초록 ▼

표면항원 유전자가 재조합된 재조합 대장균을 이용한 발효시에 목적산물의 생산수율을 높이기위해 다음과 같은 연구들을 수행하였다. 1) 온도에 의해 유전자발현을 조절하는 방식의 숙주세포벡터시스템을 이용하여 발현유도시의 생성물의 증가를 조사하였다. 2) 유전자 발현 유도시기의 최적화를 위해 대수증식기의 초기, 중기, 말기에 발현을 유도하여 목적산물의 생성량을 비교하였다. 3) 목적산물을 고율로 생산하면서 아울러 생산된 단백지이 안정하게 유지될수 있는 온도를 찾기위해 배양온도의 최적화를 시도하였다. 4) 재조합미생물에 함유된 플라스미

표면항원 유전자가 재조합된 재조합 대장균을 이용한 발효시에 목적산물의 생산수율을 높이기위해 다음과 같은 연구들을 수행하였다. 1) 온도에 의해 유전자발현을 조절하는 방식의 숙주세포벡터시스템을 이용하여 발현유도시의 생성물의 증가를 조사하였다. 2) 유전자 발현 유도시기의 최적화를 위해 대수증식기의 초기, 중기, 말기에 발현을 유도하여 목적산물의 생성량을 비교하였다. 3) 목적산물을 고율로 생산하면서 아울러 생산된 단백지이 안정하게 유지될수 있는 온도를 찾기위해 배양온도의 최적화를 시도하였다. 4) 재조합미생물에 함유된 플라스미드의 안정성을 20~30세대에 걸쳐 조사하였다.

Abstract ▼

The goal of this project is to optimize the production process of Hepatitis B vaccine from a genetically manipulated strain of Escherichia coli. In this study, optimal conditions for the fermentation of recombinant E. coli which contains the gene of HB surface antigen were investigated. Following

The goal of this project is to optimize the production process of Hepatitis B vaccine from a genetically manipulated strain of Escherichia coli. In this study, optimal conditions for the fermentation of recombinant E. coli which contains the gene of HB surface antigen were investigated. Following points were emphasized during the experimental step ; i) The increase of product titre according to the appropriate induction scheme of gene expression in the recombinant microorganism. In the system investigated, the gene expression was regulated by temperature-sensitive CI gene. ⅱ) For the optimization of induction time of gene expression, the productivities were compared when gene expression was induced at initial, mid-and late logarithmic growth phase. iii) Optimization of culture temperature was performed for both productivity and stable maintenance of product protein. iv) Plasmid stability was analyzed for 20-30 generations. From the results, the efficiency of gene expression and productivity were observed to be regulated during the fermentor operation. Low plasmid stability, however, was the major difficulty for the operation. Appropriate choice of host-vector system was therefore considered one of the most important factors for the fermentation system of rDNA microorganisms. Optimal temperature strategy, mode of fermentor operation for maximizing the productivity of rDNA proteins are further to be investigated.

목차 Contents

• 제 1 장 서 론...13
• 제 1 절 연구개발의 목적과 범위...13
• 제 2 절 B형 간염백신 유전자의 특성...16
• 제 3 절 재조합미생물 배양에 있어서의 공정변수...18
• 제 2 장 실험재료 및 방법...34
• 제 1 절 실험재료...34
• 1. 숙주세포...34
• 2. Plasmid...34
• 3. Chemicals...34
• 4. 배지의 조성...35
• 제 2 절 실험방법...35
• 1. 유전자발현 유도방법...35
• 2. 배양방법...36
• 3. Assay method...38
• 4. 재조합세포의 안정성...41
• 제 3 장 결과 및 고찰...44
• 제 1 절 사용된 숙주-벡터의시스템...44
• 제 2 절 MH3000/pCQV2(lacZ)의 배양과 발현...47
• 제 3 절 MH3000(pRKCI857)숙주세포의 배양...49
• 제 4 절 MH3000(pRKCI857)/pAS1(lacZ)세포의 발 현유도시기의 최적화...50
• 제 5 절 MH3000(pRKCI857)/pHBSC40세포 배양온도의 최적화...54
• 제 6 절 재조합 세포의 비성장속도...58
• 제 7 절 재조합 세포의 안정성...59
• 1. TK1046재조합 세포의 안정성...59
• 2. MH3000(pRKCI857)재조합 세포의 안정성...59
• 제 4 장 결 론...65
• 제 5 장 요 약...66
• 제 6 장 참 고 문 헌...68