listeria spp.는 유제품, 식육, 계육 및 채소 등에서 분리된다는 많은 보고가 있고, 특수짙병 발생균은 임산부, 유아 및 면역결핍 환자라고 보고하고 있다. 통상의 미생물 배양법은 Listeria spp.를 입증하고 L.monocytogenes를 동정하는데 약10일, Listeria균이 없는 식품으로 판정하는데는 최소한 5일을
L. monocytogenes는 50년 이상동안 사람 및 동물에서 질병의 원인균으로 알려져 왔으나, 지난 세기에 식품매개를 통한 질병발생으로 공중위생에서 중요한리스테리아증으로 인정되었다. Listeria spp.는 유제품, 식육, 계육 및 채소 등에서 분리된다는 많은 보고가 있고, 특수짙병 발생균은 임산부, 유아 및 면역결핍 환자라고 보고하고 있다. 통상의 미생물 배양법은 Listeria spp.를 입증하고 L.monocytogenes를 동정하는데 약10일, Listeria균이 없는 식품으로 판정하는데는 최소한 5일을 요한다.본 연구에서는 수입 동물성식품에서 L. monocytogenes의 신속검색을 위하여16SrRNA-based primer를 이용하여 보다 효율성이 높은 PCR법을 개발하고져 하였다. 이방법은 우육 및 계육으로부터 swab법과 rinsing법에 의해서 시료를 채취함으로써 DNA 증폭억제물질을 제거할 수 있었고, 이 시료를 직접 PCR한 결과 1 CFU/㎠(g)까지, 증균후의PCR에서는 1 cell까지 검출이 가능하였으며, 검출하는 시간은 각각 6시간과 18시간이 소요되었다.한편 이 PCR법을 수입 우육, 돈육, 계육 및 오리육에 적용하여 L. monocytogenes를검색한 결과 총 117 시료중 직접 PCR법에서는 7예, 증균후의 PCR법은 12예, 그리고 균 분리 배양법은 8예가 양성을 나타내었다. 양성율은 조사한 식육중 돈육에서 비교적 높게나타났고 다른 식육에서는 거의 분리되지 않았다. 분리한 8균주의 serotype을 분류한 바6주가 type 1이었고, 2주는 분류할 수 없었다.본 연구에서 개발한 PCR기법을 수입식육 및 시판식육의 위생검사에는 물론, 리스테리아병의 진단, 식중독 원인식품의 검색 및 L. monocytogenes의 분리동정 등에 널리 활용될수 있을 것으로 기대된다.
Abstract▼
Although Listeria monocytogenes has been recognized as acause of disease in humans and animals for over 50 years, recognization of listeriosis asan important public health problem outbreaks in the past decade. Various reportsshowed that Listeria spp. can occur in dairy products, meat and p
Although Listeria monocytogenes has been recognized as acause of disease in humans and animals for over 50 years, recognization of listeriosis asan important public health problem outbreaks in the past decade. Various reportsshowed that Listeria spp. can occur in dairy products, meat and poultry, and vegetable.Special risk groups are pregnant women, newborns, and immunocompromised patients.Current microbiological culture methods require a minimum of 5 days to declare afood product Listeria free and about 10 days to recognize Listeria spp. and identify L.monocytogenes.A rapid polymerase chain reaction(PCR) method was developed for detection ofListeria monocytogenes in import animal foods. This method used a pair of primersbased on a unique region in the 16S rRNA sequence of L. monocytogenes, which werepreviously reported by Wang et al. In extracts from meat containing L.monocytogenes, amplification of the DNA was strongly inhibited. This in hibitioncould be reduced to sampling by swab and rinsing methods from beef and chickens.This method detected as few as 4 CFU/㎠(g) of L. monocytogenes in direct PCR and asfew as 1 cell in PCR after 12h enrichment and classical culture method. Detectiontime was required, just 6h for direct PCR and 18h for PCR after enrichment.Total of 117 import animal food samples were analyzed by direct PCR method andafter 12h enrichment and compaired with the cultural method results. Seven sampleswere found to be positive for L. monocytogenes in direct PCR method, 12 were foundto be positive in the PCR after 12h enrichment, whereas the classical culture methoddetected only 8. Isolation ratio of L. monocytogenes were relatively higher in pork,and was not isolated in beef, chicken and duck samples. In the distribution ofsreotypes of isolates, of 8 strains L. monocytogenes, serotype 1 were 6 strains and 2strains were not classified.
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