초록 ▼

본 연구과제의 목표는 골교체율 측정을 통한 골다공증의 진단을 위하여, 생화학적 골대사지표를 개발하고 특이성 및 항원성이 뛰어난 펩타이드 항원의 개발과 이에 대한 단일항체의 생산을 통하여 임상적 유용성이 우수한 골다공증 진단 키트를 개발한다. 이를 위하여 골교체율을 잘 반영하고 있는 골 형성지표 단백질인 오스테오칼신에 대한 구조분석을 통하여 epitopedl 될 수 있는 부분 펩타이드 서열을 결정하였다. 합성 펩타이드 항원을 이용하여 단일클론항체들을 제조하고 민감도가 가장 높은 클론을 선별하여 ascite fluid를 생산하여Tdma

본 연구과제의 목표는 골교체율 측정을 통한 골다공증의 진단을 위하여, 생화학적 골대사지표를 개발하고 특이성 및 항원성이 뛰어난 펩타이드 항원의 개발과 이에 대한 단일항체의 생산을 통하여 임상적 유용성이 우수한 골다공증 진단 키트를 개발한다. 이를 위하여 골교체율을 잘 반영하고 있는 골 형성지표 단백질인 오스테오칼신에 대한 구조분석을 통하여 epitopedl 될 수 있는 부분 펩타이드 서열을 결정하였다. 합성 펩타이드 항원을 이용하여 단일클론항체들을 제조하고 민감도가 가장 높은 클론을 선별하여 ascite fluid를 생산하여Tdmaumouse 마리당 59번 항체는 5.6 mg, 76번 항체는 4.15mg을 정제하였다. Isotype 결정을 위해 49, 76번 항체를 분석한 결과 59번 항체는 IgG1 type, 76번 항체는 IgM type으로 판명되었다. Sandwich ELISA 방법을 이용한 epitope 분석 결과 두 종류의 정제한 단일클론항체가 동일 epitope을 가지는 것으로 나타났다. 면역분석법으 개발하기 위한 항원의 고정체에의 부착농도를 정하기 nld해 다양한 조건으로 시도하였으며 임상에서 사용 가능한 발색정도를 보이는 조건을 조사하였다 항원 5ng을 coating 하는 경우에 sample의 오스테오칼신을 1-32ng/ml사이에서 처리하여도 적절한 발색도의 변화가 발생하였다. 이 경우 항체를 100ng/ml로 처리하는 것이 가장 직선적인 그래프를 얻을 수 있었다. 결정된 적정 coating 항원의 농도와 항체의 비율을 조정하여 최적화된 진단 키트의 표준곡성을 작성하였다. 시험용 진단 키트를 이용하여 희석 osteocalcin의 검출에 성공하였으며 샘플 오스테오칼신의 농도를 변화시킴에 따라 직선형의 그래프를 얻을 수 있었다. 기저치 골대사지표의 확립을 위해 20세부터 68세까지 건강한 여성의 혈청 오스테오칼신 농도는 평균 5.10±2.07ng/ml로 나타났다. 폐경전 여성의 오스테오칼신 농도의 평균값은 4.78±1.4ng/ml이었으며 폐경후 여성은 5.67±2.46 ng/ml로 나타났다.

Abstract ▼

The objective of this project is development of osteoporosis diagnostic kit using monoclonal antibodies against antigenic peptide which is developed from biochemical bone markers to measure the bone turnover rate. Peptides to the epitope were determined through the analysis of sequence of osteocalc

The objective of this project is development of osteoporosis diagnostic kit using monoclonal antibodies against antigenic peptide which is developed from biochemical bone markers to measure the bone turnover rate. Peptides to the epitope were determined through the analysis of sequence of osteocalcin which is a biochemical bone formation marker. Monoclonal antibodies were made using synthetic peptides as immunogen. Most sensitive clones were selected clones were selected and antibodies were purified from ascite fluid. 5.6 mg of #59 antibody and 4.15 mg of #76 antibody was obtained per mouse. Ig type of #59 antibody was proved tobe IgG1 and #76 antibody was IgM. They appeared to have same epitope from the analysis using sandwich ELISA method. In the development of direct competitive immunoassay, optimum amount of coating antigen was 5 ng with 1-32 ng/ml of sample osteocalcin, and most linear graph could be obtained when the 100ng/ml of antibody was treated. Standard curve was determined using test it and linear graph was shown according to the concentration of sample osteocalcin. In the test with 240 Korean women aged from 20 to 68, normal serum concentration of osteocalcin was 5.10±2.07 ng/ml. Average concentration of osteocalcin of pre-menopausal women was 4.78±1.74 ng/ml and that of menopausal women was 5.67±2.46ng/ml.

목차 Contents

• 총괄연구개발과제 연구결과...6
• 1. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표...6
• 2. 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 결과...9
• 3. 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...10
• 4. 총괄연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...12
• 5. 총괄연구개발과제의 활용계획...12
• 제1세부연구개발과제 연구결과...14
• 1. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...15
• 2. 제1세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...16
• 3. 제1세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...21
• 4. 제1세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...29
• 5. 제1세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...30
• 6. 제1세부연구개발과제의 활용계획...31
• 7. 참고문헌...31
• 제2세부연구개발과제 연구결과...33
• 1. 제2세부연구개발과제의 최종 연구개발 목표...34
• 2. 제2세부연구개발과제의 연구대상 및 방법...35
• 3. 제2세부연구개발과제의 최종 연구개발결과...36
• 4. 제2세부연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...38
• 5. 제2세부연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...39
• 6. 제2세부연구개발과제의 활용계획...40